Виды питательных сред

СОДЕРЖАНИЕ  

1.ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, ИХ КЛАССИФИКАЦИЯ И

ТРЕБОВАНИЯ К НИМ………………………………………………………..3

2.ВИРУС КРАСНУХИ.

2.1.Принцыпы микробиологической диагностики…………………………..8

3.ПОВРЕЖДАЮЩЕЕ  ДЕЙСТВИЕ АНТИБИОТИКОВ.

ВОЗНИКНОВЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ…………9

4.ПРИНЦИПЫ АНТИБИОТИКОТЕРАПИИ……………………………..12

1.ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, ИХ КЛАССИФИКАЦИЯ И

ТРЕБОВАНИЯ К НИМ

Питательные среды - среды, содержащие различные соединения сложного или простого состава, которые применяются для размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях.

Питательные среды готовят из продуктов животного или растительного происхождения. Искусственные среды готовят по определенным рецептам из различных настоев или отваров животного или растительного происхождения с добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ. В бактериологической практике чаще всего используют сухие питательные среды, которые получают на основе достижений современной биотехнологии. Для их приготовления используют: утратившие срок годности кровезаменители (гидролизин—кислотный гидролизат крови животных, аминопептид — ферментативный гидролизат крови; продукты биотехнологии (кормовые дрожжи, кормовой лизин, виноградная мука, белколизин). Сухие питательные среды могут храниться в течение длительного времени, удобны при транспортировке и имеют относительно стандартный состав. По консистенции питательные среды могут быть жидкими, полужидкими, плотными. Плотные среды готовят путем добавления к жидкой среде агара, желатин Ряд естественных питательных сред (свернутая сыворотка крови, свернутый яичный белок) сами по себе являются плотными.

По назначению питательные среды делятся на: I) обычные широко используемые для выращивания большого числа видов микроорганизмов; II) специальные: 1) для культивирования отдельных видов, не растущих или плохо растущих на обычных средах; 2) дифференциально-диагностические, употребляемые для определения родовых или видовых особенностей исследуемых бактериальных культур (сахаролитических, протеолитических, гемолитических и других свойств); 3) селективные - для выделения микробов одного вида из исследуемого материала (из смеси бактерий разных видов); 4) элективные среды (избирательные); 5) среды обогащения (накопительные), в которых подавляется рост сопутствующих бактерий и беспрепятственно развивается, накапливается искомый вид, содержавшийся в небольшой концентрации.

Из перечисленных искусственных питательных сред широко применяют среды животного происхождения - мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), мясопептонная желатина (МПЖ), и др. К любым питательным средам, применяемым для культивирования микроорганизмов, предъявляются основные общие требования: стерильность, оптимальная реакция среды (рН), наличие в среде необходимых питательных веществ (источники азотистого, углеродного питания, ростовые вещества, минеральные элементы), достаточная влажность (в плотных питательных средах).

Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения и накопления микроорганизмов определенного вида из материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору. При создании элективных питательных сред исходят из биологических особенностей, которые отличают данные микроорганизмы от большинства других (рост стафилококков наблюдается при повышенной концентрации хлорида натрия, холерного вибриона — в щелочной среде )

Дифференциально-диагностические питательные среды применяются для разграничения отдельных видов (или групп) микроорганизмов. Принцип построения этих сред основан на том, что разные виды бактерий различаются между собой по биохимической активности вследствие неодинакового набора ферментов.

Особую группу составляют синтетические и полусинтетические питательные среды. В состав синтетических сред входят химически чистые вещества: аминокислоты, минеральные соли, углеводы, витамины. В полусинтетические среды дополнительно включают пептон, дрожжевой экстракт и другие питательные вещества. В последние годы для ускоренной идентификации некоторых микроорганизмов (энтеробактерии, стафилококки, стрептококки и др.) применяются микротест-системы (МТС). Они представляют собой полистироловые пластины с лунками, в которых содержатся стерильные дифференциально-диагностические среды. Микротест-системы особенно удобны при массовых бактериологических исследованиях в практических лабораториях.

Требования, предъявляемые к питательным средам. Любая питательная среда должна отвечать следующим требованиям: содержать все необходимые для размножения микроорганизмов вещества в легкоусвояемой форме; иметь оптимальные влажность, вязкость, рН, быть изотоничной и по возможности прозрачной. Каждую питательную среду стерилизуют определенным способом в зависимости от ее состава.

2.ВИРУС КРАСНУХИ.

Вирус краснухи выделен в отдельный род Rubivirus. Он не относится к группе арбовирусов, поскольку членистоногие не являются его хозяевами или переносчиками. Структура и химический состав соответствуют другим тогавирусам.

Культивирование и репродукция. Вирус краснухи репродуцируется в первичных культурах клеток человеческого эмбриона, а также в ряде перевиваемых линий клеток с выраженным ЦПД. Цикл репродукции в культурах клеток завершается за 12-15 ч. Репродукция вируса происходит в цитоплазме клеток, где выявляются эозинофиль-ные включения. Дальнейшее созревание вирионов происходит при почковании через мембрану пузырьков аппарата Гольджи, а затем при выходе через наружную мембрану клетки. Источником инфекции является человек, больной выраженной или стертой формой краснухи, протекающей без сыпи. Вирус выделяется во внешнюю среду за неделю до заболевания и в течение недели после высыпания.

Процесс развития болезни. Вирус краснухи проникает в организм через слизистую оболочку дыхательных путей и кровью разносится по всему организму. После перенесенного заболевания развивается стойкая пожизненная невосприимчивость к нему. Передается воздушно-капельным путем. Инкубационный период составляет 1—2 недели. Заболевший человек заразен за 7 дней до появления сыпи и до 7—10 дня после высыпания.Заболевание начинается остро.

Патогенез. После заражения вирус попадает в лимфатические клетки шейных, затылочных и заушных желез, в которых начинается его первичная репродукция. Железы увеличиваются в размерах и становятся болезненными при пальпации. Затем вирус проникает в лимфу и кровь, где он обнаруживается за 3-4 дня до появления клинических симптомов заболевания. Вирусемия быстро прекращается после появления сыпи. Заболевание протекает с лихорадкой, сыпью, поражением верхних дыхательных путей, болями в суставах, мышцах. Вирус краснухи обладает выраженным эмбриопатическим действием. При прохождении через плаценту он адсорбируется на клетках эмбриональной ткани, вызывая пороки развития и даже гибель плода. При инфицировании беременных в первые 3 мес. беременности риск развития уродств достигает 80%, а в дальнейшем снижается до 25-8%, нередко возникают выкидыши.

У детей до 90% случаев заболевания протекает без видимых симптомов. Инфекция имеет осенне-весеннюю сезонность. Краснуха — не тяжелая инфекционная болезнь.

Появляются увеличение и болезненность заднешейных и затылочных лимфоузлов, небольшая слабость, недомогание, умеренная головная боль, температура тела повышается до 38°С. Одновременно на лице, через несколько часов на теле наблюдаются обильная сыпь в виде бледно-розовых пятнышек до 1 см круглой или овальной формы, умеренно выраженный сухой кашель, першение, саднение, сухость в горле, небольшой насморк. Характерно появление сыпи вначале на коже лица, с последовательным охватом сыпью всего тела. Могут отмечаться симптомы острого респираторного заболевания. В целом, заболевание у детей протекает легко, осложнения наблюдаются редко. Наиболее грозным осложнением является краснушный (наподобие коревого) энцефалит (воспаление мозга), его частота составляет 1:5000 — 1:6000 случаев.

Профилактика. Для предупреждения краснухи применяется живая ослабленная вакцина.Для обеспечения стойкой невосприимчивости к краснухе достаточно одной прививки. Первичная вакцинация рекомендуется всем детям начиная с 12—15 мес. Ревакцинации следует проводить девочкам в возрасте 11—14 лет, а также женщинам не позднее, чем за 3 мес. до предполагаемой беременности.

2.1.Принцыпы микробиологической диагностики.

Основа диагностики краснухи — вирусологические и серологические методы. Для выделения вируса в первые дни болезни используют смывы со слизистой носоглотки, кровь и мочу, которыми заражают перевиваемых культуры клеток ВНК-21, Vero, RK-21, первичные клетки эмбриона человека или почек кроликов и обезьян. В других культурах краснуха не проявляет цитопатического действия и проявляет эффект интерференции (пораженные вирусом краснухи клетки не заражаются другими вирусами, например, ЕСНО-11, вирусом везикулярного стоматита), защищая клетки от действия любого другого цитопатогенного вируса. Это свойство обычно и используют для идентификации возбудителя. На поверхности монослоя появляются клетки с усиленным светопреломления, впоследствии возникают отдельные очаги измененных вакуолизированных клеток, которые отпадают от поверхности стекла. суть которого заключается в том, что. Вирусы ЕСНО-11, вирус везикулярного стоматита всегда вызывают цитопатический эффект в инфицированных ими клетках, за исключением того случая, когда в этих клетках находится вирус краснухи. Идентификацию вируса проводят с использованием специфической сыворотки в РТГА, РН, РИФ. Получает широкое использование ПЦР, которая позволяет непосредственно выявить нуклеиновую кислоту вируса. В ускоренных методов выявления вируса краснухи относятся латекс-агглютинация, ИФА, РИФ. В практических лабораториях значительно чаще используют серологические методы. Выявления прироста титра антител в парных сыворотках проводят в РТГА, РСК, РН, ИФА. Вируснейтрализирующие антитела и антигемаглютининив определяют уже на 4-7 день после появления сыпи, Комплементсвязывающие - позже (через 2-3 недели). Диагностическое значение приобретает выявление в сыворотке специфических IgM, наличие которых указывает о недавно перенесенной болезни или инфекции в момент исследования.

3.ПОВРЕЖДАЮЩЕЕ  ДЕЙСТВИЕ АНТИБИОТИКОВ.

ВОЗНИКНОВЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ.

Несмотря на высокую эффективность в лечении многих инфекционных болезней, сфера применения антибиотиков значительно ограничивается побочными реакциями и повреждающими действиями,возникающими на фоне лечения с использованием этих препаратов. Побочные реакции на антибиотики могут быть самые разнообразные: от простой тошноты до необратимых изменений красного костного мозга. Основной причиной развития побочных реакций на антибиотики является нарушение принципов их использования, часто по невнимательности как лечащего врача так и пациента.

Побочные явления можно разделить на три группы: 1) прямые токсические, 2) косвенные, не связанные с фармакологическими свойствами препаратов, и 3) смешанные побочные явления. Токсическое действие препарата поддается регулированию, в частности, помимо уменьшения доз, ограничивается применение препарата. К косвенному побочному действию антибиотиков относят явления, обусловленные взаимодействием препарата с микробом или сенсибилизацией организма и проявляющиеся независимо от дозы и способа введения антибиотиков. В смешанных токсических реакциях проявляется как прямое токсическое действие препаратов, так и их косвенное воздействие . 
Широкое применение антибиотиков привело к появлению бактерий, устойчивых к ним. Способность образования устойчивых штаммов у различных микробов неодинакова; наиболее быстро появляются устойчивые к антибиотикам формы у стафилококков, кишечной палочки, энтерококка. Для борьбы с появлением устойчивых форм микроорганизмов, помимо новых препаратов с иным механизмом действия, широко применяется комбинированная антибиотикотерапия. Синергичное действие, напр. при бактериальном эндокардите, оказывают пенициллин и стрептомицин. При сочетании олеандомнцина с тетрациклином во Всесоюзном научно-исследовательском ин-те антибиотиков получен препарат, весьма эффективный в отношении грамположительной микрофлоры, резистентной к другим антибиотикам, олететрин, аналогичный зарубежному сигмамицину.  

Выделяют несколько категорий осложнений при антибиотикотерапии.  
1.Осложнения,обусловленные прямым токсическим действием антибиотиков. Пенициллин обладает только местным раздражающим действием, зависящим от концентрации препарата. Это проявляется в форме тромбофлебитов при внутривенном введении очень больших доз антибиотиков (десятки миллионов единиц) и в виде эпилептиформных судорог при эндолюмбальном введении концентрированных растворов. Лишь при применении недостаточно очищенных препаратов описывались температурные реакции, повреждения печени, снижение функции сердца (A. Л. Мясников). Остальные антибиотики более токсичны, действуя на нервную систему, в частности на VIII пару черепно-мозговых нервов (неомицин, мономицин, виомицин, дигидрострептомицин). Стрептомицин действует гл. обр. на вестибулярный аппарат. Эти поражения могут быть и необратимыми, приводя к глухоте или кинетическим нарушениям. При внутриполостном введении в больших дозах при операциях под наркозом неомицин и мономицин могут вызвать остановку дыхания (поражение нервно-мышечных окончаний).  
У неомицина, виомицина и моном и пина ототоксическое действие сочетается с нефротоксическим. Нефротоксичны также канамицин, полимиксин, колистин и бацнтрацин. При длительном хранении таблеток тетрациклинов могут образовываться продукты распада, оказывающие нефротоксическое действие. У больных с недостаточностью почек и неизмененные тетрацнклины могут вызвать повышение остаточного азота.  
Более или менее выраженное угнетение функции костного мозга, вплоть до смертельных случаев, может быть обусловлено применением левомицетина (и синтомицина), что, по-видимому, связано с основным механизмом антибактериального действия. Левомицетин влияет на белковый обмен бактерий путем торможения переноса аминокислот с РН К на рибосомы и, возможно, угнетая т-РНК, что небезразлично для интенсивно размножающихся клеток костного мозга. Гипопластическне реакции костного мозга описаны и при лечении стрептомицином.  
 При внутривенном введении больших доз тетрациклинов (гл. обр. хлортетрациклина), особенно у беременных, может произойти жировая дегенерация печени. Нек-рое гепатотоксическое действие свойственно, по-видимому, и олеандомицину, в частности триацетилолеандомицину, при длительном его применении (более 10 дней).  
Описаны случаи желтухи при применении эритромицина.  
Реакции со стороны жел.-киш. тракта наблюдаются практически при приеме внутрь всех антибиотиков в зависимости от дозировки и индивидуальной чувствительности. Особенно выражены они при лечении тетрациклинами, вызывающими не только раздражение, но и повреждение, вплоть до некрозов слизистой оболочки, всего жел.-киш. тракта, даже (хотя и слабее) при парэнтеральном применении. Особенно характерен аноректальный синдром (при распространении влияния и на слизистую оболочку половых органов – РВС).  
Тетрациклины могут вызвать остающуюся желтую окраску зубов (при приеме в период формирования зубов), а также обусловить фотосенсибилизацию (особенно деметилхлортетрациклин, или декломицин).  
Токсическое действие антибиотиков зависит от дозы и длительности их применения. Так, токсическое действие левомицетина наступает только при общей дозе больше 25 г, неомицина - после 5 дней приема, мономицина - после 7 дней приема. 

4.ПРИНЦИПЫ АНТИБИОТИКОТЕРАПИИ

До назначения препарата следует установить возбудителя инфекции и определить его индивидуальную чувствительность к антимикробным химиотерапевтическим препаратам. Все биологические пробы должны поступить в лабораторию до начала лечения. Методы выявления возбудителей инфекции подразделяются на прямые и непрямые.

· Прямые: прямое микроскопическое исследование нативных препаратов (мазков - отпечатков):электронная микроскопия: культуральное исследование. 
· Непрямые: иммуноферментное исследование: хромотография: серологические тесты.

По результатам антибиотикограммы больному назначают препарат узкого спектра действия, обладающий наиболее выраженной активностью в отношении конкретного возбудителя, в дозе, в 2—3 раза превышающей минимальную ингибирующую концентрацию. Если возбудитель пока неизвестен, то обычно назначают препараты более широкого спектра, активные в отношении всех возможных микробов, наиболее часто вызывающих данную патологию. Коррекцию лечения проводят с учетом результатов бактериологического исследования и определения индивидуальной чувствительности конкретного возбудителя (обычно через 2-3 дня). Начинать лечение инфекции нужно как можно раньше (во-первых, в начале заболевания микробов в организме меньше, во-вторых, препараты активнее действуют на растущих и размножающихся микробов).

Фармакологический принцип. Учитывают особенности препарата — его фармакокинетику и фармакодинамику, распределение в организме, кратность введения, возможность сочетания препаратов и т. п. Дозы препаратов должны быть достаточными для того, чтобы обеспечить в биологических жидкостях и тканях микробостатические или микробоцидные концентрации. Необходимо представлять оптимальную продолжительность лечения, так как клиническое улучшение не является основанием для отмены препарата, потому что в организме могут сохраняться возбудители и может быть рецидив болезни. Учитывают также оптимальные пути введения препарата, так как многие антибиотики плохо всасываются из ЖКТ или не проникают через гематоэнцефалический барьер. Необходимо введение оптимальных доз препарата с оптимальной частотой. Средняя терапевтическая концентрация (СТК), как правило, в 2-5 раз должна превышать минимально подавляющую концетрацию (МПК). МПК – это та концентрация антибиотика, которая in vitro подавляет рост выделенного штамма возбудителя. МПК должна быть в пределах 0,0Х – 0,00Х мкг/л и ниже. СТК зависит от вида возбудителя, его локализации, тяжести заболевания Поддержание СТК на определенном уровне обеспечивается кратностью введения антибиотика в течение суток с учетомпериода полувыведения. Путь введения определяется биодоступностью антибиотика, тяжестью заболевания, локализацией патологического процесса. Для большинства противобактериальных препаратов эффект зависит от уровня концентрации и времени поддерживания стабильной концентрации в крови. Уровень препарата в крови не должен существенно колебаться в течении суток. Для ряда препаратов (аминогликозидов) существует постантибиотический период. Их эффект зависит не от уровня стабильной концентрации, а пиковой. Поэтому суточную дозу нужно вводить в один прием, что повышает терапевтический эффект и снижает нефротоксичность.  

Клинический принцип. При назначении препарата учитывают, насколько безопасным он будет для данного пациента, что зависит от индивидуальных особенностей состояния больного (тяжесть инфекции, иммунный статус, пол, наличие беременности, возраст, состояние функции печени и почек, сопутствующие заболевания и т.п.) При тяжелых, угрожающих жизни инфекциях особое значение имеет своевременная антибиотикотерапия. Таким пациентам назначают комбинации из двух-трех препаратов, чтобы обеспечить максимально широкий спектр действия. При назначении комбинации из нескольких препаратов следует знать, насколько эффективным против возбудителя и безопасным для пациента будет сочетание данных препаратов, т. е. чтобы не было антагонизма лекарственных средств в отношении антибактериальной активности и не было суммирования их токсических эффектов.

Необходим выбор оптимального препарата с учетом: 
а) фармакокенетики и фарммакодинамики препарата

б) особенностей микроорганизма

 Необходимо учитывать  фармакокинетический аспект: способность  препарата достичь очага инфекции  и создать эффективный уровень  концентрации. Необходимо знать  способность проникновения препарата  через тканевые барьеры, выходить  в брюшную полость и полость  плевры, накапливаться в костной  или мышечной ткани, подкожно-жировой  клетчатке. В ряде случаев для  достижения эффективного уровня  активности препарата в очагах  микробного воспаления необходимо  использовать нетрадиционные пути  введения: эндолимфатическое введение, введение препарата с клеточной  взвесью во время плазмафереза, либо новые лекарственные формы химиотерапевтических препаратов – липосомальные формы или антибиотики, ассоциированные с наночастицами. 
Для выбора препарата с учетом фармакодинамики необходимо знать спектр действия антибиотика и выбирать препарат с учетом предполагаемого возбудителя. 

► Эпидемиологический принцип. Выбор препарата, особенно для стационарного больного, должен учитывать состояние резистентности микробных штаммов, циркулирующих в данном отделении, стационаре и даже регионе. Следует помнить, что антибиотикорезистентность может не только приобретаться, но и теряться, при этом восстанавливается природная чувствительность микроорганизма к препарату. Не изменяется только природная устойчивость.  

► Фармацевтический принцип. Необходимо учитывать срок годности и соблюдать правила хранения препарата.