Антитоксический иммунитет. Кожные пробы на выявление антитоксического иммунитета

УО «ВИТЕБСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ»

ИНДИВИДУАЛЬНОЕ ЗАДАНИЕ

ПО УЧЕБНОЙ ПРАКТИКЕ

НА ТЕМУ: Антитоксический иммунитет. Кожные пробы на выявление антитоксического иммунитета

Подготовил учащийся 4-го курса

401 МДД  группы Приставко Антон

Учебно-методический руководитель:

Гайдамака Ольга Николаевна

ВИТЕБСК 2013

План

1. История открытия антитоксического иммунитета
2. Токсины и антитоксины
3. Анатоксины
4. Кожные реакции

    - проба Дика

    - реакция Шика

    - проба Бюрне

    - проба Манту

ИСТОРИЯ ОТКРЫТИЯ АНТИТОКСИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА

Беринг еще только готовил свое открытие к научной публикации, а Эрлих  узрел в новом факте проблему большой биологической значимости. Впрыскивая животным растительные яды — рицин, касторовое масло, абрин, Эрлих убедился, что во всех этих случаях в крови образуются антитоксины.

Итак, из экспериментального наблюдения, сделанного в соседней комнате, Эрлих вывел учение об антитоксическом иммунитете. Он показал, что такой иммунитет может быть наследственным, так как мать передает его потомству через плаценту и с молоком. Развивая далее идею, Эрлих выдвигает объяснение, подсказанное его опытами с красителями тканей. Он утверждает, что процессы питания клеток и реакции иммунитета — эти два основополагающих процесса жизни происходят по единому механизму. Клеточное ядро, по Эрлиху, имеет многочисленные группы атомов, которые могут отщепляться от ядра и присутствовать в протоплазме клетки и даже на ее поверхности. Исследователь дает им название «боковых цепей», «рецепторов» (от recipio — воспринимать). Заметим, что термин «рецептор» является одним из наиболее распространенных в сегодняшней иммунологии. Соединение клетки с питательными веществами зависит от присутствия в ней специальных рецепторов, имеющих сродство с химической структурой питательных веществ. Другие рецепторы воспринимают токсины или иные антигены, и только вступив в прочный химический контакт 45 клеткой, они побуждают ее вырабатывать противоядие — антитоксины.

Антитоксический иммунитет является гуморальным иммунитетом, который направлен против высокоантигенных белковых веществ. Связан он с иммуноглобулинами G. Экзотоксины, выделяемые бактериями, которые поражают разные органы и ткани имеют важное значение при инфекционных болезнях. Исход ботулизма, дифтерии, столбняка и газовой гангрены зависит от эффективности антитоксического иммунитета . В 1890 году Китазато и Беринг получили антитоксическую сыворотку, которая спасала от смерти безнадежных больных. Рамон в 1918 году при помощи обработки дифтерийного токсина дозами формалина, которые уничтожают токсические свойства, но сохраняют способность вызывать иммунный ответ, вывел препарат для иммунизации против дифтерии. При специфической противоинфекционной защите первой линией обороны являются реакции местного иммунитета, главную роль в которых играет секреторный иммуноглобулин А. Антитела в отношении вирусов не такие эффективные, их роль заключается только в перехватывании вирусов в межклеточном пространстве: т.е. на вирусы, которые проникли в клетку, антитела почти не действуют.

ТОКСИНЫ И АНТИТОКСИНЫ

Токсины (от греческого toxikоn - яд), вещества бактериального происхождения, способные угнетать физиологические функции, что приводит к заболеванию или гибели животных и человека. По химической природе все токсины - белки или полипептиды. В отличие от других органических и неорганических ядовитых веществ, токсины при попадании в организм вызывают образование антител.

 При некоторых инфекционных  заболеваниях (дифтерия, скарлатина) для  определения напряженности иммунитета  и восприимчивости детей используются  внутрикожные пробы с применением  соответствующих разведенных токсинов. Положительная реакция (местное  воспаление кожи в области введения  токсина) обусловливается ядовитым  действием токсина на ткани  кожи. Отрицательный результат реакции  объясняется нейтрализацией введенного  в кожу токсина соответствующим  антитоксином, содержащимся в иммунном  организме в достаточном для  этого количестве.

 Токсины получают из токсигенных штаммов микробов (дифтерийная палочка или скарлатинозный стрептококк) методом посева на жидкую питательную среду (мартеновский бульон) с последующей фильтрацией через бактериальные фильтры. Из полученных токсинов готовят диагностические токсины Шика (дифтерийный) и Дика (скарлатинный). Токсины вводят внутрикожно, в количестве 0,2 мл (Шика) и 0,1 мл (Дика), в среднюю часть внутренней поверхности предплечья.

Антитоксины — антитела, возникающие в сыворотке крови при попадании в организм токсинов или анатоксинов. Способны взаимодействовать с токсинами, нейтрализуя их активность. Антитоксины могут синтезироваться в результате естественного контакта организма с токсинами, при искусственном введении их в организм животных в сублетальных дозах и при иммунизации анатоксинами человека или животных. Широкое применение в медицине имеют антитоксические сыворотки против токсинов, выделяемых патогенными микроорганизмами (палочками дифтерии, столбняка, газовой гангрены и ботулизма), используемые для профилактики и лечения этих болезней, а также сыворотки против ядов змей, насекомых. Антитоксины, применяемые в медицинской практике в виде антитоксических сывороток, получают путем гипериммунизации лошадей возрастающими дозами токсинов. Антитоксины против ботулизма и газовой гангрены поливалентны, то есть содержат антитела к нескольким токсинам. Сила антитоксинов измеряется количеством антитоксических единиц (АЕ) в 1 мл, способ определения которых зависит от вида антитоксина. Сыворотки, содержащие антитоксины, высушивают в вакууме и сохраняют при низкой температуре.

Антитоксины (от греч. anti — против + токсины) — антитела, которые образуются в организме животных и человека в ответ на появление токсинов микробного, растительного или животного происхождения, специфически обезвреживают соответствующие токсины и являются мощным фактором антитоксического иммунитета (см.). Наибольшее значение имеют антитоксины, которые вырабатываются против экзотоксинов или растворимых токсинов микробов — возбудителей высокотоксигенных инфекций: дифтерии, столбняка, газовой гангрены, ботулизма, а также дизентерийных бактерий Григорьева—Шига, скарлатинозного стрептококка, стафилококка. Антитоксический иммунитет может быть воспроизведен искусственно активной иммунизацией анатоксинами (см.) или пассивной иммунизацией антитоксическими сыворотками.

 Содержание антитоксинов в  антитоксических сыворотках выражается  в антитоксических единицах (АЕ). О напряженности антитоксического  иммунитета можно судить по  содержанию антитоксинов в сыворотке  крови. Наличия в 1 мл крови 1/30 АЕ  дифтерийного антитоксина достаточно, чтобы обеспечить невосприимчивость  ребенка к дифтерии; при этом  реакция Шика у него будет отрицательной. Защита от столбняка, по данным Регамея (R. Н. Regamey, 1965), обеспечивается присутствием в 1 мл крови 0,005 АЕ противостолбнячного антитоксина.

 Антитоксины применяются в  медицинской практике в виде  антитоксических сывороток (противодифтерийная, противостолбнячная, противодизентерийная  Григорьева—Шига, противогангренозные, противоботулинические, противоскарлатинозная, противостафилококковая), которые готовят путем гипериммунизации лошадей возрастающими дозами соответствующих токсинов или анатоксинов. В жидких сыворотках антитоксины довольно лабильны: они разрушаются при t° 100° и ослабляются при 60—70°; инактивируются под влиянием прямого действия солнечных лучей. После лиофильного высушивания под вакуумом при низких температурах А. становятся более стабильными и хорошо сохраняются в течение многих лет.

 За 1 АЕ дифтерийного А., по предложению Эрлиха (P. Ehrlich), принимается такое количество противодифтерийной сыворотки, которое в смеси с Lt (Limes tod) дифтерийного токсина вызывает смерть морской свинки весом 250 г в течение 96 час.

 Lt дифтерийного токсина устанавливается в опытах на морских свинках при помощи стандартной противодифтерийной антитоксической сыворотки. Интернациональные антитоксические единицы (АЕ) содержатся в определенных количествах (мг) эталонных сывороток, выпускаемых международной лабораторией биологических стандартов Института сывороток в Копенгагене. Производственные институты СССР снабжаются стандартными антитоксическими сыворотками из Института контроля медико-биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича (Москва).

 Реакция флоккуляции нашла применение лишь для определения титра противодифтерийной сыворотки (по последним данным, образование флоккулята при взаимодействии антитоксической сыворотки с токсином следует отнести за счет присутствия в сыворотке побочных антител, поэтому результаты реакции флоккуляции могут не всегда совпадать с результатами определения титра A. in vivo).

 Антитоксины обычно связаны  с ү- и β2-глобулинами противодифтерийной  сыворотки. Нортроп (L. Н. Northrop, 1941) изолировал дифтерийный антитоксин в виде кристаллического глобулина с мол. весом (мол. массой) 90 500, однако химическая структура А. до сих пор остается неустановленной. При переваривании пепсином молекула иммунного глобулина расщепляется на две половины, из которых одна — пассивный белок — лишена антитоксических свойств и легко коагулируется теплом, а другая — носитель антитоксина — гораздо более резистентна к пепсину и прогреванию. На этом принципе основан метод очистки антитоксинов «диаферм» (А. В.. Бейлинсон), в результате которой их анафидактогенные свойства ослабляются. При применении очищенных антитоксинов симптомы сывороточной болезни реже наблюдаются и она легче протекает.

 В соответствии с теорией Борде (J. Вогdet), которая нашла подтверждение в опытах с чистыми токсинами и А., реакция токсин — антитоксин протекает по законам адсорбции. В организме больного А. нейтрализуют лишь свободный токсин, который еще не связан с чувствительными тканями. Поэтому эффективность серотерапии зависит от срока применения антитоксической сыворотки. При подозрении на заболевание дифтерией, столбняком, ботулизмом и другими токсигенными инфекциями антитоксическую сыворотку следует вводить возможно скорее, чтобы антитоксин нейтрализовал свободный токсин до фиксации его восприимчивыми тканями. Отсюда понятно, почему серопрофилактика столбняка, ботулизма и других токсигенных инфекций оказывается эффективнее серотерапии. Выраженными антитоксическими свойствами обладают иммунные сыворотки против змеиных ядов.

 А. сохраняют значение и в  эпоху антибиотиков, так как последние, оказывая бактериостатическое действие  на микробы, не обезвреживают  их токсины. Поэтому при таких  заболеваниях, как дифтерия, столбняк, ботулизм, при которых имеет место  токсемия и патологический процесс  почти всецело обусловлен повреждающим  действием токсина на чувствительные  ткани, серотерапия специфическими  А. безусловно показана наряду с антибиотикотерапией и другими способами лечения.

Описано 3 способа действия антитоксина:

1. Прямая реакция антител с молекулярными сайтами, ответственными за токсичность бактерийного продукта;
2. Взаимодействие антитоксина с рецептор- ными участками токсина, что препятствует фиксации токсина на специальных рецепторах клеток-мишеней;
3. Образование иммунного комплекса, ограничение проникновения токсина в ткань и активный фагоцитоз комплекса.

         АНАТОКСИНЫ

Анатоксины - фильтраты бульонных культур токсигенных микроорганизмов, утратившие благодаря специальной обработке токсичность, но

сохранившие в значительной степени антигенные и иммуногенные свойства исходных токсинов.

 При введении в организм  человека или животных анатоксины  вызывают образование антитоксического  иммунитета, это свойство и позволяет  применять их для профилактики  тех инфекционных заболеваний, в основе  которых лежит действие экзотоксинов, выделяемых возбудителями, а также  для гипериммунизации животных - продуцентов антитоксических сывороток.

 Независимо от вида анатоксина  его иммуногенность и антигенность определяются соответствующими свойствами исходного токсина. Поэтому в лабораториях, изготавливающих эти препараты, уделяется большое внимание созданию оптимальных условий для токсинообразования.

 Для получения токсинов высокой  силы необходимы штаммы, отличающиеся  особенно выраженной способностью  к токсинообразованию в искусственных условиях. Этими свойствами обладают далеко не все штаммы токсигенных бактерия. Для производственных целей пользуются штаммами, адаптированными к искусственным средам и стойко сохраняющими способность к токсинообразованию.

 Культуры токсинообразователей сохраняются либо в высушенном состоянии, либо на средах оптимальных для данного вида бактерий. Перед употреблением для засева массовых партий штаммы пассируются на среде, используемой для получения токсина.

 При прочих равных условиях  сила токсинов определяется качеством  питательной среды, поэтому лаборатории  уделяют внимание приготовлению  питательных сред. Сырье, химикалии  и другие ингредиенты, входящие  в состав среды, подвергаются самому  тщательному контролю в биохимических  лабораториях производственных  институтов.

 Для токсинообразования применяются жидкие питательные среды, в состав которых входят мясная вода и продукты пептического (бульон Мартена, среда Рамона) или триптического (среда Попе) переваривания мяса.

 Процесс гидролиза мяса контролируется  определением общего и аминного азота и коэффициента расщепления белка, который вычисляется из отношения аминного азота к общему. Используются также безмясные казеиновые, полусинтетические среды.

 В питательную среду, предназначенную  для токсинообразования, добавляются углеводы (глюкоза, мальтоза или смесь их). При сбраживании углеводов освобождается большое количество энергии, необходимой для процессов синтеза, происходящих в развивающейся культуре. Добавление углеводов резко повышает силу образующихся в среде токсинов.

 Помимо углеводов для токсинообразования необходимы в минимальных дозах некоторые металлы. Токсинообразование дифтерийной палочки тормозится избытком железа в среде в равной мере как и отсутствием его. При наличии в среде оптимальных количеств железа токсинообразование резко усиливается.

 Токсинообразование осуществляется в полную меру при определенном рН среды. Между тем в процессе роста культуры значение рН изменяется и может достигнуть таких показателей, которые будут тормозить образование токсина.

 Для устранения этого в среды  добавляются буферные вещества, поддерживающие нужное значение  рН. Одним из таких веществ, обладающих  свойствами буфера, является уксусно-кислый натр, который добавляется в бульон в количестве 0,5-0,75 %.

 В зависимости от биологических  особенностей микроба-токсинообразователя применяются разные условия выращивания и, в частности, регулируется аэрация среды. Дифтерийная палочка образует токсин в условиях максимальной аэрации, наоборот, столбнячная палочка и другие токсигенные анаэробы в кислороде не нуждаются. В соответствии с этим в первом случае культура выращивается в тонком слое среды с большой поверхностью соприкосновения с воздухом, во втором - среда наливается высоким слоем и в нее добавляются различные адсорбенты кислорода (вата, сухие эритроциты).

 Температура выращивания и длительность  его варьируют для разных микробов. Общей для процесса токсинообразования является необходимость безукоризненной регулировки температуры в термостате. Колебания температуры отрицательно сказываются на силе токсина. Поэтому термостаты, в которых происходит токсинообразование, снабжаются точными терморегуляторами.

 В каждом отдельном случае  длительность выращивания культуры  определяется интенсивностью токсинообразования на данной серии среды. Для решения вопроса о времени прекращения культивирования производят определение силы токсина и рН среды в разные сроки выращивания.

 Когда сила токсина достигает  максимума, производят отделение  его от микробных тел, это производится  путем фильтрации через специальные  бактериальные фильтры (анаэробные  микроорганизмы) или обычные бумажные (дифтерийная палочка).

 Перевод токсических фильтратов  в анатоксин осуществляется путем длительного воздействия на них формалина при температуре 39-40 °С. Формалин соединяется свободными аминогруппами аминокислот, полипептидов и белков токсина, в связи с чем, утрачивает свои ядовитые свойства. Переход токсина в анатоксин происходит в течение 3-4 недель. Для правильного анатоксинообразования имеет значение рН токсина. Наиболее благоприятной является нейтральная или слабощелочная реакция среды.

 Анатоксины характеризуются  полной безвредностью для животных. Однако при неполном обезвреживании  в них могут сохраняться остатки  токсина, которые вызывают в чувствительном  организме поздние повреждения. Поэтому при проверке безвредности  анатоксинов наблюдение за животными  ведут в течение длительного  времени. Безвредность анатоксинов  необратима. Никакие воздействия  не приводят к восстановлению  утраченной токсичности.

 Анатоксины сохраняют почти  в полной мере антигенные свойства  токсинов. Это может быть проверено  различными методами в пробирке (реакция флокуляции, реакция связывания анатоксина) и в опытах на животных, у которых введение анатоксина вызывает образование соответствующих антитоксинов и создание антитоксического иммунитета.

 Анатоксины отличаются стойкостью; они переносят повторное замораживание  и оттаивание, противостоят действию  высокой температуры и стабильны  при длительном хранении.

 Анатоксины содержат помимо  специфических белков также балластные  вещества, от которых они могут  быть освобождены разными методами. Они основаны на способности  анатоксинов осаждаться при насыщении нейтральными солями, солями тяжелых металлов, кислотами (соляной, трихлоруксусной, метафосфорной), а также в присутствии этилового и метилового спирта при низкой температуре. Эти методы используются в настоящее время для получения очищенных концентрированных анатоксинов.

 Анатоксины адсорбируются на  различных нерастворимых веществах (фосфорные соли, гидроокись алюминия), это используется для приготовления  сорбированных анатоксинов, которые  отличаются замедленной всасываемостью  в организме, в результате чего  можно получить более напряженный  иммунитет.

 Благодаря своей безвредности, высокой антигенности и иммуногенности, анатоксины являются ценнейшими средствами профилактики и терапии ряда заболеваний.

 В настоящее время получены  анатоксины: дифтерийный, столбнячный, ботулинический, стафилококковый, дизентерийный, из токсинов, продуцируемых возбудителями  газовой гангрены, а также из  змеиного яда.

КОЖНЫЕ РЕАКЦИИ

• с токсином:

Проба Дика - внутрикожный тест на присутствие в организме Ат против эритрогенного токсина S. pyogenes. Для постановки Д. п. внутрь кожи ладонной поверхности предплечья вводят 0,1 мл стандартного эритрогенного токсина. За положительную реакцию принимают появление через 1 - 4 ч на месте введения токсина воспалительного инфильтрата диаметром в 10 мм и более. Положительная проба указывает на восприимчивость человека к скарлатине, отрицательная - на наличие иммунитета.

Реакция Шика - внутрикожная проба с дифтерийным токсином, применяемая для установления противодифтерийного иммунитета. Для постановки Ш.р. внутрь кожи ладонной поверхности предплечья туберкулиновым шприцем вводят 0,2 мл стандартного дифтерийного токсина, содержащего 1/64 ДЛМ для морской свинки. Результат учитывают через 72 - 96 ч. У людей, не имеющих Ат против токсина или имеющих их мало, на месте введения образуются краснота и инфильтрат (положительная реакция); у людей, в с-ке к-рых содержатся антитоксические Ат в концентрации 1 /30 АЕ и больше, инфильтрат не развивается или он меньше 1 см (отрицательная реакция). Результаты Ш.р. используют для оценки коллективного иммунитета и проведения профилактических прививок. В настоящее время с этой целью применяют РПГА с эритроцитарным диагностикумом.

• со взвесью микроорганизмов:

Проба Бюрне - Аллергическая кожная проба (Бюрне) нашла широкое применение. Проба вполне специфична и отличается весьма высокой чувствительностью. Определяет способность организма, зараженного бруцеллезом, специфически отвечать местной реакцией кожи на внутрикожное введение бруцеллина — фильтра 3-недельного роста бульонной культуры бруцелл любого типа. Реакция становится положительной на 3—4-й неделе от начала болезни, но бывают случаи и более раннего появления. В дальнейшем она сохраняется с большим постоянством на протяжении очень длительного периода (иногда до нескольких лет), даже после полного клинического выздоровления.

Нередко диагноз бруцеллеза ставится только на основании положительной реакции Бюрне при отрицательных серологических данных. В этих случаях необходим особенно тщательный дифференциально-диагностический подход к вопросу, чтобы исключить всевозможные заболевания с аналогичной клинической картиной.

В эпидемических очагах реакция Бюрне может быть положительной у людей, никогда не болевших клинически выраженным бруцеллезом. Положительный результат реакции Бюрне еще не является доказательством активного бруцеллеза и в то же время не исключает другого заболевания.

Для постановки реакции Бюрне бруцеллин в дозе 0,1 мл вводят строго внутрикожно в среднюю треть ладонной поверхности предплечья. Через 6—12 часов на месте инъекции появляется отек и покраснение, которые достигают максимального развития через 24 и 48 часов, после чего постепенно угасают. Однако необходимо помнить, что в редких случаях внутрикожная проба становится положительной к 72 часам — это так называемые поздние реакции. При оценке реакции принимают во внимание главным образом воспалительный болезненный отек; гиперемия кожи на месте инъекции без отека диагностического значения не имеет. Отсутствие болезненности и изменение цвета кожи, обычно сопровождающих отек, не исключает положительной оценки пробы.

Обычно в практике интенсивность реакции учитывается соответственно рекомендации Б. П. Первушина (1947) следующим образом: 1) отрицательная реакция (—) — полное отсутствие местных изменений; 2) сомнительная реакция (±) — наличие асимметрии кожной складки по сравнению с контрольной; 3) слабо положительная ( + )—наличие слабо выраженного отека и красноты диаметром 2—3 см; 4) положительная реакция ( + + )—наличие отечности диаметром 4—5 см, иногда с аденитом; 5) резко положительная (+ + + ) —при отеке 6—8 см с аденитом.

Степень интенсивности внутрикожной аллергической реакции в основном зависит от индивидуальной чувствительности организма.

Реакция на введение бруцеллина обычно ограничивается только местными явлениями, общая реакция, как правило, отсутствует, но в редких случаях у высокосенсибилизированных лиц местная реакция сопровождается лимфангитом, иногда повышением температуры, головной болью, общим недомоганием.

Интенсивность кожной реакции в течение бруцеллеза варьирует в широких пределах. Время угасания кожной сверхчувствительности к бруцеллину может быть обусловлено и такими факторами, как интеркуррентное заболевание, интоксикация, охлаждение и т. д. Н. Д. Беклемишев (1965) наблюдал десенсибилизацию под влиянием солнечных ванн, физиопроцедур.

Динамичность реакции Бюрне, по данным Б. П. Первушина (1962), отражает иммунологическое состояние организма, и сохранение ее в течение длительного времени свидетельствует о высокой резистентности организма к суперинфекции. Нами аллергическая проба Бюрне была проведена в стационаре у 265 детей. Полученные результаты представлены в табл. 6, причем сомнительные результаты объединены с отрицательными, слабо положительные— с положительными.

Из приведенных данных видно, что положительные результаты реакции Бюрне могут наблюдаться при всех формах бруцеллеза, но с наибольшей частотой они встречаются при хронических формах бруцеллеза.

Необходимо иметь в виду, что реакция Бюрне становится положительной и после вакцинации живой бруцеллезной вакциной. Она появляется через 1 — 1,5 месяца после вакцинации, бывает ясно выраженной в период от 2—3 до 12—13 месяцев, после чего начинает угасать.

Проба Манту - метод исследования напряженности иммунитета к возбудителю туберкулеза с помощью оценки реакции на специальный препарат микобактерий, туберкулин.

      История туберкулинодиагностики

      Туберкулин  в его классическом виде был  изобретен в 1890 известным немецким  врачом Робертом Кохом, именем  которого назван и возбудитель  туберкулеза - палочка Коха.

      Авторство  метода туберкулинодиагностики, то есть применения туберкулина Коха с целью диагностики, принадлежит Пирке, который в 1907 году впервые предложил применять туберкулин для диагностики туберкулеза. На поврежденную специальным бориком кожу наносился туберкулин. Позднее этот метод был модифицирован и повреждение кожи (скарификацию) стали производить специальным ланцетом. Приблизительно в таком виде проба Пирке дошла и до нынешних дней.

      Несколько  позже французский врач Манту (Mantoux) предложил другую модификацию пробы - внутрикожное введение туберкулина. Проба в модификации Манту применяется в России с 1965 года.

      Что такое туберкулин?

      Смысл туберкулина - "обозначить" в организме присутствие  туберкулезной палочки с тем, чтобы можно было оценивать  реакцию организма (качественно  и количественно) на это "присутствие". В этом смысле туберкулин отлично  справляется со своей задачей - именно по этой причине препарат  так и не был подвергнут  коренной переработке и вот  уже более 100 лет, до настоящего  дня является одним из основных  средств диагностики туберкулеза.

      И опять  немного истории. Туберкулин (точное  название "альттуберкулин", АТ) Коха - это "вытяжка", лизат из микобактерий туберкулеза, инактивированных нагреванием. Классический препарат, помимо самого туберкулина, содержал много примесей - остатки питательной среды, на которой выращивали бактерии, соли и другие вещества, влиявшие на чистоту реакции и затруднявшие оценку результата проб. С конца 60-х годов 20-го столетия были разработаны более чистые препараты туберкулина, так называемые PPD (Purified Protein Derivate - очищенный дериват белка), которые применяются и по сей день. В России применяется препарат ППД-Л, т.е. очищенный туберкулин, полученный русским ученым Линниковой в 1965 году. Современный препарат туберкулина, помимо самого туберкулина, содержит соли фосфатного буферного раствора, натрия хлорид, стабилизатор Твин-80, и фенол в качестве консерванта. В основном препарат избавлен от балластных примесей, однако он может содержать их в следовых количествах, что может влиять на результат реакции.

      Однако  до конца до сих пор неизвестен  в точности механизм взаимодействия  туберкулина с иммунной системой. С одной стороны, лизат белков (пептиды, аминокислоты) не может являться полноценным антигеном. И действительно, туберкулин не вызывает образования иммунитета. Но эта точка зрения не объясняет усиления, как при вакцинации, реакции при частой постановки пробы - т.н. "бустерный эффект" пробы Манту. Так что же такое туберкулин? Скорее всего, туберкулин можно охарактеризовать как разнородную смесь из органических веществ разной степени сложности, полученных из микобактерий.