Получение липолитических ферментов микробным синтезом

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Содержание

               Введение…………………………………………………………………………3

1.Характеристика  готового продукта ………………………………………6

2.Характеристика сырья  и материалов……………………………………...9

3. Технологическая  схема производства…………………………………….14

3.1. Описание технологического процесса………………………………….16

Заключение………………………………………………………………………..24

    Список использованных  источников……………………………………............25

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Введение

 

Производство ферментных препаратов является одним из ведущих направлений в развитии биотехнологии во всем мире. Год от года растет объем выпускаемых ферментных препаратов, расширяется их ассортимент и область применения. Такое быстрое развитие связано с тем, что ферменты являются высокоактивными нетоксичными биокатализаторами белкового происхождения, которые широко распространены в природе, без них  невозможно осуществление многих биохимических процессов и жизнь в целом.

Важным направлением современной биотехнологии является получение ферментных препаратов на основе культивирование микроорганизмов и использование их в сельском хозяйстве. Сегодня они применяются: 
- В процессе приготовления кормов, с целью улучшения их усвояемости сельскохозяйственными животными; 
-Для профилактики и лечения желудочных и паразитарных заболеваний у животных.

Основной компонент кормов сельскохозяйственных животных – растительная продукция (зерно, силос, сенаж, грубые корма). Она содержит много труднопереваримых веществ: клетчатки, лигнина, гемицеллюлозы. Даже у жвачных животных, содержащих в преджелудке (рубце) активные штаммы целлюлозоразлагающих микроорганизмов, клетчатка переваривается на 40-65%. Не полностью перевариваются также растительные белки (60-80%), липиды (60-70%), крахмал (70-85%), пектиновые вещества.

Для улучшения перевариваемости и повышения эффективности использования растительных кормов в рационы сельскохозяйственных животных вводят ферментные препараты (0,1-1,5% от сухой массы корма). 
Каждый ферментный препарат обозначается определённым буквенным и цифровым индексом. Буква «Г» в названии препарата указывает на то, что он получен из культуральной жидкости при глубинном способе выращивания микроорганизмов.

 

В настоящее время в Российской Федерации наблюдается «подъём» сельского хозяйства. В такой отрасли как скотоводство происходит увеличение поголовья. 

Для улучшения перевариваемости и повышения эффективности использования растительных кормов в рационы сельскохозяйственных животных вводят липолитические ферментные препараты.

Липазы представляют большой интерес для многих отраслей народного хозяйства, где необходим частичный или полный гидролиз жиров и масел. Они могут применяться в пищевой и легкой промышленности, отраслях промышленности (олеохимической, текстильной, кожевенной, пищевой), для медицины и как биохимические реагенты, сельском хозяйстве, в   бытовой химии, в коммунальном хозяйстве и аналитической практике. Однако широкого применения в нашей стране микробные липазы пока не получили.

Большие надежды возлагают специалисты на использование липаз в косметической промышленности, а также при выделке мехов и кож. Использование липаз в этих отраслях позволяет легко удалять липиды, придавая коже эластичность и мягкость, а мехам натуральный блеск. Важна перспектива использования липаз для очистки сточных вод от жиров, при переработке бытовых отходов и особенно для очистки канализационных коммуникации. Липазы можно также успешно использовать в сельском хозяйстве при приготовлении легкоусвояемых кормов и для улучшения обмена веществ у животных.

Липолитические ферменты всегда вызывали интерес ученых в связи со своими уникальными свойствами. Это действие на поверхности раздела фаз, разнообразие субстратной специфичности, способность катализировать как гидролиз триглицеридов, так и обратные реакции в микроводных условиях.

Ферментативный гидролиз жиров имеет несомненные преимущества по сравнению с химическим расщеплением. Помимо физиологического значения он используется человеком для получения глицерина и жирных кислот, удаления жировых примесей. С помощью позиционно-специфичных липаз можно осуществить избирательный гидролиз, который позволяет получать моно- и диглицериды, а также изменять функциональные свойства природных жиров, что важно для некоторых технологий. Исследования в области ферментативного катализа, реакций этерификации открыли новые возможности использования липаз.

Задача данной работы заключается в получении препарата Липаза Г3х микробиологическим синтезом штамма  Rhizopus oryzae 1403.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1.Характеристика готового продукта

 

1. Техническое наименование продукта- препарат ферментный Липаза Г3х.

2. Препарат Липаза Г3х выпускается в соответствии с требованиями технических условий.

3. Ферментный препарат Липаза Г3х получают из культуральной жидкости при глубинном культивировании микроскопического гриба Rhizopus oryzaе с последующим отделением биомассы и высушиванием концентрата на распылительной сушилке.

Основные органолептические, физико-химические и микробиологические показатели препарата следующие:

 

Таблица 1

- внешний вид	мелкий порошок
- цвет	светло-бежевый
- массовая доля остатка после просеивания на сите из проволочной сетки №05, %, не более	5,0
- массовая доля влаги, %, не более	13,0
- глюканазная активность (ГКС), ед/г	350±35
- пектолитическая активность (ПКС), ед/г	50±5
- количество мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), КОЕ/г, не более	5х104
-патогенные микроорганизмы, в т.ч. сальмонеллы, в 25 г. препарата	не допускаются
- бактерии группы кишечной палочки (колиформы), в 0,1 г продукта	не допускаются
- E.coli, в 25 г. продукта	не допускаются
- споры грибов, в т.ч. гриба-продуцента в 1 г продукта	не допускаются
- содержание афлотоксина В1, мг/кг	не допускаются
содержание токсичных элементов, мг/кг, не более: · Свинца · мышьяка	10 3

 

Содержание токсичных элементов и микотоксинов не должно превышать допустимых уровней, установленных в СанПиН 2.3.2.560.

Рабочая зона действия препарата: рН - 4,5-6,0, температура 28-30 0С, оптимум действия - рН 5,0, температура 30оС.

4. Ферментный препарат Липаза Г3х относится к 4 классу опасности (мало опасное вещество). Действие на кожу и слизистую оболочку глаз - отсутствует. Аллергическое действие на кожу - отсутствует. Кумуляция при попадании в желудок - не кумулирует.

5. Ориентировочный  безопасный уровень веществ (ОБУВ) препарата составляет: в воздухе рабочей зоны - 1 мг/м3, в атмосферном воздухе населенных мест - 0,01 мг/м3.

6. Маркировка  и упаковка препарата Липаза  Г3х - по ГОСТ 26142-84.

7. Фасовка препарата  производится по ГОСТ 26142-84 в двойные  полиэтиленовые мешки по 10 кг с последующей упаковкой в мешки бумажные.

При маркировке на этикетке пакета указывают:

• наименование предприятия- изготовителя и его товарный знак;
• наименование препарата;
• массу нетто;
• дату изготовления;
• ферментативную активность;
• срок хранения;

Препарат хранят в сухом, защищенном от света месте при температуре от минус 40 0С до +25 0С.

8. Срок хранения  препарата Липаза Г3х - 12 месяцев со дня его изготовления. По истечении срока хранения препарат может быть использован при соответствии показателей продукта требованиям нормативных документов (НД). Допускается снижение ферментативной активности препарата. Но в этом случае необходимо ввести соответствующую поправку при расчете дозировок.

9. Отбор проб  производят по ГОСТ 20264.0-74, анализ - по документации, указанной в технических условиях на продукцию.

10. Ферментный  препарат Липаза Г3х предназначен для использования в  производстве спирта, пива, крахмала, кормов: повышении степени биоконверсии ржи и ячменя; сокращении потерь сельскохозяйственного сырья; снижении вязкости сусла в 2-3 раза; увеличении выхода конечного продукта на 3-5%; повышении активности солода на 50-80%; получении биологически активных добавок (БАД).

Препарат может использоваться для обработки плодово-ягодного сырья при производстве соков и вин с целью увеличения выхода и улучшения качества готовой продукции.

11. Штамм-продуцент  Липаза Г3х защищен патентом РФ №2315095.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2.Характеристика сырья и материалов

 

Таблица 2. Характеристика сырья и материалов

Наименование	Обозначение НТД	Сорт или артикул	Показатели, обязательные для проверки	Примечание
А - основное сырье
Соевая мука	ТУ9112-001-05122481-99	-	Влажность не более 12%	приготовление питательной среды
Кукурузный экстракт	ГОСТ7169-66	-	Влажность не более 15%	приготовление питательной среды
Фосфолипиды	ГОСТ2210-73	XЧ	Массовая доля основного вещества не менее 97%	приготовление питательной среды
Б - вспомогательное сырье
Вода			ХПК, БПК
Мешки бумажные	ГОСТ 2226-88	Марка ВМ, открытые, трехслойные, размер 96x51,5 см	-	Мешки бумажные
Мешки полиэтиленовые для химической продукции	ГОСТ 17811-78	-	-	Мешки полиэтиленовые для химической продукции
Пеногаситель	ТУ6-14-300-80	-	Жидкость бесцветная или желтого цвета	Для пеногашения

 

       Соевая мука.

    1.Для производства  соевой дезодорированной муки  применяется: 
а) соевое зерно, соответствующее требованиям ГОСТ 17109, тщательно очищенное, дезодорированное и обсушенное;

б) пищевой соевый жмых и пищевой шрот, получаемые из соевого зерна, соответствующего требованиям ГОСТ 17109. 
     2. Соевая дезодорированная мука делится на три вида: 
     а) необезжиренную, вырабатываемую из соевого зерна; 
     б) полуобезжиренную, вырабатываемую из соевого пищевого жмыха; 
     в) обезжиренную, вырабатываемую из соевого пищевого шрота.   

    3. В зависимости  от качественных показателей  соевая дезодорированная мука  каждого вида делится на два  сорта: высший и первый.   

   4. Соевая дезодорированная мука должна соответствовать следующим требованиям:    
А. По органолептическим показателям

Таблица 3.

	Вид муки
Наименование показателя	Необезжиренная		Полуобезжиренная		Обезжиренная
	Высший сорт	Первый  сорт	Высший  сорт	Первый  сорт	Высший  сорт	Первый сорт
Цвет	От белого до светло- желтого	От светло- желтого  до темно- кремового	От светло- желтого до кремового	От жел- того до светло- бурого	От белого до светло- желтого	Желтый
Запах	Свойственный соевой дезодорированной муке, без посторонних запахов
Вкус	Свойственный каждому виду соевой муки, без специфического бобового привкуса, горечи, кисловатого и других посторонних привкусов
Минеральные примеси	При разжевывании соевой муки, смоченной водой, не должно ощущаться хруста

 

Б. По физико-химическим показателям

Таблица 4

	Вид муки
Наименование показателя	Необезжиренная		Полуобезжиренная		Обезжиренная
	Высший сорт	Первый сорт	Высший сорт	Первый сорт	Высший сорт	Первый сорт
а) Влажность в %, не более	9,0	9,0	9,0	9,0	10,0	10,0
б) Жир в % на сухое вещество	Не менее 17,0	Не менее 17,0	От 5,0 до 8,0	От 5,0  до 8,0	Не более 2,0	Не более 2,0
в) Сырой протеин, в % на сухое вещество, не менее	38,0	38,0	43,0	43,0	48,0	48,0
г) Сырая клетчатка, в % на сухое вещество, не более	3,5	4,5	4,5	5,0	4,5	5,0
д) Металломагнитная примесь, мг в 1 кг муки:
размером отдельных частиц в наибольшем линейном измерении не более 0,3 мм и (или) массой не более 0,4 мг, не более	3	3	3	3	3	3
размером и массой отдельных частиц более указанных выше значений	Не допускается
е) Прочие посторонние примеси	Не допускаются
ж) Зараженность вредителями	Не допускается
з) Загрязненность вредителями	Не допускается
из шелковой ткани:
N 35	5	-	3	-	2	-
N 25	-	5	-	3	-	2
или из полиамидной ткани
N 33/36 ПА	5	-	3	-	2	-
N 22,7 ПЧ-150	-	5	-	3	-	2
проход через сито, не менее из шелковой ткани:
N 35	-	60	-	60	-	70
N 38	60	-	70	-	-	-
N 43	-	-	-	-	70	-
или из полиамидной ткани
N 33/36 ПА	-	60	-	60	-	70
N 41/43 ПА	60	-	70	-	-	-
N 45/50 ПА	-	-	-	-	70	-

 

 Примечание. Номера шелковых и полиамидных сит установлены по ГОСТ 4403.     

     4а. Соевая  дезодорированная мука должна  быть охлаждена в зимние месяцы  до температуры не выше 35 °С, а  в летние месяцы ее температура  должна быть не более чем  на 5 °С выше температуры окружающего  воздуха.    

    4б. Содержание  токсичных элементов, микотоксинов и пестицидов в соевой дезодорированной муке не должно превышать допустимые уровни, установленные медико-биологическими требованиями и санитарными нормами качества продовольственного сырья и пищевых продуктов Минздрава СССР N 5061-89 от 01.08.89.        

    5. Правила приемки - по ГОСТ 27668.     

    5а. Контроль содержания  токсичных элементов, микотоксинов  и пестицидов осуществляется  в соответствии с порядком, установленным  производителем продукции по  согласованию с органами государственного  санитарного надзора и гарантирующим безопасность продукции.

      6. Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение - по ГОСТ 26791.

 

Кукурузный экстракт.

       Отход крахмалопаточного производства, получающийся путем упаривания жидкости от замачивания («настоя») кукурузных зерен («замочная жидкость») с содержанием сухих веществ не ниже 48%. В процессе замачивания происходит ферментативный гидролиз белков кукурузы, вследствие чего около половины азотсодержащих веществ экстракта представляет собой смесь аминокислот, полипептидов и белков. Экстракт – темная вязкая жидкость, содержит 6,4-8% общего азота. Не более 24% золы. В золу входят фосфор, калий, магний, причем фосфор – до 5%, частично связанный в виде фитина. Имеются также витамины группы В, ростовые вещества и биостимуляторы.

Ацетон.

По физико-химическим показателям ацетон должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл. 5.

Таблица 5. Физико-химические показатели ацетона

Наименование показателя	Норма
	Чистый для анализа (ч.д.а.) ОКП 26 3321 0042 08	Чистый (ч.) ОКП 26 3321 0041 09
1. Массовая доля ацетона (С3Н6О), %, не менее	99,75	99,50
2. Массовая доля спиртов (СН3ОН), %, не более	0,05	0,05
3. Массовая доля нелетучего остатка, %, не более	0,0005	0,0005
4. Массовая доля кислот (СН3СООН), %, не более	0,0012	0,002
5. Массовая доля щелочей (NH3), %, не более	0,001	0,001
6. Массовая доля альдегидов (СН2О), %, не более	0,002	0,002
7. Массовая доля веществ, восстанавливающих  КМ nО4 (О), %, не более	0,00006	0,0001
8. Массовая доля воды, %, не более	0,20	0,40
9. Содержание нерастворимых в  воде органических примесей	Должен выдерживать испытание по п. 4.10

 

 

Вода водопроводная.

Согласно действующим стандартам, питьевая вода (и водопроводная в том числе) должна быть безопасна в эпидемиологическом, радиационном отношении, безвредна по химическому составу и иметь благоприятные органолептические свойства. Качество воды определяется целым рядом показателей (содержание тех или иных примесей), предельно допустимые значения которых, задаются соответствующими нормативными документами. 

В России на данный момент основным нормативным документом является СанПиН 2.1.4.1074-01 "Вода питьевая". 

Зная характеристики конкретной воды, можно с помощью специалистов подобрать методы улучшения качества этой воды, решить все проблемы, связанные с этой водой. 

 

Полиэтиленовые мешки.

   Механическая прочность мешков  должна соответствовать следующим  требованиям:

-прочность при растяжении сварного шва должна быть не менее 60% прочности при растяжении пленки;

-число сбрасываний, выдерживаемое мешком без разрыва, должно быть не менее 5 при сбрасывании с высоты 1,5 м.

  Мешки должны иметь равномерный, хорошо сваренный шов без трещин и прожженных мест шириной 4±2 мм и не должны иметь слипания внутренних поверхностей.

В открытых мешках расстояние от кромки до шва не должно превышать 10 мм. Мешки должны быть без надрывов, надрезов, трещин и сквозных отверстий..  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3.Технологический процесс

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  

 

 

 

 

  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4.1. Описание технологического процесса

ВР 1. Водоподготовка. Для приготовления сред воду берут из водопровода, артезианских скважин или открытых водоемов после соответствующей обработки. Она должна быть биологически чистой (ГОСТ 2874—73), бесцветной, без привкуса и запаха, не должна давать осадка. Сухой остаток воды не должен превышать 1000 мг/л, общая жесткость не должна быть больше 7 мг-экв/л. Слишком жесткая вода замедляет рост микроорганизмов, так как растворенные в ней вещества не учитываются в составе питательной среды для определенной культуры. Воздействие воды повышенной жесткости может быть и другим.

ВР 1.1. Хранение и подготовка компонентов питательной среды.

Cyxиe кoмпoнeнты для пpигoтoвлeния питaтeльныx сред поступают с внешнего  транспорта в специальное складское  помещение.

Кукурузный экстракт.

Хранение экстракта кукурузного необходимо осуществлять при температуре не более 40°С, при отсутствии прямого солнечного освещения, не допуская попадания воды в продукт.

Гарантийный срок пригодности к употреблению экстракта кукурузного при соблюдении нормативных условий транспортировки и хранения — три месяца со дня изготовления.

Соевая мука.

            Правила приемки - по ГОСТ 27668.     

        Контроль содержания токсичных элементов, микотоксинов и пестицидов осуществляется в соответствии с порядком, установленным производителем продукции по согласованию с органами государственного санитарного надзора и гарантирующим безопасность продукции.

            Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение - по ГОСТ 26791.

Фосфолипиды.

Поступают с внешнего транспорта в специальное складское помещение.

Хранение сырья осуществляется по ГОСТ 2210-73.

 

Kaждaя  пapтия пocтyпившeгo cыpья  пoдвepгaeтcя  микpoбиoлoгичecкoмy кoнтpoлю нa oпpeдeлeниe oбceмeнeннocти микpoopгaнизмaми, aнaлизиpyeтcя eгo биoxимичecкий cocтaв, физико-химические параметры и т.д.

ВР 1.2. Подготовка насыщенного водяного пара. Парогенератор служит для выработки пара, используемого при стерилизации. Парогенератор представляет собой цилиндр со сферическим дном и плоской крышкой, внутри которого находятся электронагреватели - ТЭНы. На парогенераторе имеется предохранительный клапан, который срабатывает при давлении выше 3 бар (0,3 МПа; 3 кгс/см). На парогенераторе установлена водоуказательная колонка. К парогенератору подсоединены трубопроводы для заливки воды от водопровода и слива в канализацию. Система трубопроводов и арматура обеспечивает управление работой стерилизатора заправку и очистку парогенератора, слив конденсата.

Для местности, где отсутствуют водопровод и канализация предусмотрен залив воды в парогенератор через воронку, стоящую на водоуказательной колонке парогенератора. После залива воды в парогенератор кран, находящийся на водоуказательной колонке должен быть закрыт.

ВР 2. Подготовка воздуха. Подготовка стерильного воздуха. В процессе культивирования в посевном аппарате и ферментере растущая культура аэрируется кондиционированным стерильным воздухом под избыточным давлением 0,01 - 0,03 мПа для удовлетворения биологической потребности микроорганизмов и отвода продуктов их жизнедеятельности. Забор атмосферного воздуха происходит на высоте 5 метров над коньком здания. Подготовка воздуха для аэрации проводится следующим образом:

· очистка воздуха от грубых механических взвесей (висциновые фильтры)

· предварительное кондиционирование воздуха до нужной температуры

· подача воздуха в компрессор

· тонкая очистка воздуха от микроорганизмов (головной фильтр)

· окончательная очистка в индивидуальном фильтре.

На стадии предварительной очистки воздуха удаляется основная масса крупных частиц пыли диаметром 5-10мкм. В качестве фильтров предварительной очистки используются масляные фильтры.

Для сжатия и нагнетания воздуха используются турбокомпрессоры, в которых сжатие воздуха происходит под действием центробежной силы. Сжатие воздуха сопровождается его нагреванием до 2200С. Поэтому после компрессоров воздух поступает в холодильник. Чтобы удалить из воздуха излишки влаги, его необходимо охлаждать до температуры ниже точки росы.

       Далее воздух поступает в головной фильтр(ФГ) КБ ВНИИФСа, представляющий собой стальной цилиндр со сферическим днищем и разъемной крышкой. Внутри него расположены сетки, между которыми уложен фильтрующий материал - стекловолокно ЦФД( тип- ФПШ,самоочищающийся шторочный фильтр, производительностью 120м3/ч.Коэффициент очистки- 80-90%). Стерилизуется фильтр паром давлением 0,2 МПа при 133°С в течении 3 часов. Перебивку головного фильтра ведут - 1 раз в 2 - 3 месяца. Затем воздух подается в индивидуальные фильтры. Нагретый до 50ºС подается в ферментер. Через ферментер с V=10м3 пропускается 6000 м3 воздуха.

ВР 3.Прием и хранение ацетона. Условия хранения: хранение ацетона осуществляется в стальных, алюминиевых, оцинкованных емкостях или бочках и стеклянных бутылях в соответствии с правилами хранения огнеопасных веществ.

Для стадии осаждения необходимо приготовить ацетон в количестве 224,1литров.

ВР 4. Подготовка полиэтиленовых мешков в соответствии с нормативно-технической документацией.

ВР 4.1. Подготовка картонных коробок. Коробки принимают партиями. Партией считают количество коробок одного исполнения и размера, оформленное одним документом о качестве. Документ о качестве должен содержать: товарный знак и наименование предприятия-изготовителя; исполнение и размеры коробок; обозначение НД на коробке для конкретного вида продукции; штамп отдела технического контроля.

При контроле качества коробок проводят приемо-сдаточные испытания. При приемо-сдаточных испытаниях проводят контроль внешнего вида коробок, качества склейки и сшивки, размеров, числа двойных перегибов по линии рилевки (сгиба) клапанов.

Коробки и вспомогательные упаковочные средства транспортируют всеми видами транспорта в чистых, сухих, крытых транспортных средствах в соответствии с правилами перевозки грузов, действующими на соответствующем виде транспорта.

ТП 1. Подготовка питательной среды.

ТП 1.1.Смешивание компонентов питательной среды. Все необходимые для приготовления питательной среды компоненты смешиваются в смесителе в соотношении:

Соевая мука-1%; кукурузный экстракт- 0,25%;

фосфолипиды- 0,8%; вода.

 
       Пpигoтoвлeниe cpeды ocyщecтвляeтcя в смесителе типа ПШ-3200 при Т=30оС,частота вращения мешалки 45мин-1. Цex пpигoтoвлeния питaтeльнoй cpeды изoлиpyют oт дpyгиx пpoизвoдcтвeнныx пoмeщeний, чтoбы пpeдoтвpaтить пoпaдaниe нecтepильнoгo, зaгpязнeннoгo микpoopгaнизмaми cыpья в ocнoвнoe пpoизвoдcтвo. Cтaдии пpигoтoвлeния питaтeльнoй cpeды и ee cтepилизaции paзъeдинeны в paзныx цexax. В смеситель СМ поступают все компоненты питательной среды.

Смеситель - этo цилиндpическая eмкocть, изгoтoвлeнная из нepжaвeющeй cтaли или из мaтepиaлoв c aнтикoppoзийным пoкpытиeм зaкpытoгo типa c мeшaлкoй и бapбoтaжным ycтpoйcтвoм для вoздyxa, пapa. B кpышкe тaкoгo cмecитeля пpeдycмaтpивaeтcя нecкoлькo ввoдoв, пpeднaзнaчeнныx для пoдaчи внyтpь cмecитeля кoмпoнeнтoв cpeды, вoды.

B нижнeй  чacти eмкocти ecть oтвoдящий пaтpyбoк, чepeз  кoтopый yдaляeтcя из aппapaтa пoдгoтoвлeннaя cpeдa и дaлee пoдaeтcя нa cтepилизaцию. Затем  пoдaют воду, смесь перемешивают  с помощью мешалки и направляют  на стерилизацию в УНС.

 

ТП 1.2. Cтepилизaция питaтeльнoй cpeды

ТП 1.2.1.Выдерживание питательной среды.

ТП 1.2.2.Охлаждение питательной среды.

Этa oпepaция пpoвoдитcя в cтepилизaциoннoй ycтaнoвкe непрерывного действия(УНС- 5). Питательная среда поступает в нагревательную колонку. Проводят стерилизацию острым паром под избыточным давлением греющего пара перед колонкой 0,5 МПа. Нагретая до 1250С среда из колонки непрерывно поступает в выдерживатель (В). Время пребывания ее в колонке и в выдерживателе 15 мин. Температура в выдерживателе 1250С. После стерилизации среду охлаждают в теплообменнике (ТО) до 30-320С. Охлажденная среда подается в ферментер.

Необходимое давление в ферментаторе 30-40 кПа при приеме питательной среды поддерживается стерильным воздухом.

ТП 2. Подготовка посевного материала Rhizopus oryzae.

ТП 2.1. Выращивание посевного материала в лабораторных условиях.

Осуществляется путем высева микроорганизмов в пробирки на скошенные агаризованные среды с оптимальным составом(Соевая мука-1%; кукурузный экстракт- 0,25%;фосфолипиды- 0,8%; вода до 100мл) и выращивания штамма до 20-часового возраста при оптимальных условиях( Т=28-300С; рН=5-6).

Выращенную культуру (2% к объему с титром 106 спор на 1г) стерильно смывают с поверхности среды водой и переносят в колбы Эрленмейера вместимостью 750 см3, содержащие 100 см3 жидкой питательной среды. Колбы с засеянной питательной средой помещают на качалку (120-240 мин-1) при температуре 28-300С и выдерживают в течении 120часов.Выращивание микроорганизма при перемешивании(встряхивании) увеличивает скорость роста культуры,что связано с интенсификацией массообмена. Наилучшие результаты культура дает, находясь на стадии физиологической зрелости в конце логарифмической фазы роста. Культуру выращивают в несколько стадий.