Определение токсичности компонентов отходов на дафниях

Содержание

1. Введение……………………………………………………………………...
2. Биология дафний…………………………………………………………….

2.1. Биологическая характеристика  дафний…………………………………..

Строение дафний……………………………………………………………

Цикломорфоз………………………………………………………………..

2.4. Питание дафний…………………………………………………………….

Размножение дафний……………………………………………………….

3. Экологическое значение дафний…………………………………………...
4. Материалы и методы………………………………………………………..

4.1. Оборудование, материалы  и реактивы……………………………………

 Культивирование дафний

А) Содержание и выращивание  маточной культуры…………………….

Б) Выращивание синхронизированной культуры………………………...

В) Кормление маточной и синхронизированной культуры дафний…….

Г) Кормление дафний в эксперименте…………………………………….

Приготовление вытяжки из почвы для биотестирования………………..

Приготовление вытяжки из растений для биотестирования…………….

Подготовка культивационной воды………………………………………

Определение острой и хронической токсичности ….................................

Условие проведения биотестирования…………………………………….

5. Результаты и их обсуждение ………………………………………………

5.1. Изучение токсичности  отходов……………………………………………

Определение токсичности водных вытяжек из почвы…………………...

Определение токсичности водных вытяжек из растений, выращенных с присутствием различных  компонентов отходов ………………………...

6. Список использованной литературы………………………………………..

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1.Введение

 

Одной из важных проблем  современности является загрязнение  объектов окружающей среды отходами производства, в которых могут  находиться токсичные вещества. Они  губительно воздействуют на живые организмы, в том числе и человека.

Выявление токсичных  отходов, их утилизация является актуальной проблемой на сегодняшний день. Антропогенное  воздействие на окружающую среду  возрастает, количество загрязняющих веществ увеличивается.  Химические методы изучения отходов производства не дают точных показателей по воздействию их на живые организмы, поэтому результаты    химических исследований подчас очень трудно интерпретировать.

   В последнее время все более популярными становятся методы биологического тестирования, когда в качестве индикатора на присутствие в среде вредных биологически активных веществ используют живые биологические объекты.   Присутствие в воде пестицидов и тяжелых металлов в концентрациях, близких к ПДК, можно выявлять с помощью дафний.  Действительно, что может быть проще, чем судить о пригодности воздуха для дыхания по поведению мышки, а о качестве питьевой воды по времени жизни в ней каких-нибудь микроорганизмов. [Нижегородский государственный университет].

     Наиболее прочно в практику биотестирования внедрены в качестве тест-объектов дафнии, цериодафнии, микроскопические водоросли. []

     Большинство  опубликованных работ (Селивановской С.Ю.,     Шахмаева Д.М., Шнель С.) посвящены изучению токсичности сточных вод. Было выявлено, что

Цель данной работы: Определение токсичности компонентов отходов на дафниях (Daphnia magna Straus ) .

Для выполнения поставленной цели нами решались следующие задачи:

1. Освоение методов культивирования дафний;
2. Подбор оптимальных условий для их жизнедеятельности и размножения;
3. Определение токсичности растворов компонентов отходов;

      4 Определение токсичности водных вытяжек из почвы, отобранных с территории ТЭЦ на дафниях;

5 Определение токсичности водных вытяжек из почвы,  отобранных на территории ТЭЦ;

6 Определение токсичности водных вытяжек из растений, выращенных с присутствием различных химических соединений.

 

 

                                                  2.Литературный обзор

2.1.Биологическая характеристика  дафний

Беспозвоночные животные - Тип членистоногие - Класс ракообразные - Подкласс жаброногие - Отряд листоногие ракообразные – Подотряд ветвистоусые – дафнии.[5]  

Наружный панцирь членистоногих  настолько плотен, что в затвердевшем состоянии не растягивается. Поэтому рост членистоногих сопровождается линьками. У растущего животного старый панцирь становится тесным, лопается, обычно сперва на спине, и сбрасывается. И только в короткое период, пока новый панцирь, образовавшийся под ним, не затвердеет, животное может увеличиться в размерах. Во время сбрасывания старых покровов, которые сходят не только со всей наружной поверхности тела, но и со всех конечностей, в том числе и с ротовых органов, а также с передней и задней кишки и со всех дыхательных органов, членистоногие бывают вялыми, малоподвижными, не питаются и стараются укрыться. Последняя линька взрослой особи заканчивается смертью.

Рост у членистоногих – не непрерывный процесс, а ступенчатый, размеры тела увеличиваются скачкообразно – сразу после линьки.[7]

У большинства членистоногих хорошо развиты глаза. Они бывают простыми, имеющими одну линзу, и сложными, или фасеточными. Органы обоняния (обонятельные волоски и ямки) примечательны тем, что могут воспринимать запахи на большом расстоянии по воздуху и распознавать пахучие вещества в ничтожных концентрациях в воде. У членистоногих хорошо развит и слух. Звуковые волны определённой длины они воспринимают с помощью тонких слуховых волосков на поверхности тела, особенно на усиках. У водных членистоногих прекрасно развиты органы равновесия. Наиболее универсальное чувство, присущее всем членистоногим, - осязание. Осязательную функцию выполняют многочисленные волоски на поверхности тела членистоногих. Они помогают членистоногим ориентироваться даже в отсутствии света. Органы вкуса похожи на обонятельные и связаны с химическим чувством.

Членистоногим свойственны многие проявления высшей нервной деятельности, которую ещё недавно считали характеристикой только для позвоночных. При посредстве всей совокупности органов чувств членистоногие получают из внешнего мира самую разнообразную информацию, которая поступает в центральную нервную систему. В результате возникают нервные импульсы, идущие к органам движения, железам и другим рабочим органам, которые определяют формы ответных реакций на воздействие внешней и внутренней среды. При этом центральная нервная система контролирует и регулирует деятельность рабочих органов (эффекторов) на основе обратной связи.

Все членистоногие размножаются половым  путём, но иногда и без оплодотворения (партеногенетически).[7,8]

Самым характерным признаком, по которому можно отличить ракообразных от других членистоногих, является присутствие у них на голове двух пар усиков (антенн). Кроме того, в отличие от постоянного числа ножек, типичного для паукообразных и насекомых, количество конечностей у разных групп ракообразных бывает различным. У многих видов ноги сохраняют примитивное строение: каждая состоит из двух ветвей. В процессе эволюции одна из ветвей редуцируется, ноги становятся одноветвными. Дышат с помощью жабр, развившихся на особых выростах ног.

Размеры ракообразных колеблются от одного – двух миллиметров до трёх метров. Тело сегментированное, состоит из трёх отделов: головы, груди и брюшка; покрыто хитиновым панцирем, препятствующим непрерывному росту. Одним ракообразным свойственна цельная головная капсула – сложная голова (синцефалон), состоящая из головной лопасти (акрона) с антеннулами и четырёх головных сегментов, несущих соответственно антенны, верхние челюсти (мандибулы) и две пары нижних челюстей (максиллулы и максиллы). У других ракообразных так называемая первичная голова (протоцефалон) состоит только из акропа и антеннального сегмента и подвижно сочленена со слившимися челюстными сегментами (гнатоцефалон). Обычно одна - две или несколько сегментов груди сливаются с головой, и их конечности превращаются в ногочелюсти, участвующие в размельчении и подаче пищи ко рту.[1]

 Большое жизненное значение  для ракообразных имеет хитиновый  покров, который выполняет защитную функцию. Он имеет форму нежного футляра в виде двустворчатой раковины  (у ветвистоусых).  Жесткий покров тела препятствует росту   ракообразных,   поэтому у них наблюдается периодическая   линька,   после которой   некоторые   раки прячутся в укромных местах, пока у них не затвердеет молодой хитиновый покров. Биологическая роль карапакса заключается не только в предохранении от повреждений нежного жаберного аппарата, но и в придании определенного направления струям воды, несущим кислород к жабрам и пищевые частицы к ротовым органам. .

 У некоторых ракообразных, (ветвистоусых) голова вытянута в направленный вниз клюв – рострум.

 Нервная система представлена  головным мозгом и брюшной  нервной цепочкой. Органы зрения  – чаще пара пара фасеточных глаз; у многих сохраняется и непарный (науплиальный) глазок, непарные мышцы глаз. Органы равновесия – статоцисты. Кишечник обязательно с жевательным желудком и «печенью», открывается в среднюю кишку. Значительную роль в переваривании пищи играет пищеварительная железа, совмещающая функции печени и поджелудочной железы. Органы выделения представлены «зелёными железами» – антеннальными  и максиллярными.

Дышат жабрами, при их отсутствии –  всей поверхностью тела. Кровеносная система, если имеется, незамкнутая, сердце - на спинной стороне.

Большинство ракообразных раздельнополы, ряду групп свойствен партеногенез. Яйца редко откладываются в воду, обычно самка носит их на себе в особой выводковой камере. Развитие большинства ракообразных проходит с метаморфозами. Из яйца развивается, характерная личинка – науплиус, который превращается в метанауплиус. Иногда первые личиночные стадии протекают под покровом яйцевых оболочек и тогда личинки выходят на более поздних стадиях развития.[4]

 Ветвистоусые ракообразные — животные мелкие, их трудно рассмотреть без оптических приспособлений. Главное отличие ветвистоусых — меньшее число члеников тела, грудной отдел состоит всего из пяти члеников и несет пять пар листовидных ножек. Кроме того, у этих животных панцирь не разделен на две створки, он просто согнут пополам по средней линии спины. Зато голова обособлена и несет крупный непарный глаз. Антенны второй пары у ветвистоусых — основной орган движения, они крупные и состоят из двух ветвей, снабженных многочисленными щетинками. Грудные ноги благодаря этому целиком заняты отфильтровыванием пищи и подачей ее ко рту. Забрюшие - крупное, подогнуто на брюшную сторону, снабжено парой коготков на конце и часто многочисленными шипиками.

Размножаются ветвистоусые рачки  двояко. Летом встречаются только самки, которые откладывают неоплодотворенные партеногенетические яйца, из них тут же развивается новое поколение рачков. К осени из некоторых таких яиц выходят карликовые самцы, и тогда самки начинают откладывать оплодотворенные яйца. Они обильно снабжены желтком, одеты несколькими оболочками, наружная из которых представляет собой видоизмененный спинной участок панциря и содержит наполненные воздухом камеры. Это образование называется седлышком или эфиппиумом, по положению на теле рачка в момент формирования. Осенью можно видеть на поверхности стоячих водоемов множество плавающих эфиппиумов, прибиваемых ветром и волной к берегу. Покоящиеся яйца легко выносят и зимние морозы, и высыхание, переносятся ветром или на оперении птиц из водоема в водоем, а весной развиваются, давая только самок. У некоторых видов, в том числе и у дафний, покоящиеся яйца могут формироваться не только осенью, но и летом при наступлении неблагоприятных условий.

  Непосредственное изучение дафний  имеет большое учебно-познавательное значение, позволяя  на конкретных формах познакомиться с планктонными организмами, имеющими огромное значение в питании мальков и взрослых рыб.

Дафнии относятся к отряду ветвистоусых. Название отряда указывает на характерные особенности их строения. У дафний вторая пара усиков двуветвиста (отсюда — ветвистоусые).

Дафнии встречаются в большом  количестве почти в каждом пресном водоеме.  Для них более типично присутствие их в свободной толще воды. Они оживлённо снуют в толще воды, делая характерные взмахи своими задними антеннами. Эти рачки всю жизнь проводят в толще воды и составляют значительную часть пресноводного планктона. Иногда они, наряду с другими рачками, развиваются в таких количествах, что вода приобретает буроватый оттенок.[3,4]

2.2.Строение дафнии

 

 

 

 

 

 

 

Дафния (взрослая самка): 1 — первая пара усиков; 2 — вторая пара усиков; 3 — верхние челюсти (мандибулы, или жвалы); 4 — грудные ножки; 5 — глазок (простой); 6 — глаз (сложный); 7 — надглоточный ганглий; 8 — сердце; 9 — пищевод; 10 — пищеварительная железа; 11 — кишечник; 12 — заднепроходное отверстие; 13 — орган выделения; 14 — яичник; 15 — отверстие яйцевода; 16 — зародыши; 17 — пространство между сплошной поверхностью брюшка и раковиной.[2]

2.3.Цикломорфоз

 

С жизнью многих ветвистоусых рачков, в том числе и цериодафний, связано одно любопытное явление, получившее название цикломорфоза. Сущность его заключается в том, что форма и величина раковины закономерно изменяется по сезонам года. В летнее время у некоторых видов дафний на голове появляется так называемый «шлем». Кроме того, удлиняется задний шип на раковине. Эти изменения происходят параллельно изменению температуры воды. В данном случае важна не сама температура, а её воздействие на плотность воды. Прогретая вода обладает меньшей плотностью, чем охлаждённая. Для движения и парения в менее вязкой и прогретой воде необходимы более длинные выросты, а иногда и иная форма тела. Поэтому летние формы дафний развивают специальные приспособления для передвижения и парения в таких условиях. Значение плотности воды для изменения формы тела рачков подтверждается наблюдениями Е.Ф.Мануйловой над дафниями (в том числе и дафниями) озера Балхаш.[12]

2.4.Питание дафний

 

Большинство ветвистоусых ракообразных (в частности дафний), как уже  указывалось питаются, отфильтровывая мелкую, находящуюся в воде взвесь. Основной их пищей служат бактерии, одноклеточные водоросли и мелкие органические остатки – детриты. Наибольшее значение имеют бактерии.

В природных водоёмах рачки прекрасно  живут и размножаются при концентрации бактерий не менее одного миллиона в одном кубическом сантиметре воды. Если численность бактерий менее пятисот тысяч на один кубический сантиметр, наступление половозрелости дафний задерживается; если же численность бактерий падает ниже двухсот тысяч на один кубический сантиметр , жизнь рачков становится невозможной.

С другой стороны, избыточное количество бактерий (более трёх-пяти миллионов  на один кубический сантиметр) так же вредно влияет на рачков и вызывает прежде всего замедление или приостановку их размножения,а иногда даже их гибель. Это объясняется выделением бактериями продуктов обмена веществ, ядовитых для ветвистоусых.

От количества бактерий в водоёме  зависит численность ветвистоусых. Неоднократно наблюдалось уменьшение числа дафний в период массового развития сине-зелёных водорослей. Однако, по данным Е.Ф.Мануйловой, бурное развитие сине-зелёных само по себе никакого влияния на рачков не оказывает. Оно подавляет развитие бактерий, именно таким образом косвенно воздействует на дафний.

Помимо бактерий, дафнии используют в пищу одноклеточные водоросли. Они могут заглатывать только  самые мелкие виды протококковых и зелёных водорослей, которые обычно развиваются в большом количестве в прудах, но не в крупных озёрах.

Фильтрация пищи рачками происходит беспрерывно. Время, нужное для заполнения кишечника. Колеблется от десяти до двухсот сорока минут и зависит от величины рачков, размеров пищевых частиц. [3,6]

2.5.Размножение дафний

 

У дафний наблюдается чередование половых поколений с бесполыми. В летние месяцы у дафний существуют партеногенетические поколения самок. Они следуют одни за другими, и через каждые три – четыре дня производят на свет пятьдесят – восемьдесят особей, которые через две недели, в свою очередь, становятся способными к размножению. Яйца развиваются в выводковой камере матери , где из них образуются сначала подвижные эмбрионы, а затем вполне сформировавшиеся маленькие рачки, покидающие выводковую камеру и приступающие к самостоятельному существованию. Вышедшая на свободу молодь часто линяет и быстро растёт. Первые три линьки происходят через  одни-полутора суток, а следующие через двое-трое суток. Большинство видов достигают половозрелости после третьей- четвёртой линьки, то есть через два-шесть дня после рождения. Так получаются новые поколения самок, продолжающие размножаться партеногенетически (размножение самок без участия самцов).

Даже кратковременное отклонение от нормальных условий жизни может прервать процесс партеногенетического размножения. Судьба яйца определяется за пятнадцать минут до его выхода из половой системы самки. Если в этот момент рачки подвергаются каким-нибудь неблагоприятным воздействиям. Из их яиц выведутся самцы или эти яйца будут нуждаться в оплодотворении.

Самцы дафний - карлики по сравнению  с самками. Часто они в несколько раз меньше самок. Их передние антенны удлинены, а первичная пара грудных ножек снабжена коготками, чтобы удерживать самку.[13,14]

3.Экологическое значение  дафний

 

1. Дафнии служат индикатором степени загрязнённости водоёмов.

 В благоприятных условиях из яиц появляются главным образом самки,  но   при ухудшении условий рождаются и самцы. Этой закономерностью можно воспользоваться для определения качества  воды и обнаружения в ней ядовитых веществ; в данном случае самцы играют роль индикаторов, так как содержание в водоеме даже ничтожного количества ядов изменяет соотношение  между самками и самцами в пользу последних. индикатором степени загрязнения воды углекислым газом. .   Наблюдая за поведением дафний, помещенных в банку с чистой водой, легко заметить, что они относятся к свету безразлично. Если в воду добавить 5—10% газированной воды, поведение дафний изменится: у них появится положительный фототаксис. По мнению Боровского, причина заключается в том, что углекислый газ снижает темп сердцебиения дафний (иногда на 30%), а это влечет за собой общее понижение жизнедеятельности рачков. Свет же учащает сердцебиение дафний и возвращает их в нормальное состояние. Поэтому они стремятся переместиться в освещенную зону сосуда с более благоприятными условиями. Следовательно, положительный фототаксис дафний в какой-то мере может служить индикатором степени загрязнения воды углекислым газом.

2. Применении дафний в качестве тест - объектов, как наиболее чувствительных в биотестировании уровня загрязнённости донных отложений.

 Донные отложения  - важный компонент водных экосистем.  В условиях загрязнения водоемов, донные отложения аккумулируют загрязняющие вещества, которые могут накапливаться в больших количествах и сохраняться длительное время. В последствие загрязняющие вещества могут поступать обратно в воду и водных животных, то есть может происходить вторичное загрязнение водоема. Изучение свойств донных отложений в условиях загрязнения водоемов - важная и актуальная задача. Одним из методов ее решения является биотестирование. В работе используются животные, являющиеся стандартными тест-объектами для тестирования донных отложений . Это бентосные беспозвоночные - бокоплав Hyalella azteca, личинка комара Chironomus riparius, а также высоко чувствительное планктонное ракообразное дафния (Ceriodaphnia affinis). Первые два вида применяются для тестирование цельных донных отложений, последний - для тестирования водной вытяжки из них. Наиболее чувствительным из изученных тест-обектов оказываются дафнии: отмечается их гибель при действии водной вытяжки из наиболее сильно загрязненных районов и снижение количества потомства при действии вытяжки грунтов, загрязненных в меньшей степени.

3. Роль санитаров водоёма.

Значение дафний в жизни стоячих  пресноводных водоёмов очень велико. Они выполняют важную роль санитаров водоёмов, поедая разлагающиеся вещества. Рачки потребляют большое количество органических остатков, погибших мелких животных,  бактерий и водорослей, тем самым, очищая воду.

4. Специальное разведении на рыбоводческих заводах дафний (в том числе и дафний) для корма молоди промысловых рыб.

 Питательность этого корма  очень высока: содержание белка  в теле дафнии достигает пятидесяти  процентов, а жира одиннадцать процентов по весу. В настоящее время на водоёмах рыбозаводов специально выращивают дафний в качестве живого корма.

5. Перенос пищевых ресурсов в глубины, благодаря регулярным вертикальным миграциям.
6. Участие дафнии в жизнедеятельности водоёма как одного из  звеньев цепи питания.[3,5,13]

 

4.Материалы  и методы

4.1.Оборудование, материалы, реактивы

Для проведения исследований по данной методике необходимы следующие средства измерений, материалы и реактивы:

 климатостат  (бокс для культивирования  дафний), позволяющий поддерживать освещение лампами дневного света от 500-1000 лк и температуру окружающего воздуха +20 ±2°С;

 климатостат  (бокс для культивирования  водорослей) позволяющий поддерживать освещение лампами дневного света 3000-4000 лк и температуру окружающего  воздуха от+20 до +25°С;

  мешалка магнитная (ТУ 25-11-834-73), или аппарат для встряхивания (ТУ 64-1-1081-73);

  весы лабораторные общего  назначения,4класса точности, с наибольшим  пределом взвешивания 200 г (ГОСТ 24104-2001);

  термометр лабораторный  шкальный с диапазоном измерения  от 0 до 50°С с ценой деления шкалы 0,5°С;

  люксметр любого типа

  сушильный электрический шкаф  общелабораторного назначения (ТУ 64-1-909-80)

  ступки и пестики фарфоровые (ГОСТ 9147-80)

  сачки диаметром 1-2 см фильтры  бумажные обеззоленные «белая  лента» (ТУ 6-09-1678-77, ГОСТ 12026-76)

  вата хлопковая медицинская  (ГОСТ 5556-81);

  бинт марлевый медицинский  (ГОСТ 1172-93);

  воронки лабораторные (ГОСТ 25336-82);

  стаканы стеклянные лабораторные  вместимостью 150, 200, 250, 1000 см³

(ГОСТ 25336-82);

  колбы стеклянные лабораторные вместимостью 0,25, 1и 2 дм³

(ГОСТ  25336-82);

  пипетки вместимостью 1, 2, 5, 10 см³

с ценой деления 0.1 смª (ГОСТ 29227-91);

  вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72);

  вода питьевая (ГОСТ 2874-82).[10]

 

 

     Для выполнения исследований  были освоены методы по культивированию  тест-объекта, подготовки материалов  для биотестирования.

4.2.Культивирование дафний

А) Содержание и выращивание маточной культуры

        Культуру дафний  выращивают в климатостате или  эквивалентном приспособлении, обеспечивающем поддержание искусственного освещения лампами дневного света с интенсивностью света от 500 до1000 лк, 16-часовой световой и 8-часовой ночной (без освещения) период; температуру 20±2 ºС.

        В качестве  культиваторов используют чашки кристаллизованные толстостенные, или батарейные стаканы объемом 2-5 дм³, которые наполняют на ¾ объема культивационной водой, сажают туда самок дафний среднего размера с выводковыми камерами, заполненными эмбрионами, и неплотно прикрывают культиваторы (от попадания пыли и для уменьшения испарения) пластинами из стекла или оргстекла толщиной не менее 6мм. Для пересадки в культиваторы можно отобрать взрослых самок с помощью фильтрования культуры через крупное сито (размер ячеек 1800-2200 мкм). Маточная культура дафний поддерживается в одном или двух сосудах. Ежедневно утром с поверхности воды в сосудах, в которых культивируются рачки, стерильной марлевой салфеткой снимается дрожжевая и бактериальная пленка. После этого вода вместе с рачками осторожно переливается в чистый культиватор так, чтобы накопившийся осадок остался на дне. В чистый культиватор добавляется свежая порция культивационной воды. Таким образом, ежедневно проводится очистка поверхности воды и дна сосуда, в котором культивируются рачки. Аэрирование воды в культиваторах с дафниями не допускается.

       Один или два  раза в неделю осуществляется  пересадка культуры в свежую  культивационную воду (частота пересадки  определяется содержанием растворенного  кислорода в культиваторах). Плотность маточной культуры 20-25 особей на 1 дм³ культивационной воды.

        Не допускается  использование молоди маточной  культуры для биотестирования.

Б) Выращивание синхронизированной культуры

     Биотестирование воды  и водных вытяжек проводят  только на синхронизированной культуре дафний. Синхронизированной является одновозрастная культура, полученная от одной самки путем ациклического партеногенеза в третьемпоколении. Такая культура генетически однородна. Рачки, ее составляющие, обладают близкими уровнями устойчивости к токсическим веществам, одновременно созревают и в одно время дают генетически однородное потомство. Для получения синхронизированной культуры отбирают одну самку средних размеров с выводковой камерой, заполненной эмбрионами, и помещают в химический стакан объемом 250 см³, заполненный культивационной водой на 200 см³. Появившаяся молодь переносится в кристаллизатор (25 особей на 1 дм³ воды) и культивируется указанным способом. Полученная третья генерация является синхронизированной культурой и может быть использована для биотестирования в возрасте 6-24 часов.

     Для непрерывного  осуществления массовых анализов  на токсичность различных сред  при большом количестве проб  необходимо культивирование 4-5 генетически  однородных синхронизированных культур, отличающихся друг от друга по возрасту. Ежедневно осуществляется очистка поверхности воды и дна культиваторов по п.4.4.

     Пересадка плодоносящих  самок в свежую культивационную  воду осуществляется один раз  в неделю. Родившуюся молодь ежедневно отсаживают и используют для биотестирования.

В) Кормление маточной и синхронизированной культуры дафний

     Оптимальное количество корма и соблюдение режима кормления – одно из основных условий получения удовлетворительных результатов биотестирования, так как изобильное кормление может привести к снижению чувствительности тест-организмов, засорению фильтрующего аппарата дафний и сокращению содержания растворенного кислорода в культивируемой среде. Недостаточное питание приводит к неадекватному реагированию дафний на воздействие токсических веществ.

     Кормят маточную и  синхронизированную культуру дафний  ежедневно, один раз в сутки,  добавляя 7-10 см³ концентрированной  водорослевой суспензии на 1 дм³  культивационной воды 1-2 раза в  неделю добавляя дополнительно 3 см³ дрожжевой суспензии на 1 дм³ культивационной воды.

 

Г) Кормление  дафний в эксперименте

     Дафний в остром  опыте кормят также ежедневно,  один раз в сутки, добавляя 1 см³ концентрированной или разбавленной  в два раза дистиллированной  водой водорослевой суспензии на 100 см³ воды.

     В хроническом опыте  добавляют дополнительно 1-¸ раза  в неделю 0,1-0,¸ см³ дрожжевой  суспензии на 100 см³ воды. Достаточность  питаниятест-организмов подтверждается  удовлетворительными результатами  контроля.

     Перед кормлением температуру дрожжевой и водорослевой суспензии доводят до комнатной.

4.3.Приготовление вытяжки из почвы для биотестирования

 В лаборатории отобранные на токсикологический анализ почвы сначала разрыхляют вручную металлическим шпателем и освобождают от материала, заведомо относящегося к инородным (случайным) механическим включениям.

Перед биотестированием пробы просеивают сквозь сито с размером ячей 1 мм и  доводят до воздушно-сухого состояния. Для чего пробу подсушивают в вытяжном шкафу или в хорошо проветриваемом помещении.

Размещенные таким образом пробы  почвы выдерживают открытыми  не менее двух часов при комнатной температуре и влажности воздуха (ГОСТ 5180-84 «Грунты. Методы лабораторного определения физических характеристик»). Подготовленную пробу распределяют на ровной поверхности слоем толщиной не более 1см и отбирают ложкой или шпателем из пяти точек методом конверта. Не допускается предназначенное для исследования на токсичность пробы почв подвергать тепловой обработке, поэтому гигроскопическая влажность почвы определяется в отдельном образце.