Количественное определение карбоксигемоглобина в крови при отравлении угарным газом. (Решение → 16247)

Заказ №38770

Количественное определение карбоксигемоглобина в крови при отравлении угарным газом.

Ответ:

СО не требует специальных методов изолирования, работают с мышечной тканью в случае пожара (нет крови) или с кровью. Образуется при неполном сгорании древесины, может быть обнаружен в выхлопных газах машин (13%), в табачном дыму (1%). CO является кровяным ядом, проникает через дыхательные пути и связывается с Hb крови, образуя довольно прочные соединения. Сродство СО к Hb в 300 раз выше, чем у кислорода. В крови лиц, отравленных СО содержится дезоксигемоглобин, оксигемоглобин, карбоксигемоглобин, а также может содержаться некоторое количество метгемоглобина, который при отравлениях СО не связывается с оксидом углерода. В тканях мышц лиц с подозрением на отравление СО содержится дезоксимиоHb (МHb), оксимиоHb (ОМHb), карбоксимиоHb (COMHb). Смертельная концентрация СО в крови >60%. Идентификация: 1. Химические методы. Берется ярко-красная кровь или мышечная ткань. Опыт Кровь с CO Контроль 1. С 30% раствором NaOH (реакция Гоппе-Зейлера). Розовый осадок буреет 2. Реакция Кункля-Вудселя с 1% раствором танина светло-карлиновокрасный осадок сероватоконичневый. 3. Реакция Бюркера с гексацианоферратом К окраска не изменяется желтоватая 4. Проба Либмана с формальдегидом окраска не изменяется коричнево-черная окраска. 2. Спектральные методы. а) При помощи спектроскопа (прибор для визуальной спектроскопической диагностики). Исследуемую кровь разводят водой до светло-розовой окраски и смотрят ее спектр. При этом спектр крови, содержащей дезоксиHb имеет одну широкую полосу при 550 нм. Спектр оксигемоглабина содержит две полосы при 557-589 нм и при 536-556 нм. Карбоксигемоглобин содержит 2 полосы при 564-579 нм и при 523-536 нм. Берут исследуемую кровь и смотрят в спектроскоп. Наблюдается 3 полосы поглощения (COHb, OHb, Hb). Далее к крови добавляют дитионит натрия. OHb восстанавливается до Hb, а COHb не восстанавливается. Если остается 3 полосы поглощения, то было отравления, а если остается только одна, то не было. Метод удобен, если содержание COHb в крови составляет 10-30%. б) Основной метод – СФМ. Берут исследуемую кровь и смотрят – 2 пика. Добавляют дитионит Na. Если сохраняются 2 пика, то отравление было (COHb не восстанавливается), а если они сливаются в один, то отравления угарным газом не было (OHb восстанавливается). Количественное определение: Количественное определение карбоксигемоглобина (НЬ • СО) в крови основано на том, что как оксигемоглобин (НЬ • О2), так и метгемоглобин могут быть восстановлены дитионитом натрия, а НЬ • СО с этим реагентом не взаимодействует. Для определения необходимы водный раствор аммиака (1 мл/л); твердый дитионит натрия Na2S2O4 • 2Н2О (хранится в эксикаторе); баллон с чистым газообразным СО или смесью СО и азота; баллон с газообразным кислородом или сжатым воздухом. Возможно получение СО взаимодействием концентрированных серной и муравьиной кислот. Для определения 0,2 мл крови добавляют к 25 мл раствора аммиака и тщательно перемешивают. Пробу делят на 3 примерно равные порции А, В и С. Порцию А хранят в закупоренной пробирке. Порцию крови В насыщают оксидом углерода до полного замещения кислорода на СО (т.е. для получения 100 % НЬ • СО), продувая газ через раствор в течение 5— 10 мин. Порцию С насыщают кислородом, продувая чистый кислород или сжатый воздух через раствор в течение 10 мин для полного замещения СО на кислород (0% НЬ • СО). К каждому раствору (А, В, С) добавляют небольшое количество (около 20 мг) Na2S2O4 • 2Н2О и 10 мл раствора аммиака и перемешивают. Снимают спектр в видимой области или измеряют поглощение при 540 и 579 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор дитионита натрия в водном растворе аммиака. Долю насыщения карбоксигемоглобином можно рассчитать по следующей формуле: HbCO (%) = {(А540/A579 раствор А) – (А540/А579 раствор С) * 100%}/ {(A540/ A579раствор В) - (А540/А579 раствор С)}, принимая во внимание, что (А540 / А579 раствор В) = 1,5, что соответствует 100 % НЬСО, (А540/А579 раствор С) = 1,1, что соответствует 0 % НЬСО. Измерения проводят в области максимальной разности между поглощением НЬ • СО [λ max (Hb*CO) =540 нм] и точке равного поглощения НЬ • СО и НЬ • О2 (579 нм, изобестическая точка). Присутствие на спектре раствора А двух почти симметричных пиков («кроличьи уши») — характерный признак отравления угарным газом.