Контрольная работа по "Микробиологии". 20

1. Заполните таблицу

     Выбор методов индикации различных  структурных элементов и определения некоторых микробов.

     2. Заполните таблицу

     Питательные среды и их дифференциация

     4. Составить схему классификации  форм иммунитета.

     5. Составить классификацию групп и факторов естественной неспецифической резистентности.

     7. Составить схему развернутой  реакции агглютинации. Дать определение  титра РА, диагностического титра.

     Рисунок 1 – Развернутая реакция агглютинации

      Титром  агглютинирующей сыворотки называется то максимальное разведение сыворотки, при котором происходит агглютинация с соответствующим   микроорганизмом.

     Титр диагностический — титр антител сыворотки крови к антигену (инфекционному агенту) серологической реакции определенного типа, выявляемый у большинства больных с данной патологией и не наблюдающийся у здоровых лиц. Является лабораторным подтверждением клинического диагноза. 

     8. Составить схему:

1. Механизм реакции иммунофлюорисценции прямой (РИФ) и непрямой (РНИФ);

Рисунок 2 – Прямая РИФ

Рисунок 3 – Непрямая РИФ 

2. Иммуноферментный  анализ (ИФА);

Рис. 4. Схема проведения иммуноферментного анализа.

а - антитела против антигена сорбированы на стенках пробирки, б - добавление исследуемой сыворотки к искомым антигенам, которые взаимодействуют с антителами и фиксируются на стенках пробирки, в - введение антител к данному антигену, меченных ферментом (пероксидазой), которые также фиксируются на стенках пробирки, г - добавление перекиси водорода и хромогена, который под действием кислорода, выделяющегося при разложении Н2О2 пероксидазой, изменяет свой цвет на желтый 

3. Иммунорадиоактивный анализ (ИРА).

     Рис. 5. Принцип радиоиммуного метода. Образование радиоактивных преципитатов при отсутствии в исследуемой жидкости искомого антигена (б) и при его наличии (в). а - добавление в исследуемую жидкость стандартной антисыворотки с антителами и антигена, меченного радиоактивным изотопом. 
 
 

     9. Зарисовать механизмы формирования ГНТ (и варианты) и ГЗТ.

      Гиперчувствительность немедленного типа (ГНТ) - гиперчувствительность, обусловленная антителами (IgE, IgG, IgM) против аллергенов. К ГНТ относятся I, II и III типы аллергических реакций (по Джеллу и Кумбсу): I тип - анафилактический, обусловленный гл. обр. действием IgE; II тип - цитотоксический, обусловленный действием , IgG, IgM; III тип - иммунокомплексный, развивающийся при образовании иммунного комплекса IgG, IgM с антигенами. В отдельный тип выделяют антирецепторные реакции.

      Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) - относится к IV типу аллергии (по Джеллу и Кумбсу). Она обусловлена взаимодействием антигена (аллергена) с макрофагами и Thl-лимфоцитами, стимулирущими клеточный иммунитет.

     10. Решить ситуационные задачи. 

     4.Какие  методы культивирования вирусов  Вы знаете? Как бы Вы поступили,  работая вирусологом, при необходимости выделить чистую культуру вируса гриппа из носоглоточной слизи?

     Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти же методы используют и для культивирования риккетсий и хламидий — облигатных внутриклеточных бактерий, которые не растут на искусственных питательных средах.

     Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые. 

     Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания получен ной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови.

     Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование invitro, и сохраняются на протяжении нескольких десятков пассажей.

     Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться invitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др.

     К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают зло качественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.

     О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток. 

     Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.

     Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.

     Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жидкости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.  
Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 6—7-дневной инкубации их просматривают на наличие ЦПД. За титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз.

     Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц является метод бляшек. 

     Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток.

     Куриные   эмбрионы.   Куриные   эмбрионы   по   сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздействиям.

     Для получения чистых культур риккетсий, хламидий и ряда вирусов в диагностических целях, а также для приготовления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим изменениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его оболочках.

     О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами.

     К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очистку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препаратов.

     Лабораторные животные. Видовая чувствительность животных к определенному вирусу и их возраст определяют репродуктивную способность вирусов. Во многих случаях только новорожденные животные чувствительны к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки — к вирусам Коксаки).

     Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности выделения тех вирусов, которые плохо репродуцируются в культуре или эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных животных посторонними вирусами и микоплазмами, а также необходимость последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данного вируса, что удлиняет сроки исследования.

     Экспресс-диагностика вируса гриппа основана на выявлении вирусного антигена с помощью РИФ; разработана тест-система для ИФА. Для выделения вирусов используют куриные эмбрионы. Индикацию вирусов гриппа осуществляют при постановке реакции гемагглютинации.  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

     Список  литературы 

1. Коротяев  А.И., Бабичев С.А. Медицинская  микробиология, иммунология и  вирусология. - Санкт- Петербург: Специальная литература ,1998.

2. Медицинская  микробиология / Под ред. В.И.Покровского,  О.К.Поздеева. - М.: ГЭОТАР Медицина, 1999.

3. А.Н.Маянский  Микробиология для врачей. - Нижний Новгород: изд - во НГМА, 1999.

4. Проблемы  инфектологии / Под ред. С.В.Прозоровского. - М., 1991.

5. Клиническая  иммунология / Под ред.Е.И.Соколова. - М., 1998.

6. Руководство  к лабораторным занятиям по  микробиологии / Под ред. Л.Б. Борисова. - М., 1984.

7. Вирусология  / Под ред. Б.Филсца, Д.Найпа. - М.,1989.

8. Ярилин  А.А. Основы иммунологии. - М.: Медицина, 1999.

9. Галактионов  В.Г. Иммунология. - М.: Изд-во МГУ, 1998.