Группы крови

Содержание 

     Введение                                                                                                        3

     1. Понятие о группах крови                                                                         5

     1.1 Методика определения групп крови                                                      7

     1.2 Группы крови - перекрестный способ                                             11

     1.3 Определение групп крови моноклональными антителами             12

     1.4 Технические ошибки                                                                           13

     2. Понятие о резус-факторе                                                                       15

     2.1 Определение резус-фактора                                                                15

     2.2 Способы определения резус-фактора                                                 16

     2.3 Экспресс метод определения Rh-фактора  на плоскости без подогрева.  Методика проведения реакции                                                       18

     2.4 Лабораторные способы определения  резус-фактора                         19

     2.5 Реакция с анти-Б-моноклональнымн  антителами                              20

     2.6 Значение групповой дифференциации                                                22

     2.7 Значение групповой принадлежности при гемотрансфузии            23

     2.8 Правило Оттенберга                                                                              24

     2.9 Резус-конфликт                                                                                      25

     2.10 Резус-конфликт                                                                                    26

     Заключение                                                                                                  27

     Список  использованной литературы                                                         29 
 
 
 
 
 
 
 

     Введение 

     Кровь – это сама жизнь; это извечная сила, которая служит не только источником зарождения, но и источником болезни, войны и мучительной смерти.

     Целые цивилизации были построены на кровных узах. От них зависят племена, кланы и монархии. Мы не можем существовать без крови – и в буквальном, и в фигуральном смысле.

     Кровь волшебна и загадочна. На протяжении всей истории человечества она выступает  как выдающийся религиозный или культурный символ.

     Группа  крови, место жительства и раса переплелись  друг с другом, образуя совокупность признаков, позволяющих  идентифицировать человека. У нас могут быть различные  культуры, но вы обнаружите их поверхностный (надстроечный) статус, взглянув на группы крови. Группа крови старше, чем раса, и имеет более фундаментальные свойства, чем этническое происхождение.

     Она не является результатом «проб и  ошибок» генетического развития, представляющегося последовательностью  случайностей. Каждая из групп крови явилась эволюционно – логическим откликом на серию разрушительных цепных реакций, переворотов и изменений, растянувшихся на целые эпохи. Ранние расовые изменения видятся происходившими в мире, который почти полностью населяли обладатели группы 1. Однако это разделение на расы, связанное с адаптацией человека к доселе непривычным для него питанию, окружению, климату, также явилось частью движущей силы эволюции, которая, в конечном счете привела к появлению других групп крови.

     В 1901 г. Ландштейннер опубликовал наблюдения о групповой принадлежности крови людей, подразделил кровь людей на 3 группы: 1,2 и 3. При дальнейшем исследовании было установлено, что имеется еще одна группа крови людей, сыворотка которых вообще не агглютинирует эритроцитов. В 1907 г. Янский  объединил людей с такими свойствами крови в 4 группу. Его классификация групп крови была принята как международная в 1921 г.

     Группы  крови характеризуются по наличию  в них агглютининов эритроцитов  А и В и агглютининов сыворотки  α и b.

     1 группа определяется тем, что отсутствует агглютитогены эритроцитов, а в сыворотке имеются оба агглютинина. Полная формула 1 группы 0αb.

     2 группа определяется тем, что  имеется агглютиноген А и агглютинин  сыворотки b. Полная формула 2 группы Аb.

     3 группа определяется тем, что имеется агглютинин сыворотки α и агглютиноген В. Полная формула 3 группы Вα.

     4 группа определяется тем, что  имеются оба агглютиногена, а  сыворотка вообще не содержит  агглютининов. Полная формула 4 группы  крови АВ0. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

     1. Понятие о группах крови 

     Кровь людей делится на огромное число  групп, хотя врачи для простоты выделяют лишь деление по резус-фактору и  четыре главных группы.

     Анализ  на группу крови проводится двумя  способами. Исследование "простой  реакцией" проводится следующим  методом:

     Нужны неглубокое блюдо, пипетки, раствор  натрия хлорида, сыворотка. На тарелку  капают разные виды сывороток, пишут  номер, потом в каждую сыворотку  добавляют каплю крови больного. Наблюдение ведется около пяти минут. Появление песочноподобного осадка означает положительную реакцию на данный тип сыворотки. Каждой из 4 групп крови соответствуют свои реакции на все типы сывороток.

     Результаты  данного способа уточняются врачами  с помощью двойной перекрестной реакции.

     Биохимический анализ крови незаменим для выявления нарушения работы многих органов организма еще до того, как в них возникли выраженные нарушения, и проблема еще не проявилась. Еще биохимический анализ позволяет определить нехватку микроэлементов в организме и принять своевременные меры по их восполнению. Биохимический анализ крови используется для диагностики туберкулезных, кардиологических, терапевтических, эндокринных, гинекологических, и некоторых других недугов.

     Для проведения анализа у человека берется 5-6 мл венозной крови. Забор крови  проходит утром строго натощак. Не рекомендуется пить, есть, жевать жевательную резинку. В забранной крови изучают следующие параметры.

• Белки:
• С-реактивный белок,
• ферритин,
• ЖСС (железосвязывающая способность сыворотки),
• альбумин,
• миоглобин,
• ревматоидный фактор.

     Преальбумины  играют функцию доставки ретинола и  тероксина. Сниженный показатель преальбуминов  значит проблемы печени или хронический  гепатит.

     Альбумины в крови ответственны за транспортировку  билирубина, калия, кальция, и т. Д. Высокое  содержание гликопротеина свидетельствует о воспалениях, а пониженное – о циррозе. Высокое содержание антитрипсина говорит о воспалительных заболеваниях или механических повреждениях. Снижение уровня альбумина говорит о нефротическом синдроме либо болезнях печени. С – реактивный белок – самая чувствительная часть крови. Его обнаружение в крови говорит о наличии воспаления, проникновении в кровь микробов, грибов, бактерий. Высокое содержание С-реактивного белка свидетельствует о возможном наличии таких болезней, как опухолевые заболевания, заболевания желудочно-кишечного тракта, сепсис новорожденных, цирроз, и т. д. Наличие и тяжесть анемии человеческого организма показывает совокупный анализ четырех компонентов: трансферрин, железосвязывающая способность сыворотки, анализ железа в сыворотке крови, ферритин. Анализ ревматоидного фактора позволяет определить тяжелые заболевания, такие как онкология, сифилис, болезни легких, туберкулез, цирроз, ревматоидный артрит, и т. Д.

     Ферменты: фосфатаза щелочная, амилаза, лактат, АсАТ, и т. д. Отвечают за нормальную работу систем. Понижение количества ферментов может говорить о разных серьезных заболеваниях печени, сердца, почек, дыхательных путей.

     Углеводы: глюкоза и фруктоза. Высокий уровень  глюкозы говорит о повышенном содержании сахара в крови.

     Липиды: разные типы холестерина, свидетельствуют  о наличии в крови жиров.

     Неорганические  вещества и витамины: йод, железо, фолиевая кислота, фосфор, кальций, витамин В12. Недостаток минеральных веществ  может плохо сказываться на работе некоторых органов и организма в целом. 

     1.1 Методика определения групп крови

     Групповая принадлежность крови по системе  АВО определяется с помощью реакции  агглютинации. В настоящее время  используют три способа определения  групп крови по системе АВО:

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,
• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрестный способ),
• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

     При этом существует следующая общепринятая тактика при определении группы крови.

     При плановом исследовании врач стационара определяет группу крови по стандартным  изогемагглютинирующим сывороткам или с помощью цоликлонов, после  чего посылает кровь в серологическую лабораторию для проверки группы перекрестным методом.

     Группа  крови считается определенной только тогда, когда лаборатория подтвердит данные, полученные врачом стационара. Если результаты исследований расходятся между собой, оба исследования нужно  При необходимости определения  группы крови в экстренном порядке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови), врач стационара определяет группу сам (в лаборатории перепроверка производится, но постфактум). В таких случаях также используются реакции с изогемагглютинирующими сыворотками (или цоликлонами), но при возможности целесообразно применение перекрестного метода.

     Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим  сывороткам.

     Этот  способ в настоящее время наиболее распространен в клинической  и лабораторной практике.

     Суть  метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этих целей используется реакция агглютинации. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С. 

      Необходимое оснащение

• Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотки для определения групп крови изготавливают в специальных серологических лабораториях из донорской крови. Сыворотки хранят при температуре 4-8 "С (в холодильнике).

      Срок  годности сыворотки указан на этикетке. Титр сыворотки (также указывается  на этикетке) должен быть не ниже 1 : 32 (для  сыворотки В (III) - не ниже 1 : 16/32). Под  титром сыворотки понимается то максимальное ее разведение, при котором может наступать реакция агглютинации. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая.

• Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(1), А(Ы), ВЦП), AB(IV).
• Изотонический раствор хлорида натрия.
• Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).

      Техника проведения реакции

     Под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку (пластинку) наносят  стандартные изогемагглютинирующие  сыворотки I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре).

     Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: О (I), A (II), В (III).

     Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой  крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая  капля) последовательно переносят  сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закругленными краями перемешивают.

     Возможна более простая методика: на тарелку наносят одну большую каплю крови, из которой ее забирают уголком предметного стекла и переносят в каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая с последней. При этом всякий раз кровь берут новым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не сливались.

     После смешивания тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение  первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует  обязательно вести до 5 минут ввиду  возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2(Н).

     В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции. 

     Трактовка результатов

     Реакция агглютинации может быть положительной  или отрицательной.

     При положительной реакции обычно в  течение первых 10-30 секунд в смеси  появляются видимые невооруженным  взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зернышки постепенно сливаются  в более крупные зерна, а иногда в хлопья неправильной формы.

     При этом сыворотка частично или полностью  обесцвечивается. При отрицательной  реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет и в  ней не обнаруживается никаких зернышек (агглютинатов).

     Принадлежность  исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками.

     При этом следует отметить, что, если сыворотки  всех трех групп дали положительную  реакцию, это указывает на то, что  испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В и принадлежит к группе AB(IV).

     Однако  в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное  исследование испытуемой крови со стандартной  изогемагглютинирующей сывороткой группы AB(IV), не содержащей агглютининов.

     Лишь  отсутствие агглютинации в этой капле  при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки  групп 0(1), А(И) и В(Ш), позволяет считать  реакцию специфической и отнести  исследуемую кровь к группе АВ0 (IV).

     Следует отметить, что при наличии в  исследуемой крови слабого подтипа  антигена А2 реакция агглютинации с  гемагглютинирующими сыворотками  групп 0(1) и В(Ш) начинается позже (на 3-4 минуте).

     Для точного определения подтипа  антигена А необходимо проведение дополнительной реакции с так называемым анти-А, реактивом, изготовляемым из семян растения Dolichos bitforis, содержащим только анти-А, антитела (проводится в серологической лаборатории).

     1.2 Группы крови - перекрестный способ

     Способ наиболее часто используется в серологических лабораториях.

     Суть  метода состоит в определении  наличия или отсутствия в исследуемой  крови групповых антигенов А  и В с помощью стандартных  изогемагглютинирующих сывороток, а также групповых антител  а и Р с помощью стандартных эритроцитов. Это дает полную серологическую характеристику крови.

     Реакция со стандартными эритроцитами проводится следующим образом.

     Необходимое оснащение:

     Оснащение для реакции со стандартными эритроцитами отличается тем, что для реакции агглютинации необходимы стандартные эритроциты трех групп крови: 0(1), А(П), В(Ш).

     Стандартные эритроциты приготавливают из крови  доноров с заранее известной  группой крови, хранят при 4-8°С. Срок годности 2-3 дня.

     Техника проведения реакции:

     1. Кровь для исследования берут из вены в сухую пробирку, центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 минут для разделения на сыворотку и эритроциты.

     2. На маркированную тарелку пипеткой  в шесть ячеек наносят по  одной большой капле сыворотки  исследуемой крови из пробирки (0,1мл), а рядом с ними - по одной маленькой капле (0,01мл) стандартных эритроцитов групп 0(1), А(П), В(Ш) (по две серии).

     3. Дальнейшие мероприятия проводятся  аналогично методу с использованием  стандартных изогемагглютинирующих  сывороток: соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют изотонический раствор хлорида натрия, после чего оценивают результат.  

     Трактовка результатов

     При трактовке результатов оценивают данные, полученные при обеих реакциях со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами.

     Особенностью  трактовки результатов реакции  со стандартными эритроцитами является то, что эритроциты группы 0(1) являются контрольными (в них нет антигенов, что делает принципиально невозможной специфическую реакцию агглютинации с любой сывороткой).

     Результат перекрестного способа считается  достоверным только если при оценке результатов реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают. Если этого не происходит, обе реакции следует переделать. 

     1.3 Определение групп крови моноклональными антителами

     Необходимое оснащение:

     Для определения группы крови используются моноклональные антитела, для получения которых применяется гибридомная биотехнология.

     Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки опухоли  костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические  моноклональные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих "родителей": способность к неограниченному росту, характерную для опухолевой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую иммунному лимфоциту.

     Разработаны стандартные реагенты - моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, которые применяют для определения агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют из себя ли-офилизированный порошок красного (анти-А) или синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием.  

     Техника проведения реакции:

     Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый  планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями  антител наносят по одной маленькой капле (0,01мл) исследуемой крови. После перемешивания составных частей за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2-3 мин.  

     Трактовка результатов

     Оценка  результатов очень проста.

     Методика  определения группы крови с помощью  цоликлонов позволяет отказаться от услуг доноров, кровь которых используют для приготовления стандартных изогемагглютинирующих сывороток.

     Возможные ошибки.

     Определение групповой принадлежности с помощью  реакции агглютинации может сопровождаться ошибками, которые ведут к неверной трактовке результатов. Все ошибки можно разделить на три группы:

• низкое качество реагентов,
• технические ошибки,
• особенности исследуемой крови.

     Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки  и стандартные эритроциты могут  иметь низкие агглютинабельные свойства, что приводит к неверному толкованию результатов реакции. Во избежание подобных ошибок следует следить за сроком годности реагента, условиями хранениями, а также их внешним видом (прозрачность сыворотки, отсутствие пленок, хлопьев, запаха гниения и пр.). 

     1.4 Технические ошибки

     Ошибки  технического характера связаны  с несоблюдением или недостаточно точным выполнением всех правил проведения реакции.

     Несоблюдение  внешних условий (плохая освещенность, изменение температуры окружающей среды)

     Плохая  освещенность мешает обнаружить агглютинацию или ее отсутствие.

     Повышение температуры свыше 25°С резко замедляет  агглютинацию.

     При низкой температуре (менее 15°С) может  произойти неспецифическая агглютинация независимо от состава агглютининов и агглютиногенов, так называемая холодовая панагглютинация (агглютинация отмечается при реакциях с сыворотками всех групп крови). Это явление происходит за счет наличия в сыворотке особого холодового агглютинина, который может давать реакцию агглютинации только при низких температурах.

     Неправильное  проведения самой реакции.

     Нарушение расположения сывороток, соотношения  сыворотки и крови, слияние соседних капель и пр. создают возможность  неправильной интерпретации полученных результатов.

     Ранняя  оценка результатов также может привести к ошибке, особенно при наличии подтипа антигена А (слабого антигена А2), дающего позднюю агглютинацию.

     Недобавление  физиологического раствора.

     Несоблюдение  этого простого правила (в капли, где произошла агглютинация, следует  добавить изотонический раствор хлорида натрия) может привести к тому, что за специфическую агглютинацию будет принята ложная (псевдоагглютинация).

     Под термином псевдоагглютииация подразумевают  способность эритроцитов склеиваться  в монетные столбики или кучки  с сохранением мембран, независимо от их агглютинабельных свойств.

     Границы между форменными элементами хорошо видны под микроскопом, в отличие  от истинной агглютинации, при которой  происходит разрушение мембран эритроцитов. Добавление 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия позволяет дифференцировать истинную агглютинацию от ложной. Псевдоагглютинация расходится довольно быстро, в то время как истинная агглютинация сохраняется прежней или становится более выраженной. 

     2. Понятие о резус-факторе 

     2.1 Определение резус-фактора 

     В 1940 г. К. Ландштейнер и А. С. Винер  обнаружили в эритроцитах человека совершенно новый антиген, названный  ими резус-фактором (Rh). Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а 15% лиц  этого фактора не содержат.

     Система антигенов резус-фактора представлена 6 основными антигенами. Образование резус-антигенов контролируется тремя парами ал-лельных генов: Dd, Cc, Ее, которые расположены на двух хромосомах. Каждая из хромосом способна нести только 3 гена из 6, причем лишь 1 ген из каждой пары - D или d, С или с, Е или е. Гены Dnd, Сие, Еие являются по отношению к друг другу аллельными. В последнее время было доказано, что аллельного гена d не существует.