Стандартизация лекарственного растительного сырья, обладающего адаптогенным действием, на примере растений семейства аралиевые

Министерство  здравоохранения и социального  развития Российской Федерации

Государственное бюджетное учреждение высшего                                                  профессионального образования

ПЕРВЫЙ МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ                 УНИВЕРСИТЕТ им. И.М.СЕЧЕНОВА

 

 

Кафедра фармакогнозии

 

 

 

 

Курсовая работа

 

 

 

Стандартизация  лекарственного растительного сырья,

обладающего адаптогенным действием,

 на примере  растений семейства аралиевые

 

 

 

 

 

Выполнил:

 

 

Преподаватель:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

МОСКВА

2012

 

 

СОДЕРЖАНИЕ

 

 

 

Введение………………………………………………………………………..…3

 

Глава 1. Общая характеристика некоторых растений семейства аралиевые, обладающих адаптогенным действием…………………………………...…......4

 

Глава 2. Механизм адаптогенного действия препаратов на примере препаратов женьшеня…………………………………………………………....11

 

Глава 3. Стандартизация ЛРС и препаратов женьшеня, аралии, заманихи.................................................................................................................14

 

Глава 4. Препараты, получаемые из лекарственных растений семейства аралиевые………………………………………………………………………...23

 

Заключение……………………….……………………………………………..31

 

Список литературы…………………………………………………………….32

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Введение

Издревле народная медицина разных стран использовала лекарственные  растения для лечения заболеваний. Она отмечала их позитивное и негативное влияние на организм человека и животных. Часть этих знаний дошли до наших  времен, и по сей день, использование  лекарственных растений не потеряло своей актуальности, как для лечения, так и для профилактики многих заболеваний.

Умственное и физическое перенапряжения, страхи, бессонница, депрессия, инфекционные и соматические заболевания  стали все чаще появляться у современного человека, поэтому очень важно  знать, как уменьшить влияния  этих и повысить качество жизни. Улучшить здоровье, повысить защитные силы организма  способны так называемые адаптогенные препараты.

В эту группу включены лекарственные  средства природного (растительного  и животного) происхождения, применяющиеся  в народной медицине. Несмотря на то, что механизм действия этих препаратов, их влияние на физиологические и  нейрохимические процессы недостаточно изучены, не вызывает сомнений наличие  у них фармакологических свойств, обеспечивающих их стимулирующее действие на ЦНС и функции организма  в целом. Об этом свидетельствует  длительный опыт их применения в медицине.

Но предполагается, что  в реализации адаптогенного действия играет роль усиление адаптивного синтеза РНК и белков, активности ферментов энергетического обмена и процессов регенерации. В основе общетонизирующего действия лежит активация метаболизма, эндокринной и вегетативной регуляции.

В рамках данной работы будут  рассмотрены некоторые растения семейства аралиевый (Araliaceae), такие как женьшень (Panax ginceng), заманиха высокая (Echinopanax elatum Nakai), аралия маньчжурская (Aralia mandshurica Rupr. Et Maxim).

Глава 1

Общая характеристика некоторых растений семейства аралиевые, обладающих адаптогенным действием

Распространение. Растения данной группы распространены в Приморье и Приамурье. Заманиха произрастает в поясе еловых лесов на высоте 800-1200м над уровнем моря; Женьшень произрастает дико в глухой горной тайге, преимущественно на северных склонах, в тенистых кедрово-широколиственных лесах, в глубоких, тенистых ущельях во влажной хорошо дренированной почве. За рубежом его  ареал занимал Северо-Восточный Китай и Северную Корею. Опыт выращивания женьшеня показывает, что его культура возможна там, где удается создать условия, близкие к природным по растительному покрову, освещенности, составу и увлажненности почвы. В условиях культуры женьшень развивается быстрее, и нарастание массы корня форсируется агротехническими приемами. Аралия растет в подлеске смешанных и лиственных лесов, на опушках, прогалинах, вырубках и гарях, у скал и каменистых россыпей. Встречается одиночно и небольшими группами.

Внешние признаки растений

- Женьшень: многолетнее травянистое растение с сочным стержневым корнем. Стебель высотой 30 – 80 см несет на верхушке мутовку из 4 – 5 листьев. Листья длинночерешковые, пальчатосложные, листочки на черешках эллиптические, остроконечные, по краю мелко-двояко-пильчатые, голые. Два нижних листочка мельче верхних. К моменту цветения из центра мутовки выбрасывается цветочная стрелка, несущая простой зонтик с зеленовато-белыми пятичленными цветками. Плод – ярко – красная костянка с двумя плоскими семенами. Цветет в июле, плоды созревают в августе – сентябре. Растение развивается очень медленно. Зацветает дикорастущий женьшень на 10-11м году жизни, имея при этом обычно 3 пальчатых листа ( в культуре зацветает на 3м году).[2]

- Заманиха: кустарник высотой  1 — 1,5 м, ствол густо усажен  длинными игольчатыми шипами. Листья 5—7-лопастные па длинных черешках, покрытых желтоватыми ломкими  шипами; край листовых пластинок  с острыми двойными зубцами  и бахромкой из шиповатых волосков. Цветки мелкие, зеленоватые, в  простых зонтиках, собранных в  метельчатое соцветие. Плоды ягодообразные,  оранжево-красные (Рис 4.) Цветет  в июле, плоды созревают в сентябре.

- Аралия высокая: небольшое колючее деревце высотой до 3-5 м, по внешнему виду напоминающее пальму. Ствол тонкий, прямой, неветвистый, густо усеянный шипиками, на верхушке несет тесно сближенные и горизонтально распростертые сложные листья длиной до 1 м и более. Листья на длинных черешках, дважды- и триждыперистосложные; листочки яйцевидные или эллиптические. Черешки листьев и листочков тоже усажены шипиками. Цветки мелкие, желтовато-белые, собраны в несколько густых метелок длиной до 45 см. Плоды- ягодообразные, сине-черные с 5 косточками. Цветет в июле – августе, плоды созревают с середины сентября.

Лекарственное сырье (см. табл. 1)

 

Таблица 1. Сравнительная характеристика сырья женьшеня, заманихи, аралии

Признаки	Женьшень	Заманиха		Аралия
1)группа сырья	Корни	Корневища	Корни	Корни
2) форма	Цилиндрические	Цилиндрические	Цилиндрические, изогнутый	Продольно-расщепленные
3) размеры	25см, толщина  1-2 см	20-35см, толщина 2см	15см, толщина 1см	8 см, толщина 3см
4)характер наружной поверхности	Продольно-морщинистая	Продольно-морщинистая, с чечевичками	Глубоко продольно-морщинистая	Продольно-морщинистая
5)характер излома	Зернистый	Зернистый	Зернистый	Занозистый
6) цвет наруж. поверхности	Светло-коричневый	Буровато-серая	Буровато-коричневая	Коричнево-серый
7) цвет излома	Беловато-желтый	Кора бурая, древесина  желтоватая	Кора бурая, древесина  желтоватая	Беловато-серый
8) запах	Специфический	Своеобразный		Ароматный
9) вкус	Сладкий, вяжущий, затем горьковатый	Горьковатый, слегка жгучий		Вяжущий, горьковатый

 

Микроскопия

- Женьшень: на поперечном срезе корня виден узкий слой светло-коричневой пробки, широкая кора, четкая линия камбия и древесина. Элементы флоэмы и ксилемы расположены узкими радиальными тяжами и разделены широкими, многорядными сердцевинными лучами. Флоэма состоит из мелких тонкостенных клеток, образующих прилегающие к камбию тяжи треугольной формы, над которыми лежат секреторные каналы с желтым и светло-желтым содержимым. Остальная часть коры представлена крупноклеточной, довольно рыхлой паренхимой, в которой проходят 2-3 ряда секреторных каналов с каплями красно-коричневого содержимого. Ксилема состоит из узких сосудов, расположенных радиально, и мелких клеток древесной паренхимы. В центре корня – участок первичной ксилемы в виде звездочек. В клетках сердцевинных лучей, а также в паренхиме коры и древесины, содержатся мелкие, округлые крахмальные зерна, простые и 2-6-сложные. В отдельных клетках содержатся друзы оксалата кальция (Рис 1).

 

 

 

 

 

 

 

 

Рис 1. Женьшень

1- паренхима коры               2-камбий,3-сосуды древесины, 4- секреторные  вместилища, 5-друзы оксалата кальция, 6- проводящие элементы луба

 

 

 

 

 

 

 

 

- Аралия: на поперечном  срезе корня виден слой сильно  шелушащейся пробки. Кора состоит  из тонкостенной паренхимы, среди  клеток которой расположены концентрическими  поясами секреторные каналы диаметром  от 7 до 20 мкм. Паренхимные клетки около секреторных каналов и клетки сердцевины лучей заполнены крахмальными зернами. Крахмальные зерна простые и 2-8 сложные. Кора отделяется от древесины узким слоем камбия. Древесина кольцесосудистая. Сердцевинные лучи одно-пятирядные.

В препарате после мацерации  видны спиральные и пористые сосуды с простыми или окаймленными порами, волокнистые трахеиды, волокна либриформа; обрывки секреторных каналов и крахмальные зерна.

- Заманиха: снаружи корневище покрыто пробковой тканью, состоящей из 10-15 рядов клеток. Кора состоит из паренхимных клеток с тонкими не одревесневшими стенками, среди которых концентрическими рядами расположены вместилища. Паренхима коры содержит простые и сложные крахмальные зерна и друзы оксалата кальция. Сердцевинные лучи узкие, одно-трехрядные, древесина кольцесосудистая, с отчетливо видными годичными слоями состоит из волокон либриформа, сосудов и паренхимных клеток. В корнях присутствуют склеренхимные клетки, расположенные одиночно или группами. [7]

Химический  состав

- Женьшень: в корне женьшеня сдержится сумма сапонинов. Панаксозиды представляют собой тетрациклические тритерпеноиды, относящиеся к типу даммарана. В корне женьшеня находится несколько панаксозидов. Удалось выделить 7 соединений, которые обозначили латинскими буквами A, B, C, D, E, F и G. У панаксозидов А, В и С агликоном является панаксотриол – соединение суммарной формулы С30Н54О4 , сдержащее 3 гидроксильные группы в положениях 3, 6, 12; у панаксозидов D, E, F и G агликоном является панаксодиол – соединение суммарной формулой С30Н54О3 , содержащее 2 гидроксила в положениях 3 и 12 (см. рис.2) Было установлено, что гликозиды женьшеня содержит от 3 до 6 моносахаридных остатков (глюкозы, рамнозы, арабинозы, ксилозы). Корни также содержат до 18% белковых веществ, 2 – 3 % липидов (в основном фитостерин), до 20% крахмала, 16 – 23% пектиновых веществ, а также сахарозу и моносахариды. Специфический запах корней обусловлен наличием эфирного масла (0,05-0,25%); присутствуют витамины С, В1, В2. В золе обнаружены калий, кальций, магний, марганец, железо, алюминий, кремний. Соли образованны в основном фосфорной и серной кислотами.[11]

Рис.2. Строение панаксозидов женьшеня

 

 

- Заманиха: корневища и корни очень богаты эфирным маслом, количество его может достигать 5 %. Химический состав масла недостаточно изучен. В 1972 г. выделен активный комплекс сапонинов — эхиноксозидов в количестве до 7 %. Этот комплекс включает шесть сапонинов. Строение эхиноксозидов еще полностью не раскрыто, предполагают, что их структура близка к панаксазидам женьшеня. Кроме сапонинов найдены флавоноидные гликозиды (0,9%) и кумарины (0,2%), много (до 11 %) смолистых веществ В листьях, стеблях и корневищах заманихи содержится от 2,7 до 5% эфирного масла, в состав которого входят спирты, альдегиды (до 10%), фенолы (3%), свободные кислоты (4%), лигнаны, алкалоиды, минеральные вещества.

- Аралия: корни содержат  тритерпеновые сапонины – аралозиды, эфирное масло, смолы и алкалоид аралии. Из смеси сапонинов выделено три гликозида – аралозиды А, В и С. Агликоном у них является олеаноловая каслота. Различают аралозиды по составу углеводной части и месту присоединения сахаров. Остатки сахаров – глюкозы, арабинозы,галактозы, ксилозы, и глюкуроновой кислоты – присоединяются двумя цепями: у С-3 (гликозидная связь) и С-28 (О-ацил-гликозидная связь). Кроме олеанозидов, в корнях найдены дубильные вещества, холин, эфирное масло, камедь, крахмал. Кора стволов по характеру содержащихся в ней веществ мало отличается от коры корней. Содержание аралозидов достигает в ней 4,8-7,5%.

        Факторы, влияющие на накопление сапонинов:

1) Географический - преимущественно у южных растений;

2) Освещенность - положительно  влияет на накопление (однако  женьшень требует затемнения);

3) Почвенный - внесение удобрений увеличивает содержание сапонинов;

4) Возраст растения - у  диоскореи на второй год развития сапонинов в 2 раза меньше, чем на четвертый.

       Заготовка. Сбор производят в определенную фазу накопления БАВ. Корневища с корнями диоскореи заготавливают осенью или весной (до цветения), заманихи - осенью, корень солодки - весной и летом (лучше во время цветения).

       Техника сбора. Корневища выкапывают, культивируемые выпахивают плугом или трактором (солодку). Быстро промывают (сапонины) в проточной воде, режут на куски. Некоторые виды сырья подвяливают (синюха, солодка, первоцвет).

       Сушка. Раскладывают тонким слоем, ворошат. Сушат быстро в сушилках с искусственным обогревом при температуре 55-60°С, с хорошей вентиляцией. Корень женьшеня требует особой обработки.

       Хранение. В упакованном виде как гликозидное сырье. Женьшень хранят особо в сухих хорошо проветриваемых помещениях.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Глава 2

Механизм адаптогенного действия препаратов на примере препаратов женьшеня

Общая адаптационная реакция (ОАР) начинается с раздражения периферических окончаний нервной системы и  возбуждения ретикулярной формации и центральной нервной системы. Затем через гипоталамус активируется секреторная функция передней доли гипофиза, за чем следует синтез и выброс АКТГ, стимулирующего секрецию кортикостероидов.

 Секреция кортикостероидов  зависит от уровня обменных  процессов в тканях, от токсичных  тканевых метаболитов, уменьшения  в тканях жизненно важных веществ  (энзимов, витаминов),  быстро расходуемых в борьбе со стрессом.

Гликозиды адаптогенов ингибируют секрецию коры надпочечников либо через  центральную нервную систему, либо где-то на пути между нею и надпочечниками, либо в периферических тканях. Но как  объяснить способность препаратов повышать физическую работоспособность? Как повышается устойчивость животных к дополнительному воздействию и нагрузкам? Почему гликозиды женьшеня, например, препятствуют развитию таких симптомов стресса, как общий катаболизм, изъязвления слизистых ЖКТ, гипотермии, которые наблюдаются при стрессе адреналэктомированных животных? Можно предположить, что изучаемые препараты таким образом регулируют метаболические процессы в тканях, что вмешательство адаптивных гормонов становится излишним, срабатывает обратная связь и гипофизадреналовая система функционирует с меньшим напряжением, создавая оптимальный уровень устойчивости организма.

Введение животным гликозидов женьшеня, также как и инсулина на фоне иммобилизации препятствовало образованию в-липопротеинового ингибитора. Известно, что во время стресса  ткани испытывают недостаток в глюкозе. Образование ингибитора метаболизма  глюкозы в здоровом организме, по-видимому, происходит всякий раз при стрессе. Выявлено, что переключение энергетического обмена на глюконеогенез при стрессе – положительная реакция. Энергетическое обеспечение функций организма на умеренное воздействие без включения ОАР – защита более высоко порядка (физиологическая адаптация). Защитное действие препаратов женьшеня частично объясняется их способностью снимать ингибирование в-липопротеином первых этапов утилизации глюкозы: захват глюкозы тканями и ее фосфорилирование. И все-таки функциональное состояние клеточных мембран и гексокиназной системы имеет существенное значение для неспецифической резистентности. Большое значение играет действие инсулярного аппарата,  а сам инсулин, подобно гликозидам, должен оказывать защитное действие при всякого рода стрессорных ситуациях. Это подтвердилось опытным путем. Например, спортсмены с высоким уровнем инсулярного аппарата более устойчивы к физическим нагрузкам.

Гонадотропное действие гликозидов женьшеня связано с регуляцией энергетического обеспечения уже активированных биосинтетических процессов. Оказывается, инсулин, применяемых в условиях эксперимента, как и гликозиды, ускорял половое созревание мышей. Это еще одно подтверждение сходства действия гликозидов и инсулина.

Гликозиды женьшеня обладают также антитоксическими свойствами, оказывают антигипнотическое действие при гексеналовом и мединаловом наркозе мышей.

При стрессорном воздействии поток энергии и пластического материала, обеспечивающий высокий уровень физиологической алаптации, не справляется с возросшим расходом энергии, влючается ОАР, и энергия мобилизуется из внутренних резервов организма за счет гликогенолиза и глюконеогенеза. При повреждении, превышающем УФА, общую неспецифическую защиту обеспечивают катехоламины и глюкокортикоиды. Т.е. если существуют два механизма неспецифической защиты, включающиеся поочередно, то при одновременном их использовании эффект должен суммироваться. При введении гидрокортизона с элеутерококком повышает устойчивость крыс к тяжелому стрессу в стадии истощения.

Изучаемые препараты также  оказывают влияние на и через  ЦНC. Например, не обнаружено защитное действие женьшеня на организм мыши при разрушении в условиях опыта центральной нервной системы.

Биологическое действие гликозидов осуществляется, по-видимому, непосредственно  в функционирующих органах. Роль ЦНС и эндокринных органов  в каждом случае различно. В основе механизма неспецифической защиты лежит в основном энергетическое обеспечение физиологической деятельности организма. [4]

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Глава 3

Стандартизация  ЛРС и препаратов женьшеня, аралии, заманихи

Наличие сапонинов в лекарственном  растительном сырье можно установить при помощи качественных реакций, которые проводят непосредственно с сырьем или с извлечением из него.

Качественные реакции  на сапонины основаны на их физических, химических и биологических свойствах. Для проведения качественных  реакций готовят  водный настой 1:10 при нагревании на водяной бане. После охлаждения настой фильтруют.

I. Реакции, основанные на физических свойствах.

          1) реакция на пенообразования: берут две пробирки, в одну добавляют 5 мл 0,1 моль/л HCl, в другую добавляют 5 мл 0,1 моль/л NaOH  и сильно встряхивают. Если образуется стойкая пена в обеих пробирках или в пробирке с кислотой – это говорит о кислых тритерпеновых сапонинах.

Стероидные сапонины дают обильную, стойкую пену в щелочной среде.

II. Химические методы. К ним относятся реакции осаждения сапонинов и цветные реакции.

1.Из водных растворов  сапонины  осаждаются гидроксидами  бария и магния, солями меди, ацетатом  свинца.

Причем тритерпеновые – осаждаются средним ацетатом свинца, а стероидные – основным.

2. Из спиртовых извлечений (или растворов) стероидные сапонины  и тритерпеновые сапонины выпадают в осадок при добавлении 1% спиртового раствора холестерина в виде холестеридов.

3. Стероидные сапонины, так  же как и сердечные гликозиды,  дают реакцию Либермана-Бухарда с уксусным ангидридом и кислотой концентрированной серной – образуется быстро переходящая окраска от розовой до зеленой и синей.

4.   Реакция Санье -  стероидные сапонины от тритерпеновых можно отличить по реакции с 1% раствором сурьмы треххлористой, концентрированной серной кислотой, содержащей уксусный ангидрид, если образуется желтое окрашивание.

Учитывая, что многие из перечисленных  химических реакций могут давать и другие соединения, проводят еще  и биологические испытания.

         III. Реакции, основанные на биологических свойствах сапонинов: реакция гемолиза с 2 %  взвесью эритроцитов в изотоническом растворе. Кровь становится прозрачной, ярко-красной. Для проведения этой реакции из растительно-го сырья готовят настой на изотоническом растворе.

Государственная фармакопея XI издания (вып.2) рекомендует использовать качественные реакции для подтверждения подлинности для трех видов сырья.

1.  Корни аралии маньчжурской.

Метанольное извлечение хроматографируют в тонком закрепленном слое силикагеля (на пластинках «Силуфол») в системе  растворителей хлороформ-метанол-вода (61:32:7). В качестве свидетелей используют раствор «Сапарала». Хроматограмму проявляют 20%  H2SO4 и нагревают в сушильном шкафу (1=105°С) в тече-ние 10 мин. Появляются 3 пятна вишневого цвета на уровне пятен аралозидов в «сапарале».

2.  Корни женьшеня.

а) Реакция с порошком корня женьшеня (на гликозиды). При  нанесении конц. H2SO4 на порошок корня женьшеня через 1-2 минуты появляется кирпично-красное окрашивание, переходящее в красно-фиолетовое, а затем - в фиолетовое.

б) Наличие панаксозидов доказывают при помощи разделения извлечения из корня женьшеня в тонком слое силикагеля и последующим проявлением хроматограммы раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты при нагревании. Панаксозиды проявляются в виде розовых пятен.

Единого метода количественного  определения сапонинов в лекарственном  растительном сырье нет.

Чаще всего используют физико-химические методы:

1.Потенциометрический метод. Метод основан на определении изменения электродвижущей силы (ЭДС) в результате титрования. Метод используется для определения суммы аралозидов в корнях аралии маньчжурской.

Этапы определения:  - подготовительный;    экстракция аралозидов метиловым спиртом и    их кислотный гидролиз:

 

 

 

R1, R2 – сахара    олеаноловая кислота

 

-  очистка от сопутствующих  веществ - осаждение олеаноловой кислоты в результате смены растворителя (разбавление спиртового извлечения водой и охлаждение);

-  растворение олеаноловой кислоты в горячей смеси метилового и изобутилового спиртов (1:1,5);

- количественное определение  - титрование раствором едкого  натра (0,1 моль/л) в смеси метилового спирта и бензола:            

Точку эквивалентности определяют потенциометрически.

2.  Спектрофотометрический метод. Метод основан на способности сапонинов и их окрашенных комплексов поглощать монохроматический свет при определенной длине волны. (в основном для диоскории ниппонской. Проводят кислотный гидролиз сапонинов с последующим проведением реакции свободного агликона (диосгенина) с реактивом (п-диметиламинобензальдегид), образуется окрашенный комплекс; и для корней солодки. Проводят осаждение глицирризиновой кислоты концентрированным раствором аммиака. Осадок растворяют и определяют оптическую плотность полученного раствора.

3. Гравиметрический метод  - определение экстрактивных веществ.  Метод основан на определении  сухого остатка после высушивания  суммы веществ,  извлеченных из  сырья соответствующим экстрагентом. Метод предложен для оценки качества сырья женьшеня, почечного чая, синюхи голубой, солодки.

4. Ранее для количественной  оценки сырья использовали определение гемолитического индекса и пенного числа.

Количественное определение  сапонинов гемолитическим методом основано на предположении, что гемолитическое действие прямо пропорционально количеству вещества в растворе.

Гемолитический индекс –  наименьшая   концентрация извлечения из сырья, которая вызывает полный гемолиз  эритроцитов. Для этого к настою сырья на изотоническом растворе добавляют 2% взвесь бараньих эритроцитов. В результате гемолиза кровь становится прозрачной, ярко-красной, лакированной (эритроциты перейдут в плазму). Расчет проводят на 1 г испытуемого вещества.

5. Пенное число – наименьшая  концентрация извлечения из 1 г сырья, при встряхивании которого в течение 15 секунд образуется пена, устойчивая  в течение 15 минут.

6. Определяли  силу действия  сапонинового сырья на рыбах, то есть рыбный индекс. Это наименьшая концентрация извлечения, при которой гибнут рыбы массой до 0,5 г, длиной 3-4 см в течение 1 часа.[9]

        При выяснении структуры  сапонинов  помимо традиционных методов (элементарный анализ,  определение  молекулярной массы) широко используются методы УФ-спектроскопии, ИК-спектроскопии, Ямр-спектроскопии.

       ИК- спектроскопия при исследовании тритерпенов применяется для обнаружения и характеристики двойных связей, гидроксильных групп, О-ацильных группировок, карбонильных, карбоксильных, метильных групп.

По характерным полосам  поглощения CH₃-групп в области 1245-1392 см^-1 отличают тетрациклические тритерпены от пентациклических групп альфа- и бета- амирина, а также последние друг от друга. По ИК спектрам продуктов окисления оксидом рутения (1У) предложен метод доказательства положения изолированной двойной связи в тритерпенах.

Строгое отнесение  сапонинов  к стероидам может быть сделано на основании ИК спектров и их генинов: наличие полос поглощения при 852(866), 900 (900), 922(922), 987 (982) см^-1 (спирокетальная группировка нормального и изо-(рядов) позволяет однозначно отнести  сапонины  к стероидному ряду.

      В последнее время при исследовании структур пентациклических тритерпенов получила распространение масс-спектрометрия и методы ЯМР спектроскопии.

       Установление строения углеводного остатка тритерпеновых и стероидных  сапонинов  осуществляется с помощью методов структурной химии олиго- и полисахаридов. Сюда входит: 

-определение  качественного и  количественного  состава моносахаридов;

установление последовательности моносахаридных остатков в углеводной цепи;

- определение  положения гликозидных связей в моносахаридных остатках;

- определение  размеров оксидных циклов моносахаридов;

-установление конфигурации гликозидных центров.[8]

Веществами, определяющими  фармакологическое действие корней  женьшеня и препаратов из них являются, являются тритерпеновые гликозиды даммаранового ряда и олеанолового ряда, названные гинсенозидами. В связи с этим важным показателем качества корней и настойки должно быть содержание суммы гинсенозидов.

Для определения гинсенозидов широко используют методы ВЭЖХ, комбинированные методы, сочетающие тонкослойную хроматографию с денситометрией или флуориметрией, методы спектрофотометрии. Стандартизацию качества корней и настойки женьшеня проводят по сумме экстрактивных веществ – по сухому остатку.

Рассмотрев общие возможные методы качественных реакций и количественного определения, перейдем к частным методам стандартизации.

Методика  определения суммы гинсенозидов в женьшене корнях и настойке. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5  50 мл, прибавляют 15 мл. Около 0,3 г сырья помещают в круглодонную колбу с притертой пробкой вместимостью 50 мл, прибавляют 15 мл 70% спирта, закрывают пробкой и взвешивают. Оставляют в темном месте на 1 ч, затем кипятят на водяной бане с обратным холодильником в течение 2 ч. Потерю в массе после кипячения восполняют спиртом, оставляют в темном месте и фильтруют через бумажный фильтр в сухую колбу (извлечение корня).