Получение монозиготных близнецов
1 Получение монозиготных близнецов
Близнецов можно разделить на два типа - двуяйцовые, или дизиготные, и однояйцовые или монозиготные. Следовательно, природа близнецов является двойственной. Так двуяйцовые близнецы возникают в результате оплодотворения двух яйцеклеток разными сперматозоидами. Вероятность рождения разнояйцовых близнецов считают обусловлена множественной овуляцией или полиовуляцией, характерной для многоплодных животных,
Возникновение монозиготных близнецов считают происходит на основе разделения зиготы на две части на ранних стадиях дробления. При этом исходят из того, что ядро каждого бластомера по своим потенциям развития идентично ядру зиготы. Следовательно, все соматические клетки, сформированные из зиготы в процессе развития эмбриона обладают одинаковым набором хромосом. Другими словами, возникновение монозиготных близнецов связано с клонированием генотипов. Принципиальный механизм спонтанного возникновения монозиготных двоен может быть использован для искусственного получения однояйцовых двоен, представляющих собой генетические копии.
Следовательно, искусственное получение однояйцовых близнецов на основе микроманипуляции с ранними эмбрионами находит в воспроизводстве сельскохозяйственных животных большое практическое значение.
Первые работы по искусственному получению идентичных двоен у млекопитающих на основе микроманипуляций с разными эмбрионами на двухклеточной стадии развития были проведены на кроликах. При этом было доказано, что каждый изолированный эмбрион способен развиваться в полноценных организмах. Из трансплантированных половинок зиготы были получены живые кролики. Проведённые многочисленные эксперименты показали, что разделение зиготы на два самостоятельных эмбриона может произойти на стадии морулы или ранней бластоцисты. Полученные результаты были проверены на сельскохозяйственных животных - овцах, крупном рогатом скоте и свиньях с одновременным усовершенствованием техники деления эмбрионов, находящихся на стадиях морулы и бластоцисты. Хорошие результаты по пересадке половинок эмбрионов были достигнуты американскими учёными, которые получили среднюю стельность коров-реципиентов 60%.
В результате проведённых исследований был разработан простой для практического использования метод получения однояйцовых двоен. В соответствии с этим методом 6,5.. .8 сут эмбрионы находятся в стадии морулы или бластоцисты, разрезают и после упаковки половинок в свободные прозрачные оболочки трансплантируют гормонально подготовленным самкам-реципиентам. Доказано также, что возможно трансплантировать половинки эмбрионов без упаковки их в прозрачную оболочку. Для деления эмбрионов требуется лишь один микроинструмент. На деление одной бластоцисты затрачивается всего одна минута. При этом наиболее пригодными в практике животноводства для трансплантации являются половинки эмбрионов 8-суточного возраста./2/
2 Раннее определение пола у эмбрионоДля определения пола эмбрионов, находящихся на предымплан-тационных стадиях развития, разработаны четыре метода: цитогенетический; иммунологический; идентификации У-хромосомы с помощью зондов ДНК (генно-инженерный); определение сцепленных с Х-хромосомой ферментов (биохимический).Цитогенетическ
Иммунологический метод. К перспективным направлениям исследований в определении пола ранних эмбрионов относится иммунологическая биотехнология. Установлено, что на поверхности клеток эмбрионов мужского пола в отличие от женских находятся специфические белки H - У- антигены. Гены этих специфических для мужского пола белков находятся только в Y-хромосоме.
Можно сказать, что H – Y -антигены выступают в роли генетических маркеров мужского пола. Однако обнаружить эти антигены очень трудно. Сложность идентификации H – Y -антигенов заключается в том, что реакция образования антител в ответ на введение типичного антигена гетерогенна. Использование в стандартных наборах обычных антисывороток к поверхностным белкам эмбрионов, как показали исследования, не является эффективным методом определения H - У-антигенов. Лишь после разработки способа конструирования гибридом, производящих высокоспецифические антитела, последние стали эффективно использовать для разделения и очистки антигенов.
Так, использование флюоресцирующих моноклональных Н-У-антител против H - У-антигенов позволяет выявить их у эмбрионов, находящихся на 8—16-клеточной стадии развития. Точность метода 80-85 %. Продолжительность определения 2—3 ч.
Идентификация У-хромосомы с помощью зондов ДНК. Суть этого метода заключается в следующем: из морулы или ранней бластоцисты берут 10-15 клеток. Из них извлекают ДНК и анализируют ее с помощью Y-специфического, радиоактивно маркированного зонда. Точность метода для оценки пола эмбрионов крупного рогатого скота 95-100%.
Недостаток метода в том, что для определения пола необходимы большие затраты времени (8—10 суток). Поэтому эмбрионы нужно замораживать.
По оценке специалистов, метод определения пола эмбрионов с помощью специфических для У-хромосомы зондов ДНК наиболее перспективен в животноводстве, особенно в скотоводстве. В 1987 г. в США были получены телята с заранее пргнозируемым полом. Пол эмбрионов определяли по наличию или отсутствию У-хромосомы с помощью зондов ДНК. У всех 32 плодов, извлеченных из коров-реципиентов на 60-й день стельности, пол соответствовал результатам предварительного анализа зондом ДНК.
Определение сцепленных Х-хромосомой ферментов. Этот метод определения пола эмбрионов млекопитающих основан на установлении метаболической активности сцепленных с Х-хромосомой ферментов. На эмбрионах мыши с помощью колориметрического теста была установлена метаболическая активность фермента глюкозы-6-фос-
3 Использование сексированного семениВ конце XX века в США, в лаборатории ХУ Incorporation, была разработана методика разделения семени по полу. Она основывается на том, что половые гаметы (спермии) быков содержат гаплоидный набор хромосом. То есть одни половые гаметы несут Х_хромосому, а другие — У, и они содержат ДНК на 4% меньше, чем сперматозоиды с Х -_хромосомой. После окрашивания хромосом выявили, что гаметы с х поглощают на 4% больше специального флуоресцентного красителя, от количества которого зависит уровень свечения, возникающего при прохождении потока спермиев через лазерный источник света и улавливаемого компьютером. Когда поток спермиев пропускается через биметаллические пластины с разной полярностью, сперма сортируется на х_ и у_содержащие половые гаметы соответственно их заряду./6/
В качестве флуоресцентного витального красителя используют нетоксичный краситель Hoechst 33342, Sigma-Aldrich, Munchen, Germany.
Разделяемая по полу сперма проходит через проточный цитометр под определенным давлением. При этом создаются такие условия, чтобы отдельный сперматозоид содержался в одной капле раствора. Лазерное приспособление улавливает разницу в интенсивности флуоресцентного свечения и заряжает капельки со сперматозоидами отрицательным или положительным зарядом в зависимости от интенсивности свечения. После этого капельки проходят через магнитное поле и разделяются на положительно и отрицательно заряженные частицы, которые поступают в различные емкости и содержат преимущественно сперматозоиды с X или Y хромосомой. Поврежденные сперматозоиды или неокрашенные посторонние частицы имеют нейтральный заряд и поступают в отдельную емкость.
Для заготовки разделенной спермы от быка получают 2 эякулята. Эякуляты предварительно подвергаются строгой оценке по биологическим и санитарным показателям. Они разбавляются патентованным Трис-содержащим разбавителем без желтка, в состав которого вводятся антибиотики: тилозин (100 мкг/мл), гентамицин (500 мкг/мл) и линко-спектин (300 мкг/мл). Затем добавляют специальные красители и выдерживают сперму в течение 30-45 минут при 30˚С для проникновения красителя внутрь клеток. Затем производят сортировку половых клеток с помощью проточной цитофотометрии при 18˚С. Скорость разделения клеток составляет 35 тысяч сперматозоидов в минуту. В замороженной сексированной дозе для осеменения (0,25 мл) содержится не менее 2 млн подвижных сперматозоидов быка.
Ceксированную сперму замораживают в соломинках объемом 0,25 мл. С целью отличия такой спермы от обычного семени, АВS наносит на сексированные соломинки код 529, а обычную сперму маркируют кодом 29. Кроме того, сперма предназначенная для получения самок замораживается в красных соломинках, а самцов - в синих соломинках
После криоконсервации сексированная сперма проходит строгую оценку по концентрации клеток в дозе, подвижности сразу после оттаивания (не менее 40 %), подвижности через 3 часа инкубации при 30˚С (не менее 30 %) и сохранности акросом (не менее 70 % сперматозоидов с интактной акросомой). Браковка сексированной спермы после криоконсервации по биологическим показателям составляет около 15 %. Также сексированная сперма подвергается санитарной оценке в течение 24 часов после оттаивания согласно требованиям Евросоюза. При этом допускается содержание в одной дозе не более 300 не патогенных микробных тел. Не допускается содержание в сперме грибов и дрожжей, а также кишечной палочки. По санитарным показателям бракуется 0,5% доз спермы.
Средняя оплодотворяемость телок сексированной спермой при однократном осеменении в течение эструса может достигать 40 %, а выход потомства желаемого пола составляет 90 %. Считается, что средняя оплодотворяемость телок сексированной спермой составляет 80 % в сравнении с оплодотворяемостью, получаемой в хозяйстве от обычной спермы при однократном осеменении./5/
Компания Cogent первой в мире стала использовать метод разделения семени быков_производителей по полу, создав лабораторию поточной цитометрии.
Эта методика позволяет получать не только семя желательного пола, но и отбирать для глубокого замораживания здоровые, безо всяких аномалий сперматозоиды. Кроме того, при такой технологии можно разбавлять семя так, чтобы в каждой полипропиленовой соломинке содержалось 4 млн спермиев.
Ежедневная мощность лаборатории — 800 спермодоз. Эффективность методики — 90% особей желаемого пола. Если соотношение полов (1:9) не выдерживается, фермеру либо возвращают деньги, либо он получает обычное семя на ту же сумму./3/
Племенная станция по искусственному осеменению крупного рогатого скота ABS Global была организована в США в 1941 году Пренсисом Рокефеллером в штате Висконсин , город Де Форест. В настоящее время она считается одной из крупнейших станций в мире и имеет несколько филиалов: в Канаде, Австралии, Англии, Италии и Бразилии. Непосредственно на станции в Де Форест в настоящее время содержится около 1000 быков различных пород. В том числе 200 оцененных рабочих быков, от которых получают сперму и 800 бычков, которые проходят оценку по качеству потомства и не используются для заготовки семени. Средний период времени оценки быков составляет 4 года. Стоимость содержания одного проверяемого быка составляет 100 тысяч долларов в год. После окончания проверки 90% проверяемых быков выбраковывается.
В течение года от оцененных быков на станции Де Форест замораживается до 12 млн доз спермы, из которых 2 млн доз мясных пород и 10 млн - молочных. От молодых бычков, предназначенных для проверки по качеству потомства, предварительно заготавливается 2000 доз семени. Оцененные по качеству потомства быки-улучшатели используются для получения спермы в среднем в течение 2-3 лет. При этом от быка получают до 80 тысяч доз семени в год.
В настоящее время сперма молочных и мясных быков с фирмы АВS Global поставляется в 100 стран мира. С 2004 года сперма из этой фирмы поставляется и в Россию. За время работы фирмы практически не было получено от потребителей рекламации на качество спермы. Это объясняется строгим биологическим и санитарным контролем за качеством спермы. При этом используют современную приборную базу и соответствующие общепринятые методики. Санитарный контроль нативной и криоконсервированной спермы осуществляется независимой государственной организацией.
С 2006 года эта компания приступила к заготовке и реализации разделенной по полу спермы быков. Из общего количества заготовляемой спермы, получают до 600 тысяч доз сексированной спермы в год. Эта сперма экспортируется в 75 стран мира.
Первое коммерческое применение сексированной спермы в скотоводстве началось в 2000 году. К настоящему времени во всем мире получено более 2 млн телят от сексированной спермы.
Основным патентообладателем на способ получения сексированной спермы является американская фирма Sexing Technologies, Navasota, Texass.
Для получения высоких результатов при искусственном осеменении крупного рогатого скота разделенным по полу семенем необходимо выполнять ряд условий:
1Желательно использовать сексированную сперму только для осеменения телок в хозяйствах, благополучных по инфекционным заболеваниям. В случае неблагополучия хозяйства по инфекционным болезням (ИРТ, вирусная диарея, лептоспироз), телок предварительно за 1 месяц до осеменения вакцинируют поливалентной вакциной (желательно использовать американскую вакцину Pfizer).
2Осеменяют телок ректо-цервикальным методом внутриматочно с использованием обычных инструментов для И.О. Осеменяют животных однократно в течение спонтанного эструса. Не рекомендуется использовать гормональные препараты для синхронизации эструса при использовании разделенной по полу спермы.
3Не рекомендуется использовать сексированную сперму для осеменения коров в связи с низкой оплодотворяемостью, обусловленной инфекционными и гинекологическими заболеваниями. Кроме того, у коров более растянутый во времени процесс овуляции, что также оказывает неблагоприяный эффект на оплодотворяемость.
4Соломинки с сексированной спермой оттаивают при 37˚С в течение 30 секунд.
5Необходимо оттаивать сразу столько доз, чтобы время от оттаивания до осеменения не превышало 15 минут.
Сейчас ученые из компании Cogent широко практикуют оплодотворение
половых гамет in vitro. Схематично процедура получения таких эмбрионов по дням выглядит следующим образом:
0 — выделение ооцитов из фолликулов самки;
0–1 — доращивание ооцитов в специальной среде и подготовка их к оплодотворению;
1 — оплодотворение ооцитов семенем отобранных быков - производителей1–7 — развитие эмбрионов в инкубаторе в специальной
среде;
7–8 — оценка эмбрионов по качеству, определение пола, подготовка к пересадке или замораживание.
Канадские селекционеры рекомендуют ряд параметров, использование которых дает возможность значительно повысить эффективность племенной работы и улучшить воспроизводство стада.
1Телята при рождении должны быть здоровыми, без генетических дефектов, с высокой скоростью роста; их ветеринарное обслуживание — минимальным.
2Отход молодняка от рождения до первого отела — не более 5%. При выращивании телок — максимальное исполь_зование сочных и грубых кормов.
3При высокой скорости роста и достаточной развитости телок срок их осеменения — 14–15 месяцев.
4Возраст первого отела — не больше 27 месяцев. В это время первотелки должны быть не ниже 137 см в холке и иметь живую массу не менее 550–600 кг.
4Межотельный период в стаде — 12–13 месяцев.
5Ежегодное количество осемененных телок — около 40% от числа дойных коров. Сверхремонтный молодняк реализуется для генетического улучшения других стад.
6Желателен «рабочий стаж» коров до 6 лактаций./1/
4 Трансплантация эмбрионов
Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных — биотехнологический метод воспроизводства, позволяющий увеличить темпы воспроизводства и повысить эффективность племенной работы. Наиболее приемлемы для трансплантации эмбрионов малоплодные виды животных: коровы, лошади, овцы.
В основе метода трансплантации эмбрионов включена возможность лабораторного манипулирования (вне организма животных) со спермиями, яйцеклетками и эмбрионами. При трансплантации эмбрионов взаимодействуют четыре биологические системы (самец, самка-донор, самка-реципиент и эмбрион - плод - новорожденный). А это обусловливает взаимодействие четырех генотипов со своими индивидуальными иммунными системами./3/
Весь процесс трансплантации (пересадки) эмбрионов состоит из: 1) отбора самок-доноров и самок-реципиентов; 2)формирования множественной овуляции (суперовуляции) у самок доноров и их искусственного осеменения; 3) получения эмбрионов от самок-доноров; 4) оценки, культивирования и хранения эмбрионов; 5) синхронизация полового цикла у самок-реципиентов с половым циклом у самок-доноров; 6) пересадки от самки-донора эмбрионов в стадии модулы или бластулы самке-реципиенту.
Отбор коров-доноров, выделенных в группу матерей быков, проводят в два этапа. На первом этапе их оценивают по собственному генотипу, на втором этапе по качеству их потомства.
Суперовуляция. Для стимуляции множественной овуляции используют гонатропин СЖК в сочетании простогландинами и другими биологически активными веществами, Этот способ позволяет вызвать суперовуляцию примерно у 70% коров-доноров. Эффективность суперовуляции в большой степени определяется физиологическим состоянием яичников.
Оптимальной считается овуляция, при которой из фолликулов яичника выходит 10.. .20 созревших яйцеклеток.
Искусственное осеменение коров-доноров. Используют сперму выдающихся быков-производителей, достоверно оцененных по качеству потомства. Коров осеменяют дважды в день с интервалом 10... 12 ч каждый раз двумя-тремя дозами размороженной спермы.
Извлечение эмбрионов. Эффективность метода трансплантации во многом определяется способом извлечения эмбрионов. Оплодотворенные яйцеклетки от суперовулированных коров-доноров извлекаются тремя способами; после убоя коровы-донора, хирургическим и нехирургическим. В настоящее время используют для извлечения ранних эмбрионов только нехирургический способ.
Для вымывания эмбрионов из матки используют чаще гибкий одноходовой катетер Фалея с упругим мандреном и надувным баллончиком. Наполнение матки промывной жидкостью и ее отток контролируют ректально. Вымывание повторяют 5...8 раз. Основную часть эмбрионов извлекают в первых 3...4-х смывках. Промывание в обоих рогах матки, включая введение катетеров, продолжается 20...50 мин. За это время можно извлечь более 50% эмбрионов, находящихся на стадии модулы или бластоцисты.
Собранную промывную жидкость отстаивают 20...30 мин при 20...З0° С, чтобы эмбрионы опустились на дно. Найденных эмбрионов с помощью пипетки переносят в среду для кратковременного хранения (среда Дюлльбено с добавлением 20% фетальной сыворотки крови теленка). После оценки жизнеспособности зародыш культивируют при 37°С для пересадки или оставляют для хранения.
Кратковременное культивирование и хранение эмбрионов. От момента получения эмбрионов до введения их в рога матки реципиента проходит от 1 до 4...5 ч. Кратковременное хранение и культивирование эмбрионов дает возможность транспортировать их в другие хозяйства. Эмбрионы крупного рогатого скота можно сохранить путем пересадки в яйцеводы-кульчики, где они могут сохраняться 3...4 сут, при этом выживаемость, их сохраняется на 78%.
После извлечения и оценки на жизнеспособность эмбрионы переносят в питательные среды (ТС-199, Хэмо Т-10) для культивирования с температурой 37°С. Для получения оптимальных условий для развития эмбрионов используют газовую среду, содержащую 90% азота, 3% кислорода и 5% углекислого газа. Культивирование эмбрионов в пробирках или соломинках является более простым методом, позволяющим транспортировать эмбрионы на дальние расстояния до 9,5 ч.
Пересадка эмбрионов реципиентам. В качестве реципиента отбирают гинекологически здоровых коров после 2...3-х нормальных половых циклов. В среднем на одного донора отбирают 5...6 реципиентов. В качестве реципиентов наиболее пригодны полновозрастные тёлки с хорошими племенными кондициями, т.к. у них по сравнению с коровами многократная синхронизация полового цикла с помощью простагландинов не вызывает затруднений.
Основным условием хорошего приживления эмбрионов служит синхронность проявления половой охоты у доноров и реципиентов. Разность во времени в проявлении половой охоты не должна превышать 24 ч, оптимальные же результаты получают при разности не более 12 ч.
Пересадка эмбрионов реципиентам производится в основном нехирургическим способом. Основным преимуществом этого способа является возможность многократного использования реципиента. На 60-е сутки после пересадки эмбрионов реципиентов исследуют на наличие стельности методом ректальной пальпации./2/
5 Клонирование
В 1997 г. группа ученых из Рослинского института в Эдинбурге (Шотландия) заявила о селекционном открытии в области генной инженерии. Без участия половых клеток барана был получен ягненок с выраженными признаками породы финн-дорсет, выношенный и рожденный овцой тотлиндской черноголовой. Эту овечку назвали Долли. Процесс ее зарождения шел так: из клеток вымени 7_летней овцы изъяли ядро с ДНК и с помощью электрического разряда поместили в яйцеклетку другой породы, откуда предварительно удалили собственное ядро. Особая клеточная среда включила процесс развития ядра.
Несколько дней спустя эмбрион был пересажен в матку третьей овцы (тотлиндской черноголовой), которая через положенное время родила ягненка породы финн_дорсет. Таким образом у Долли оказалось три матери и ни одного отца. Биологически же ее родители — овца и баран, зачавшие ту самую овцу, из клетки которой было изъято ядро с ДНК.
Это была отнюдь не первая попытка в истории науки получить генетические копии взрослого организма.
В конце 80_х годов в лаборатории компании ABS (США) родился теленок, полученный в результате клонирования предшественников половых клеток. Это, по-видимому, гораздо эффективнее клонирования из клеток уже взрослой особи. Наука сейчас владеет методами клонирования генов и конструирования на их основе плазмид, обеспечивающих встраивание генов в геном организма реципиента.
Что из себя представляет "настоящее" клонирование. В вкратце процесс состоит в следующем: из клетки тела клонируемого организма, находящегося на стадии постэмбрионального развития, изымается генетический материал – хромосомы содержащие цепи ДНК, пересаживаемый затем в половую клетку реципиента. Этот процесс является наиболее сложным и деликатным. Затем эта половая клетка с введенным в нее чужеродным генетическим материалом – ДНК клонируемого организма, пересаживается в матку реципиента, где проходит все стадии эмбрионального процесса. Исходом такой беременности является рождение генетической копии организма-донора – его клон.
После рождения животного, развившегося из зиготы пересаженной в матку самки-реципиента, выжидается определенное время, когда это животное станет взрослым. После этого, данное животное объявляется "клонируемым". При этом, весь предыдущий этап оказывается "за кадром". "Клонирование" в этом случае заключается в том, что через определенный промежуток времени другому животному-реципиенту в матку пересаживается одна или несколько замороженных "копий" взрослого животного и через некоторое время рождаются "клонированные" близнецы. /6/
6 Получение трансгенных животных
Цель сегодняшних исследований — преодоление биологических преград между видами животных и использование межвидовой генетической изменчивости для создания новых форм. Это возможно только путем переноса генов, то есть пересадки in vitro рекомбинационной конструкции гена в клетки другого животного вне зависимости от его видовой принадлежности, что позволит преодолеть бесплодие при гибридизации.
Все методы переноса генетической информации млекопитающих охватывают ранние этапы онтогенеза — от оплодотворения яйцеклетки до формирования бластоцисты, способной имплантироваться в матку реципиента. Для переноса генов применяют методы микроинъекции рекомбинантных ДНК в пронуклеус зиготы и ретровирусы (с помощью векторов)./5/
Первоначально трансгенных животных получали на лабораторных животных, где полно разработаны микрохирургия зигот и ранних зародышей, методы культивирования ооцитов и ранних эмбрионов. Пересадка реципиентам эмбрионов, развитие которых проходило в культуральных средах, приводит к высокому уровню их имплантации и рождению потомства. Полученное потомство с помощью генетических маркеров точно идентифицируется как трансгенные.
Техника микроинъекции ДНК сводится к тому, что в оплодотворённую яйцеклетку вводят ген, контролирующий определённый признак, с помощью микропипетки диаметром 1 мкм после микроинъекции зиготы.
Зиготы с чужеродной ДНК хранятся примерно в течение 1 часа. После микроинъекции в течение не более 1 часа проводят селекцию зигот с чужеродной ДНК, и полноценные зиготы трансплантируют в ампулу яйцепровода гормонально подготовленной самки-реципиента другой генетической линии.
Схема получения трансгенных сельскохозяйственных животных состоит из последующих этапов:
- выбор, изготовление и клонирование чужеродного гена;
- получение зигот и выявление пронуклеусов;
- микроинъекция определенного числа копий генов в видимый пронуклеус;
- трансплантация зиготы в половые пути гормонально подготовленной самки;
- оценка полученного приплода по генотипу и фенотипу - интеграция чужеродной ДНК, обнаружения продукта гена (например, гормон роста человека) и влияние на признак (например, высокая интенсивность роста);
- установление наследственного гена,
В овцеводстве наиболее эффективным оказался метод микроинъекции в зиготу гена, ответственного за синтез гормона роста овец. Такие эксперименты провели австралийские ученые, создавшие впервые в мире транс генных овец.
Этот дополнительный прием привел к более интенсивному синтезу гормона роста. Через 2.. .4 года трансгенных овец в 1,5 раза превосходили поживой массе сверстников той же породы.
На основании проведенных исследований, выявлено, что часть появления трансгенныхсвиней составилна10..,14%.
Исследования по получению трансгенных животных у крупного рогатого скота пока не привели к получению трансгенного потомства.
Трудности получения трансгенных животных крупного рогатого скота связано с их биологической особенностью. В отличии от многоплодных животных у них не разрешена проблема получения достаточного числа биологически полноценных яйцеклеток и зигот.
7 Получение химерных животных
Одно из перспективных направлений микроманипуляций на эмбрионах — получение химер (генетических мозаик), то есть приплода, родившегося в результат пересадки зародыша, состоявшего из клеточной массы двух или нескольких эмбрионов и объединенных в одно целое. Сейчас уже есть химеры, объединяющие 16 эмбрионов./6/
Принципиально возможны два подхода к искусственному получению химер. Первый подход заключается в получении химер методом инъекции в эмбрион группы клеток от другого эмбриона. В этом случае получают так называемых инъекционных химер. При такой микроманипуляции можно в эмбрион вносить клетки как одного, так и другого вида животного. Так, в эмбрион мыши были введены клетки человека. Полученная химерная мышь в своем генотипе несла гены человека. Второй подход для получения химер основан на слиянии клеточной массы двух или нескольких эмбрионов внутри одной зоны пеллюцида. Этим методом можно получить агрегационные химеры. Метод состоит в том, что 8-клеточные эмбрионы инкубируют в среде с протеолитическим ферментом, переваривающим оболочки яйцеклетки. Освобожденные от оболочек эмбрионы соприкасаются между собой, в результате чего их клетки сливаются и перемешиваются.
