Контрольная работа по "Микробиологии". 3

ФЕДЕРАЛЬНОЕ  ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ  ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ  УЧРЕЖДЕНИЕ

ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ

МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ  им. К.И. СКРЯБИНА»

 

Кафедра микробиологии

 

 

 

 

 

 

Контрольная работа

по Микробиологии

 

 

 

 

  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Москва 2014 год

 

 

Содержание:

Введение

1.Классификация и характеристика диагностических препаратов

2.Бактериологические красители  и методы окраски микроорганизмов

3.Характеристика возбудителя  сибирской язвы.

4.Опишите методы бактериологического исследования патматериала на дерматомикозы, посетив ближайшую ветеринарную лабораторию.

Заключение

Список литературы и интернет-ресурсов

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Введение

Микробиология — наука о живых организмах, невидимых невооруженным глазом (микроорганизмах): бактерии, архебактерии, микроскопические грибы и водоросли, часто этот список продляют простейшими и вирусами. В область интересов микробиологии входит их систематика, морфология, физиология, биохимия, эволюция, роль в экосистемах, а также возможности практического использования.

Разделы микробиологии: бактериология, микология, вирусология и т. д. В зависимости от экологических особенностей микроорганизмов, условий их обитания, сложившихся отношений с окружающей средой, и в зависимости от практических потребностей человека наука о микробах в своем развитии дифференцировалась на такие специальные дисциплины как общая микробиология, медицинская, промышленная (или техническая), космическая, геологическая, сельскохозяйственная и ветеринарная микробиология.

Ветеринарная микробиология изучает возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных, промысловых и диких животных, а также возбудителей болезней, общих животным и человеку. Ветеринарная микробиология изучает также ряд микроорганизмов, имеющих важное значение для животноводства (микрофлора пищеварительного тракта, кормов) и технологии пищевых продуктов животного происхождения, а также для обработки кожевенного и мехового сырья. Ветеринарная микробиология вооружает ветеринарную практику методами специфической диагностики, профилактики и терапии инфекционных болезней животных. Разделом ветеринарной микробиологии является санитарная микробиология.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1.Классификация  и характеристика диагностических  препаратов

Общая характеристика диагностических препаратов 
Диагностические препараты относятся к иммунобиологическим препаратам, поскольку их действие основано на иммунологических принципах и реакциях. Диагностические препараты, системы и наборы широко используют для диагностики инфекционных и неинфекционных болезней, индикации и идентификации бактерий, вирусов, грибов и простейших, для определения иммунного статуса, аллергических и иммунопатологических расстройств, иммунологической совместимости тканей, иммунных взаимоотношений матери и плода и т.д.  
Диагностикумы применяют для выявления специфических антигенов и антител, аллергенов, сенсибилизированных иммунокомпетентных клеток, факторов естественной резистентности, иммунорегуляторов. В соответствии с целевым назначением диагностических препаратов они содержат те или иные специфические иммунореагенты (антигены, антитела, аллергены, иммуномодуляторы, факторы естественного иммунитета и др.), которые используют для выявления объекта исследования в определенных реакциях или тест-системах. Эффект реакции в соответствии с характером иммунореагентов и механизма реакции регистрируют по физическим (например, мутность), химическим (например, изменение цветности) или клиническим (симптомы и проявления) показателям.

Диагностические сыворотки  
 
К диагностическим специфическим сывороткам, применяемым для обнаружения в тех или иных материалах антигенов или для определения вида и даже типа микроба или вируса, относятся агглютинирующие, преципитирующие и лизирующие (комплементсвязывающие). Такая классификация основана на функциональной способности специфических гамма-глобулинов склеивать (агглютинировать), осаждать (преципитировать), растворять (лизировать) соответствующие антигены.  
 
Агглютинирующие сыворотки  
Явление агглютинации впервые выявили Шарен и Роже в 1889 году. Однако только через несколько лет этому феномену было придано диагностическое значение. В 1896 году Грубер и Дургам установили возможность использования реакции агглютинации (РА) для определения вида микробов, выделенными от больных людей кишечными инфекциями. Указанные авторы, а также, в последующем Видаль (Widal F., 1896) и Грюнбаум (Grunbaurn A., I897) предложили использовать агглютинирующую способность сывороток крови больных для диагностики брюшного тифа, Вейль и Феликс — для диагностики сыпного тифа, Раит — для диагностики бруцеллеза, и другие.  

Преципитирующие сыворотки  
Преципитирующие сыворотки предпочтительно готовят для диагностики сибирской язвы. Первыми для этих целей получили преципитирующую сыворотку Асколи и Валенти в 1910 году. Они иммунизировали внутривенным способом лошадей слабовирулентной культурой возбудителя сибирской язвы. В последующие годы методы получения качественных сывороток совершенствовались. В настоящее время в нашей стране преципитирующую сибиреязвенную сыворотку получают путем внутривенной иммунизации лошадей слабовирулентными штаммами 916-1, 111-15, 94 и штаммом из матрикса второй вакцины Ценковского. Преципитирующие сибиреязвенные сыворотки применяют для проверки кожевенного сырья на сибирскую язву, а также при исследовании на сибирскую язву патологического материала, особенно из загнивших трупов.  
Кроме сибиреязвенных преципитирующих сывороток, готовят и применяют преципитирующие диагностические сыворотки, используемые для диагностики бруцеллеза, других бактериальных и ряда вирусных заболеваний (ящура, бешенства, лейкоза, инфекционной анемии). И этих случаях реакции преципитации ставится не в пробирках, a агаропом геле в специально выштампованных в нем луночках.  
Реакции преципитации используют в судебно-медицинской и ветеринарной экспертизе. Технологический принцип приготовления таких преципитирующих сывороток такой же как и преципитирующих сибиреязвенных сывороток. Но в качестве доноров чаще всего используют кроликов.  
 
Антитоксические сыворотки  
 
Чаще всего антитоксические сыворотки готовят с целью диагностики клостридиозов: злокачественного отека, инфекционной энтеротоксемии, ботулизма и других заболеваний, возбудители которых образуют сильные экзотоксины и имеют множество серологических типов.

При ряде инфекционных заболеваний образуются так называемые комплементсвязывающие антитела. При их определении в практике используются специфические диагностические сыворотки, содержащие такие антитела. Показательным примером является приготовление специфических диагностических ящурных сывороток.

 

Флуоресцирующие диагностические сыворотки  
Метод обнаружения антигена при помощи люминесцирующих антител был впервые предложен А. Кунсом в 1942 году. Это позволило увидеть под люминесцентным микроскопом реакцию антиген—антитело. Сущность метода заключается в том, что по известному антителу, меченному флуорхромом, определяют неизвестный антиген. Некоторые флуоресцирующие красители (флуоресцеинизоцианата, флуоресцеинизотиоцианата, диметиламинонафталинсульфанилхлорид и другие), не нарушая специфичности антител, обладают способностью вступать в химическую связь с ними.

Метод прямой РИФ был разработан Кунсом и Капланом. Гомологичное антитело, конъюгированное флуоресцентным красителем, соединяется с антигеном. В результате образуется флуоресцирующий комплекс антиген—антитело.  
Методы непрямой РИФ включают три варианта:  
1) Метод косвенного флуорохромирования антител.

2) Метод прямого флуорохромирования комплемента.

3) Метод косвенного флуорохромирования комплемента, или антикомплементарный метод, предложен Мюллером.

 
Исследования сывороток больных животных на наличие в них антител, а также определение титров антител в специфических сыворотках при их промышленном изготовлении осуществляются с помощью антигенов-диагностикумов. По происхождению такие антигены подразделяются на бактериальные, риккетсиальные, вирусные.  
Антигены бывают корпускулярными и растворимыми.  
Корпускулярные антигены представляют собой взвесь убитых, реже живых микробов в физиологическом растворе с определенной концентрацией консерванта. Во всех случаях антигены подвергают высокой степени очистки. Такие антигены используются для постановки РА, РСК, РДСК.  
 

Общая характеристика бактериофагов  
Бактериофаги представляют собой вирусы, поражающие бактерии и вызывающие их разрушение — лизис. Открытие явления лизиса у возбудителя сибирской язвы впервые зафиксировал отечественный ученый Н. Ф. Гамалея еще в 1898 году. Однако причины такого лизиса оставались невыясненными. В 1915 году Творт выделил особый фильтрующийся агент, который вызывал лизис колоний стафилококка. В 1917 году д,Эррель такой агент выделил из испражнений больного тяжелой формой бактериальной дизентерией. Этот агент вызывал растворение культур возбудителя дизентерии. Фильтрация растворенной культуры и новые добавления фильтратов к свежим культурам приводили к их лизису. Такой переносимый из культуры в культуру литический агент д,Эррелем был назван бактериофагом. В последующем, в сороковые годы, с помощью электронного микроскопа удалось подтвердить, что бактериофаг является вирусом. В настоящее время фаги выявлены почти у всех патогенных и многих непатогенных прокариотных микроорганизмов, у энтеробактерий, микобактерий, коринебактерий, стрептококков, стафилококков, сардин, споровых и актиномицетов. Бактериофаги широко распространены в природе. Практически они обнаруживаются во всех объектах среды, где обитают микроорганизмы.  
Бактериофаги, выделенные из патогенных микроорганизмов, мо гут быть использованы как специфические лечебно-профилактические биопрепараты.  
Давно установлено, что в популяции одного микроорганизма могут появиться клетки, устойчивые к фагам, и из них вырастают вторичные фагоустойчивые микроорганизмы. Изучая свойства вторичных фагорезистентных культур Salmonella ovis, И. К. Тутов (1961) установил, что они не изменяют антигенных свойств, но теряют свою вирулентность. На основании этих исследований была доказана возможность использования вторичных фагорезистентных культур с целью изготовления живых вакцин.  
Используя визуальный феномен лизиса культур микроорганизмов, специфическим бактериофагом, в необходимых случаях его используют как диагностический тест. Например, в бактериологических лабораториях феномен бактериофагии используется как высокоспецифическая реакция при диагностике сибирской язвы.  
Для этой цели биопредприятиями выпускается два сибиреязвенных бактериофага: КВИЭВ и Гамма МВА. Для их изготовления используют авирулентные штаммы возбудителя сибирской язвы. Такие культуры выращивают в МПБ или дрожжевом, бульоне. Непременным условием является то, что при засеве нужно использовать молодые, 5—6 часовые расплодки производственных штаммов возбудителя. Кроме того, сразу после посева штаммов В. antrhacis в бутыли вносится бактериофаг. Содержимое бутылей перемешивается. И они ставятся в термостат на 10—18'часов. По истечении указанного срока среду фильтруют через стерилизующие пластины или патроны. В фильтрате остается только бактериофаг. После изготовления бактериофага его разливают в ампулы и подвергают контролю на стерильность, активность и специфичность.  
Сибиреязвенный бактериофаг используется как диагностикум при дифференциации - возбудителя сибирской язвы от антракоидов.

 

Аллергены  
Аллергическая диагностика ряда инфекционных (чаще хронических) заболеваний животных и людей основана на феномене сохранения повышенной чувствительности организма к повторному введению того же антигена. В основе такой повышенной чувствительности лежат реакции-гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), которые проявляются спустя несколько часов, иногда суток после введения аллергена чувствительному (больному) организму. Обычно ГЗТ представляют собой клеточный феномен, в котором клетками-эффекторами, вступающими во взаимодействие с антигеном (аллергеном), являются сенсибилизированные Т-лимфоциты лимфатических тканей и органов (лимфатических узлов, селезенки, грудного протока, перитокиальной жидкости, периферической крови и т. д.). Такие реакции выявляются постановкой кожных, проб соответствующим аллергеном они связаны с клеточными механизмами. Для возникновения ГЗТ, как показывает широкий опыт аллергической диагностики многих, хронических инфекционных болезней, необходим длительный контакт организма с антигенами инфекционного агента. Состояние ГЗТ обычно развивается через 2—3 недели после заражения организма и может, сохраняться годами. Уровень аллергии непостоянен, может меняться в широких пределах и даже временно исчезать под действием различных факторов, например, при истощении. Животные в состоянии аллергии отвечают на введение аллергенов общей и местной реакцией. Особенно демонстративно протекает реакция при введении аллергенов внутрикожно и нанесение их на конъюнктиву. В толще кожи образуется инфильтрат, внешне проявляющийся припухлостью различной консистенции и болезненности. Инфильтраты возникают через несколько часов после введения аллергенов и достигают наибольшего развития через двое-трое суток. При нанесении аллергенов (туберкулина, маллеина) на конъюнктиву развивается гнойный конъюнктивит. Наибольшая интенсивность реакции наблюдается через 6—9—12 часов после нанесения аллергенов на конъюнктиву.  
При подкожном и внутривенном введении аллергенов зараженные животные реагируют повышением температуры тела, учащением дыхания, пульса.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2.Бактериологические  красители и методы окраски  микроорганизмов

Окраска микроорганизмов — наиболее распространенный в микробиологии комплекс методов и приемов, применяемый для обнаружения и идентификации микроорганизмов с помощью микроскопа. В нативном (естественном) состоянии бактерии имеют такой же коэффициент преломления, как и стекло, поэтому они невидимы при микроскопическом исследовании. Окраска микроорганизмов позволяет изучить морфологические особенности микробов, а иногда точно определить их вид, например некоторые микробы — одинаковые по морфологии — различно окрашиваются с помощью одних и тех же сложных методов окраски. Окраска микроорганизмов представляет собой физико-химический процесс соединения химических компонентов клетки с краской. В ряде случаев различные части микробной клетки (ядро, цитоплазма) избирательно окрашиваются различными красителями. Наиболее пригодными для окраски микроорганизмов являются анилиновые краски, главным образом основные и нейтральные, кислые краски менее пригодны. 
Приготовление окрашенного препарата включает ряд этапов: 1) приготовление мазка; 2) высушивание мазка; 3) фиксацию мазка; 4) окраску; 5) высушивание. 
Мазок готовят на чистых предметных стеклах, на середину которых наносят небольшую каплю воды и в нее с помощью бактериологической петли помещают исследуемый материал. Материал распределяют на стекле равномерным тонким слоем, размер мазка —1—2 см2. 
Препарат обычно высушивают при комнатной температуре на воздухе. Для ускорения высушивания допускается подогревание мазка в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки. 
Высушенный мазок подвергается фиксации, при которой мазок прикрепляется к стеклу (фиксируется), а микробы становятся более восприимчивыми к окраске. Способов фиксации много. Наиболее простой и распространенный — фиксация жаром — нагревание на пламени горелки (препарат проводят несколько раз через наиболее горячую часть пламени горелки). В ряде случаев прибегают к фиксации жидкостями (этиловый или метиловый спирт, ацетон, смесь равных объемов спирта и эфира — по Никифорову). После фиксации мазок окрашивают. Количество краски, наносимое на препарат, должно быть таким, чтобы покрыть всю поверхность мазка. По истечении срока окрашивания (2—5 мин.) краску сливают и препарат промывают водой. 
Существуют простые, сложные и дифференциальные способы окрашивания микробов. При простой окраске обычно употребляют одну краску, чаще всего красную — фуксин, или синюю — метиленовый синий. Фуксин красит быстрее (1—2 мин.), метиленовый синий — медленнее (3—5 мин.). Фуксин приготовляют в виде концентрированного карболового раствора (фуксин Циля), очень стойкого и пригодного для окраски в течение многих месяцев. Метиленовый синий приготовляется заранее в насыщенном спиртовом растворе, который стоек и может долго храниться. 
Сложные способы окраски, при которых применяются два или более красителя, являются ценными методами, используемыми в микробиологической диагностике инфекционных болезней. 
Наибольшее практическое значение имеет окраска по Граму (см. Грома метод окраски) и окраска по Цилю. 
Метод окраски по Цилю является основным для окраски кислотоустойчивых бактерий. Здесь применяются два красителя: карболовый фуксин Циля и метиленовый синий. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в красный цвет, все некислотоустойчивые формы — в синий. 
Метод Бениньетти является одним из способов окраски жгутиков. Протрава и окраска одним из красящих растворов, составляемых ex tempore (по мере надобности): I — сульфат цинка — 1 г, танин — 10 г, дистиллированная вода — 100 мл и II — насыщенный спиртовой раствор генцианвиолета. Смешивают 5 мл раствора I и 3 мл раствора II, наносят на препарат, нагревают до появления паров, промывают водой, высушивают и рассматривают. 
Из других сложных методов применяется так называемый негативный способ Бурри, способ Гинса для выявления капсул) и ряд других.

 

Методы окраски бактерий (мазков)

Окраску мазка производят простыми или сложными методами. Простые заключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю-Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение. Отношение микроорганизмов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые). Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кислые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители — генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спиртовые, которые и служат для окрашивания микробных клеток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.

Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.

При простых методах окраски используется лишь одна краска. 
 
С этой целью в бактериологии используются, как правило, или водный фуксин или метиленовая синька. Простые методы окраски используются для ориентировочной, предварительной, микроскопии – определения наличия в патологическом материале бактерий, определение их формы и расположения в мазке. 
 
При сложных методах окраски используются ряд красок в определенной последовательности. Такие методы используются для выявления в патологическом материале конкретных микроорганизмов, а также определения особенностей их ультраструктуры. 
 
1. Окраска по Граму используется для определения типа строения клеточной стенки. Это основной метод в бактериологии. В зависимости от окраски по Грамму все бактерии подразделяются на грампо-ложительные и грамотрицательные. 
2. Окраска по Цилю-Нильсену используется для выявления кислотоустойчивых бактерий (а именно – микобактерий), а также для обнаружения спор. 
3. Окраска по Нейссеру используется для выявления цитоплазматических включений волютина и идентификации по их наличию коринебактерий (в частности – возбудителей дифтерии). 
4. Окраска по Бури-Гинсу используется для выявления макрокапсул. 
5. Окраска по Морозову используется для выявления жгутиков. Этот метод окраски используется также для выявления трепонем. Кроме того, окраску по Морозову используют в вирусологии – для выявления в оспенных пузырьках вирусов натуральной и ветряной оспы. 
6. Окраска по Здрадовскому используется для выявления риккетсий и хламидий. 
7. Окраска по Романовскому-Гимзе также, наряду с окраской по Здрадовскому, используется для вы-явления риккетсий и хламидий; кроме того, этот метод окраски используется для выявления спирохет (с их идентификацией до рода в зависимости от цвета окрашивания), а также для выявления простейших.

Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту

1. Депарафинированные срезы доводят до воды.
2. Окрашивают 20 мин в 1 % растворе парарозанилина или основного фуксина в 1 % уксусной кислоте (раствор красителя нагревают до кипения, охлаждают и фильтруют).
3. Промывают в 3 сменах дистиллированной воды.
4. Окрашивают 5 мин в 1 % кристаллического фиолетового в дистиллированной воде.
5. Быстро ополаскивают в 1 % растворе хлорида натрия.
6. Обрабатывают 30 с в смеси: 1 часть йода + 2 части йодида калия + 100 частей дистиллированной воды.
7. Промокают фильтровальной бумагой.
8. Дифференцируют, нанося на срез смесь равных объемов анилина и ксилола (1 — 2 мл); растворы сливают до тех пор, пока облачка красителя не перестанут отходить от среза.
9. Проводят через 3 смены ксилола.
10. Заключают в бальзам или любую смолу, растворенную в ксилоле.

Результат: грамположительные бактерии сине-черные, фибрин фиолетовый, ядра красные.

Окраска бактерий по по Цилю-Нильсену

Метод используется для окраски спор и кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке мяколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей прогревания.

Методика окраски:

1. На фиксированный мазок  накладывают белую фильтровальную  бумагу и наливают карболовый  фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в в пламени до появления паров.	Карболовый фуксин-основная краска; прогревание-протрава.
2. Препарат промывают  водой, бумагу сбрасывают.
3. Препарат обесцвечивают  в 5% растворе серной кислоты.	Серная кислота-обесцвечивающий фактор.
4. Промывают водой
5. Докрашивают синькой Леффлера 3-5 минут	Синька Леффлера — дополнительная краска
6. Промывают водой, высушивают, смотрят под иммерсией	Кислотоустойчивые бактерии и споры рубиново- красного цвета, а остальная микрофлора — синего цвета

Окраска по по Ауески

Метод окраски спор бактерий, заключающийся в обработке препарата горячим 0,5% раствором соляной кислоты с последующей фиксацией и окраской по способу Циля — Нельсена; споры окрашиваются в рубиново-красный цвет, вегетативные формы — в синий.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3.Характеристика возбудителя сибирской язвы

Сибирская язва -это это острое инфекционное заболевание животных и человека, вызываемое бациллой сибирской язвы (Bacillus anthracis). Возбудитель С. я. образует споры, которые способны годами сохраняться в почве и выдерживать кипячение до 1 часа.

У животных сибирская язва характеризуется септицемией, серозно-геморрагической инфильтрацией подкожной и субсерозной соединительной ткани. Известна с глубокой древности. Часто её эпизоотии вызывали гибель огромной массы скота. В России в 1901 — 1914 годах заболело свыше 660 тысяч животных (без северных оленей), из которых 84% пало.

С. я. регистрируется на всех континентах, особенно распространена в Восточной Африке и Западной Азии. В 1972 году была зарегистрирована в 99 странах. К С. я. более восприимчивы овцы, козы, крупный рогатый скот, буйволы, лошади, ослы, олени, верблюды, менее восприимчивы свиньи; болеют также дикие копытные животные. В естественных условиях заражаются грызуны. Плотоядные звери и птицы, заразившиеся сибирской язвой при поедании трупов павших животных, способны длительное время выделять споры возбудителя с калом. Источник возбудителя инфекции — больное животное.

Как фактор передачи возбудителя сибирской язвы особенно опасен труп павшего животного, служащий источником заражения окружающей среды, главным образом почвы. Высокая устойчивость спор возбудителя во внешней среде ведёт к тому, что зараженные участки почвы десятки лет опасны для травоядных. Выносу спор из глубины почвы могут способствовать разливы рек, распашка и земляные работы в местах захоронения трупов животных. Основной путь заражения животных — с кормом и водой, чаще на пастбище. Возможно проникновение возбудителя через повреждённую кожу, слизистую оболочку рта, конъюнктиву. Заражение животных жалящими насекомыми чаще наблюдается в лесистых местностях.

Различают кожную, или карбункулёзную, и кишечную формы сибирской язвы.

Карбункулёзная форма С. я. (чаще регистрируется у лошадей, крупного рогатого скота) характеризуется появлением в месте внедрения возбудителя или вторично на голове, груди, плечах, вымени, а также на слизистых оболочках горячих, плотных и болезненных отёков. В дальнейшем на этих местах образуются язвы с неровными краями.

При кишечной форме С. я. отмечаются нарушения функции желудочно-кишечного тракта — тимпания у коров, колики у лошадей, выделение кровянистых масс из прямой кишки. Течение болезни молниеносное, острое, подострое и хроническое. В первом случае животное погибает в течение нескольких часов с явлениями судорог и одышки. Из носа и рта выделяется кровянистая пена, из прямой кишки — кровь тёмного цвета. При остром течении повышается температура тела, животные чрезвычайно угнетены (иногда крайне возбуждены), слизистые оболочки синюшны. Нарушается деятельность желудочно-кишечного тракта, беременные животные абортируют. Посмертно наблюдается выделение крови из естественных отверстий. Подостро и хронически С. я. протекает чаще у свиней, в виде ангины или фарингита, поражения подчелюстных или брыжеечных лимфатических узлов. Переболевшие животные приобретают длительный и стойкий иммунитет. Диагноз ставят на основании клинических и эпизоотологических данных, окончательно подтверждают его лабораторными исследованиями патологического материала. При подозрении на С. я. категорически запрещается вскрывать трупы павших животных.

 

Возбудитель — Bacillis anthracis — крупная (3—10x1 —1,5 мкм) неподвижная грамположительная спорообразующая аэробная палочка. В организме восприимчивых животных и человека, а также при росте на богатых белком искусственных питательных средах образует капсулу, что характерно для вирулентных штаммов. Споры образуются при условиях, неблагоприятных для жизнедеятельности вегетативной формы возбудителя; обязательны доступ атмосферного кислорода и температура среды в пределах 15—42 С. В невскрытых трупах споры не образуются. Спорообразование обеспечивает сохранение Вас. anthracis как вида. 
В мазках из патологического материала бациллы антракса обычно расположены одиночно или попарно, реже — короткими цепочками; в мазках из культур часто обнаруживают длинные цепочки. В окрашенных мазках концы палочек в цепочках выглядят обрубленными и даже вогнутыми, а вид самих цепочек напоминает бамбуковую трость. 
Вас. anthracis хорошо растет на обычньгх питательных средах. При росте на МПА образует типичные колонии R-формы — плоские, тускло-серые, шероховатые, с бахромчатыми (локонообразными) краями. В МПБ на дне пробирки образуется обильный рыхлый осадок, напоминающий кусочек ваты. При посеве уколом в столбик мясо-пептонного желатина возникает рост в виде елочки, обращенной вершиной вниз. При росте на МПА с пенициллином микробные клетки приобретают форму шаров, соединенных в цепочки (феномен «жемчужного ожерелья»). Бациллы антракса лизируются специфическими бактериофагами, обладают сложной антигенной структурой (выделены оболочечный, соматический и капсульный антигены). В организме восприимчивых животных и человека они продуцируют специфический, экзотоксин, включающий иммуногенный (протективный) антиген, воспалительный и летальный факторы.

 

Устойчивость. Вегетативные формы микроба малоустойчивы. В невскрытом разлагающемся трупе они лизируются уже через 7 сут, при 60 С погибают через 15 мин, при 100 С — мгновенно, под действием прямых лучей солнца — через несколько часов. Бациллы быстро погибают и при воздействии общепринятыми дезсредствами. Но при минус 10 С они сохраняют жизнеспособность до 24 дней, в замороженном мясе при минус 15 С — до 15 дней. Споры, напротив, чрезвычайно устойчивы. Они не погибают в разлагающемся трупном материале, годами сохраняются в воде, десятками лет — в почве. Засолка и сушка мяса и кож только способствуют сохранению спор. Сухой жар при 120—140 С убивает их лишь через 2—4 ч, автоклавирование при 120 С — через 5—10 мин, кипячение — через 15—30 мин. 10 %-ный раствор гидроокиси натрия, 4 %-ный раствор формальдегида убивают споры лишь после 2-часового воздействия. Более эффективны хлорсодержащие препараты. 
Эпизоотологические данные. Наиболее чувствительны к возбудителю сибирской язвы крупный и мелкий рогатый скот, лошади и другие однокопытные, верблюды, олени, дикие травоядные всех видов. Значительно менее чувствительны свиньи. Плотоядные, в том числе собаки и кошки, малочувствительны и болеют лишь при очень массовом заражении. Молодняк болеет чаще, чем взрослые животные. 
Источники возбудителя — больные животные, выделяющие бацилл с фекалиями, мочой, слюной. Особенно много микробов в кровянистой жидкости, вытекающей из естественных отверстий агонизирующих животных. Самый опасный фактор передачи возбудителя — труп погибшего животного. Все его органы и ткани содержат огромное количество бацилл. Вскрытие таких трупов недопустимо. Доступ атмосферного кислорода, происходящий даже при нарушениях кожного покрова, обусловливает образование спор возбудителя болезни и массовое обсеменение ими почвы и других объектов внешней среды. Не менее опасен убой больных животных. С мясом, шкурами, шерстью, костями павших или прирезанных животных споры могут переноситься на очень большие расстояния. 
Определенную роль в рассеивании возбудителя антракса играют дикие и домашние плотоядные и хищные птицы. Поедая и растаскивая части неубранных трупов, они обычно не заболевают, но продолжительное время выделяют споры с фекалиями. Известны случаи выделения возбудителя сибирской язвы от клинически здоровых грызунов, но эпизоотологическая значимость этих фактов пока неясна. 
С выделениями больных животных, с кровью при их убое, а главное — в случаях захоронения трупов споры возбудителя антракса попадают в почву. Наиболее благоприятны для возбудителя богатые гумусом почвы с нейтральной рН. В верхних слоях таких почв при благоприятных условиях температуры и влажности даже возможна вегетация спор с последующим размножением и новой споруляцией вегетативных форм. Соответственно почву признают не только фактором передачи, но и резервуаром возбудителя сибирской язвы. 
С длительным сохранением спор в почве связана стационарность сибирской язвы. Обсемененные спорами в прошлом участки почвы могут быть в самых разных зонах страны, и очень многие из них неизвестны, не учтены. В результате водной и ветровой эрозии, при разливах рек, селях, при проведении земляных работ на таких участках споры выносятся на поверхность почвы, переносятся в другие места, обусловливая опасность заражения животных. 
Возбудитель болезни попадает в организм животного с кормом или с водой, обычно при выпасе на инфицированных участках пастбищ. Заражению способствуют наличие повреждений слизистых оболочек ротовой полости и глотки, гастриты, гастроэнтериты. Резистентность животных снижается при голодании, авитаминозах, перегревании, простудах. Нельзя исключать возможность аэрогенного заражения овец при вдыхании пыли, содержащей споры возбудителя. При обилии кровососущих насекомых возможен трансмиссивный путь заражения; Известно, что слепни могут воспринять возбудителя сибирской язвы не только от больных животных или трупов, но и из инфицированных водоемов, почвы. 
Пути заражения определяют сезонность сибирской язвы. Обычно случаи болезни возникают в теплое время года, особенно при выпасе животных на пастбищах со скудным и сухим травостоем. Однако и при стойловом содержании скота возможны единичные вспышки сибирской язвы, связанные с использованием контаминированных спорами кормов (мясо-костная мука, сено или солома, заготовленные на инфицированных участках). 
Патогенез. Проникшие в организм животного споры возбудителя вегетируют. Агрессины и экзотоксин нейтрализуют местные средства защиты, и бациллы размножаются, проникают в лимфатическую систему, заносятся в лимфоузлы, а затем в кровь, где захватываются фагоцитами и разносятся по всему организму, наиболее интенсивно наводняя селезенку. Важнейшее патогенетическое значение имеют экзотоксин и капсульное вещество бацилл. Наличие капсул предотвращает фагоцитоз, а токсин разрушает клетки, фиксировавшие бацилл. Освободившиеся бациллы вновь попадают в кровь. Развивается септицемия с сильнейшей интоксикацией. Прогрессирует гипоксия, нарушается кислотно-щелочное равновесие, кровь теряет способность свертываться. В случае заражения ослабленного животного высоковирулентным штаммом возбудителя септицемия может развиваться сразу, и смерть наступает уже через несколько часов. 
Карбункулы, возникающие при заражении животного через поврежденную кожу или вторично, представляют собой очаги серозно-геморрагического воспаления в местах локализации бацилл. Они размножаются в этих очагах и продуцируют экзотоксин, вызывая явления интоксикации. Затем бациллы проникают в регионарные лимфоузлы, вызывая геморрагический лимфаденит, а из лимфоузлов — в кровь. Таким образом, и в этих случаях может развиваться септицемия. 
Течение и симптомы. Особенности течения и проявления болезни зависят от степени устойчивости животного, пути его заражения, дозы и вирулентности возбудителя. Обычная продолжительность инкубационного периода 1—3 дня. 
Различают две основные формы болезни — септическую и карбункулезную. С учетом преимущественной локализации патологических изменений выделяют также кожную, кишечную, легочную и ангинозную формы сибирской язвы. Такое деление условно, но оно облегчает описание болезни. В принципе же септицемия может возникнуть и при первичной карбункулезной форме сибирской язвы. С другой стороны, карбункулы как вторичное явление нередко развиваются при септической форме болезни. Другие локальные патологические изменения встречаются в разных сочетаниях и тоже или развиваются на фоне септицемии, или обусловливают ее возникновение. 
Обычно болезнь протекает молниеносно и остро, реже — подостро. Молниеносное течение сибирской язвы преобладает у овец и коз, несколько реже регистрируется у крупного рогатого скота и лошадей. Животные погибают внезапно, признаки болезни трудно заметить. Заболевшая овца, например, начинает тяжело дышать, дрожит, падает в судорогах и через несколько минут погибает. Из носовых отверстий и рта выделяется кровянистая пена. У лошадей и крупного рогатого скота отмечают некоторую возбужденность, быстро сменяющуюся угнетением, одышку, синюшность слизистых оболочек. Температура тела повышается до 41—42 °С. Через несколько минут, реже через несколько часов, животное погибает, обычно также в судорогах. 
При остром течении болезни у крупного рогатого скота и лошадей повышается температура тела, возникает одышка, отмечается мышечная дрожь. Животные отказываются от корма, у рогатого скота прекращается жвачка, у коров — лактация. У лошадей нередки приступы колик, у крупного рогатого скота может быть пневмония. Иногда отмечают запор или, напротив, кровавый понос. Кровь обнаруживают и в моче. Животные быстро слабеют, усиливается одышка, слизистые оболочки становятся цианотичными, нередко — с точечными кровоизлияниями. Могут возникать отеки в области глотки и гортани, шеи, подгрудка, живота. Животные обычно погибают на 2—3-й день болезни. В период агонии из носовых отверстий и рта выделяется кровянистая пенистая жидкость. 
При подостром (до 6—8 дней) течении болезни отмечают те же симптомы, которые нарастают несколько медленнее и временами ослабевают, что создает иллюзию выздоровления. Однако вскоре состояние животного вновь ухудшается, и наступает смерть. 
Главный признак хронического (2—3 мес) течения сибирской язвы — прогрессирующее истощение. Подозрение на сибирскую язву в таких случаях возникает после убоя животного: при осмотре туши обнаруживают студенисто-кровянистые инфильтраты под нижней челюстью и поражения подчелюстных и заглоточных лимфоузлов. 
Абортивная форма болезни проявляется незначительным подъемом температуры тела и обычно заканчивается выздоровлением. 
При карбункулезной форме сибирской язвы в разных частях тела животного, но чаще в области головы, груди, плеч и живота, появляются отечные припухлости — плотные, горячие и болезненные. Вскоре они становятся безболезненными, холодными, тестоватыми. В центре припухлости может начаться омертвение и изъязвление тканей. Карбункулы появляются в местах внедрения возбудителя или возникают как вторичные признаки при остром или подостром течении болезни. Иногда геморрагические инфильтраты в слизистой оболочке обнаруживают при осмотре ротовой полости больных животных. 
При кишечной форме сибирской язвы на фоне явлений септицемии отмечают (чаще у лошадей) приступы колик, запор, а затем — кровавый понос. Легочная форма болезни характеризуется признаками прогрессирующей геморрагической пневмонии и острого отека легких. 
Ангинозная форма сибирской язвы преобладает у свиней. Для нее типичны продолжительное течение, незначительное повышение температуры, признаки ангины и фарингита. Отмечают отечность шеи, одышку и затрудненность глотания, кашель. Больная свинья хрипит, давится при приеме корма, видимые слизистые оболочки цианотичны. При сильном отеке глотки и гортани животное может погибнуть от удушья. Но в большинстве случаев симптомы ангины и фарингита слабо выражены, и подозрение на сибирскую язву возникает лишь при послеубойном осмотре свиных туш. Патологоанатомические изменения. При подозрении на сибирскую язву вскрывать трупы нельзя. Но могут быть случаи, когда такое подозрение при жизни животного не возникает. Знание наиболее характерных патологоанатомических изменений позволяет заподозрить болезнь, прекратить вскрытие и принять меры, предупреждающие инфицирование объектов внешней среды. 
Трупы животных, павших от сибирской язвы, быстро разлагаются и поэтому обычно вздуты, окоченение в большинстве случаев не наступает или слабо выражено. Из естественных отверстий часто выделяется кровянистая жидкость, а иногда — кровь. В разных местах, но чаще в области подчелюстного пространства, шеи, подгрудка, живота, могут быть тестоватые припухлости. Кровь темная, несвернувшаяся (дегтеподобная). Сосуды подкожной клетчатки переполнены кровью, снятая шкура с внутренней стороны темно-красная. Подкожная клетчатка с кровоизлияниями, местами со студенисто-геморрагическими инфильтратами. Такие же инфильтраты могут быть под реберной и легочной плеврой. Серозные покровы усеяны кровоизлияниями. В грудной и брюшной полостях можно обнаружить серозно-геморрагический экссудат. Все паренхиматозные органы полнокровны. 
Селезенка обычно сильно увеличена, с размягченной пульпой; соскоб с поверхности разреза — обильный, дегтеподобный. Но в некоторых случаях изменения селезенки слабо выражены. Печень — дряблая, почки — с многочисленными кровоизлияниями. Сердце заполнено темной несвернувшейся кровью, на эндокарде — кровоизлияния. Легкие отечны, с множеством подплевральных кровоизлияний. Бронхи и трахея заполнены кровянистой пеной. Слизистая оболочка тонких кишок обычно набухшая, усеянная кровоизлияниями. При кишечной форме болезни в ней местами обнаруживают студенисто-геморрагические инфильтраты. 
При вскрытии трупов свиней обнаруживают патологические изменения миндалин, подчелюстных, заглоточных и шейных лимфоузлов — геморрагический лимфаденит. В области глотки и гортани видны студенисто-геморрагические инфильтраты. 
Очень важно учитывать, что в случаях гибели животных при молниеносном течении болезни могут отсутствовать характерные для сибирской язвы патологические изменения. 
Диагноз. Обязателен учет эпизоотологических данных, клинической картины болезни и результатов осмотра трупов. Внезапная гибель животных при пастбищном содержании на ранее неблагополучной территории или после проведения земляных работ, сильного ливня или паводка дает все основания заподозрить сибирскую язву. Необходимо учитывать также остроту и тяжесть болезни, ее септицемический характер, наличие карбункулов, а у свиней — признаков ангины. Важны и такие данные, как быстрое разложение трупов, отсутствие их окоченения, наличие кровянистых истечений. Подозрение на сибирскую язву, возникшее с учетом всех этих данных, является законным основанием для экстренного проведения мероприятий по профилактике заражения людей и животных, однако диагноз должен быть подтвержден лабораторными исследованиями. 
В лабораторию направляют ухо, отрезанное со стороны, на которой лежит труп животного, или мазок крови из надреза уха. Ухо туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между перевязками. Место отреза на трупе прижигают. От трупов свиней направляют участки отечной ткани, заглоточные, подчелюстные и другие патологически измененные лимфоузлы. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа (кроме трупов свиней), на исследование направляют часть селезенки. Взятый патологический материал помещают в чистые пробирки или банки, а высушенные мазки — в чашки Петри, которые обертывают плотной бумагой. Мазки не фиксируют. Посуду с патологическим материалом упаковывают во влагонепроницаемую тару, опечатывают и отправляют в лабораторию с нарочным. 
В лаборатории прежде всего проводят микроскопическое исследование присланного материала, в том числе микроскопию с применением люминесцирующих сывороток. По результатам микроскопического исследования немедленно дают предварительный ответ. Для выдачи окончательного заключения делают посевы патологического материала на питательные среды, заражают лабораторных животных, при необходимости ставят реакцию преципитации, идентифицируют выделенные культуры. Загнивший патологический материал исследуют только в реакции преципитации.

Дифференциальный диагноз. Некоторое сходство клинической картины и патологоанатомических изменений делает необходимым исключение эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота, брадзота и энтеротоксемии овец, а также газовых отеков, пастереллеза, пироплазмидозов, лейкоза, отравлений, колик, тимпании, солнечного и теплового удара. 
Лечение. Учитывая остроту течения сибирской язвы, к лечению изолированных заболевших животных приступают немедленно. Применяют гипериммунную противосибиреязвенную сыворотку 
или специфический гамма-глобулин в лечебных дозах. Их вводят подкожно (по 25—30 мл в одно место), а в тяжелых случаях — внутривенно. Перед введением сыворотку подогревают на водяной бане до 37—38 °С. В целях профилактики анафилаксии рекомендуется чужеродную сыворотку вначале инъецировать под кожу в дозе 0,5—1 мл, а затем, через 15—30 мин, ввести остальное количество. Если через 5—6 ч температура тела больного животного не снизится, сыворотку вводят повторно. Лечебная эффективность гамма-глобулина значительно выше, чем эффективность сыворотки.

 
Применение гипериммунной сыворотки или гамма-глобулина комбинируют с внутримышечными инъекциями антибиотиков. Наиболее эффективны сочетания пенициллина или бициллина с антибиотиками тетрациклинового ряда. Курс антибиотикотерапии — 3—4 дня. 

 

 

Иммунитет. У переболевших сибирской язвой животных развивается стойкий и продолжительный иммунитет. Первостепенная роль в иммуногенезе принадлежит протективному антигену — одному из компонентов экзотоксина, продуцируемого возбудителем болезни. Для создания активного искусственного иммунитета в настоящее время широко используют живую споровую лиофилизированную вакцину из штамма 55 и аналогичную жидкую вакцину. Иммунитет формируется через 10 дней после прививки и сохраняется не менее 12 мес. Используют и живые вакцины СТИ — жидкую и сухую. Для создания пассивного иммунитета, продолжающегося до 14 дней, применяют гипериммунную противосибиреязвенную сыворотку.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4.Методы бактериологического исследования патматериала на дерматомикозы.

Бактериологическое исследование, применяемое для выявления патогенных бактерий в материале от больных животных или их трупов, обнаружение микробов в объектах внешней среды, кормах, мясе и т. д. Характер и методика взятия проб, способ пересылки материала при различных инфекционных болезнях неодинаковы, но существуют общие положения, которые необходимо учитывать независимо от объекта исследования и свойств материала. Исследуемый материал по возможности собирают в асептических условиях в стерильную посуду и доставляют в ближайшее время с сопроводительным документом в лабораторию,  в нём указаны дата взятия, характер и источник материала, основные клинические признаки болезни и патологоанатомические изменения. Цель исследования включает 3 основных метода: микроскопию (бактериоскопию) мазков из патологического или другого исследуемого материала; выделение чистой культуры бактерий с последующим изучением морфологических, культурально-биохимических, антигенных и патогенных свойств бактерий.  Начинают с микроскопии, что позволяет обнаружить в материале микробов, изучить их морфологию (форму, размер, строение).

 Микологическое исследование – комплекс методов, применяемых для обнаружения и идентификации грибов в исследуемом материале. 
 
Микологическое исследование при диагностике микозов включает микроскопию патологического материала для обнаружения возбудителя в органах и тканях больного животного, выделение чистой культуры и ее идентификацию. В неясных случаях проверяют патогенность выделенных культур биологической пробой. Дополнительно используют серологический, аллергический, люминесцентный методы диагностики. Гистологическое исследование применяют для диагностики глубоких микозов, возбудитель которых не культивируется на питательных средах (риноспоридиоз). 
 
Отбор патологического материала при дерматомикозах производят с периферии свежих, пораженных очагов (корочки, волосы); при эпизоотическом лимфангите, споротрихозе, актиномикозе, актинобациллезе материал извлекают из не вскрывшихся абсцессов, а также исследуют гранулематозные очаги после предварительной дезинфекции их; при висцеральных микозах исследуют гной, мочу, органы и ткани, соскобы со слизистых оболочек. Патологический материал помещают в стерильные чашки Петри (при дерматофитозах можно в чистые стерильные пакеты). Для лучшего выявления элементов грибов из патологического материала готовят препараты на предметном стекле в капле 10-20%-ного раствора едкого натра с последующим добавлением 50%-ного водного раствора глицерина. Микроскопируют неокрашенные препараты (реже окрашенные по Граму, лактофуксином, хлопчатобумажной синью, Романовскому-Гимзе) при малом увеличении, затем при х40. Лучшие результаты исследования дает фазово-контрастная микроскопия. 
 
Первичную культуру возбудителей получают посевом патологического материала на агар Сабуро, сусло-агар, кровяной агар и др.(10-12 пробирок). При загрязнении посторонней микрофлорой можно применить предпосевную обработку патологического материала (700 этиловым спиртом или 2-4%-ным раствором формалина 3-6 мин.) или добавить антибиотики в питательную среду. Оптимальный рН питательной среды для патогенных грибов составляет 6,0-7,2, температура культивирования 26-300 С, для отдельных представителей 370 С. Посевы выдерживают до 30 суток, так как первичные культуры чаще развиваются медленно (напр. Tr. verrucosum). Идентификацию культур проводят по культурально-морфологическим признакам, ферментативной активности на специальных средах. При микроскопии культур (непосредственно в чашках или препаратах) выявляют мицеальные тяжи, склероции, плодовые тела, строение и характер ветвления спорангиеносцев, конидиеносцев, форму спорангиев, расположение конидий (цепочками или одиночно), отношение к окраске. Патогенность культур проверяют заражением белых мышей, морских свинок, кроликов через скарифицированную кожу, подкожно, интраперитониально, внутривенно, ингаляционным методом. Серологические реакции (агглютинации, преципитации, РСК и др.), аллергические внутрикожные пробы применяют в комплексе с другими методами при диагностике преимущественно кандидамикоза, гистоплазмоза, эпизоотического лимфангита. Люминесцентным методом выявляют у животных микроспорию.