Ветеринарная вирусология

Министерство сельского  хозяйства Российской Федерации  ФГОУ ВПО «Чувашская государственная  сельскохозяйственная академия»                  Кафедра патанатомии и инфекционных болезней.

КОНТРОЛЬНАЯ РАБОТА

                                    ВЕТЕРИНАРНАЯ ВИРУСОЛОГИЯ

Контрольную работу выполнила студентка 3 курса, по дисциплине Ветеринария  заочного факультета (ускоренного обучения) № студенческого билета:10310 Калягина Лариса Александровна.

                                                            Чебоксары 2013г.

        1. Какими путями вирусы могут передаваться от больных животных здоровым? Какими путями вирусы могут внедряться в организм здоровых животных? Приведите примеры.

2. Что такое культуры клеток, какие они бывают, их возможности, для чего и как они используются в вирусологии?

3. В промышленном комплексе откормочного  типа среди телят 5-8-месячного  возраста возникло заболевание,  которое протекало со следующими  клиническими признаками: лихорадка (39,5-42°С), учащенное и затрудненное дыхание, угнетение, гиперемия и отечность конъюнктивы и слизистой оболочки носовой и ротовой полостей, обильное слезотечение, слюноотделение и истечения из носовой полости слизистого или слизисто-гнойного характера, сильный кашель. Понос через 1-4 дня после появления первых признаков заболевания. Эрозия и язвенные поражения в ротовой полости. Около 10% заболевших телят имели помутнение роговицы глаз. Заболеваемость - 80%, летальность - 8%.

При вскрытии павших животных установлено: эрозии и язвы на слизистой оболочке губ, щек, десен, гортани, пищевода и  сычуга. Слизистая оболочка тонкого  кишечника гиперемирована с кровоизлияниями.

1. Какими путями вирусы  могут передаваться от больных  животных здоровым? Какими путями вирусы могут внедряться в организм здоровых животных? Приведите примеры.

Вирусное заболевание является процессом взаимодействия вируса с микроорганизмом. Началом этого процесса служит проникновение вируса в организм. Следует запомнить, что вирус может проникать через органы дыхания (аэрогенно), через пищеварительный тракт (алиментарно), через слизистые оболочки и неповрежденную кожу, а также через поврежденные покровы (в т. ч. через укусы). Отметьте для себя пути проникновения в организм наиболее распространенных вирусов.

Из места внедрения вирус  по кровеносным, лимфатическим путям или нервам распространяется по организму. Для каждого вируса характерен определенный путь распространения. Распространяясь по организму, вирус локализуется в чувствительных к нему клетках определенного типа. Чувствительной к вирусу является та клетка, которая имеет на поверхности рецепторы, комплементарные данному вирусу и необходимые для адсорбции на ней вируса, и в цитоплазме ферменты, для его депротеинизации. По тому, в каких клетках организма размножаются и локализуются те или иные вирусы, их условно разделяют на нейротропные, дерматропные, пневмотропные, энтеротропные, висцеротропные и пантропные (размножающиеся в клетках различного типа).

Размножаясь в тех или иных клетках, вирус накаплива 
ется, вызывает изменения физиологии клеток вплоть до их 
гибели. Непосредственными причинами, ведущими к повреж 
дению и даже гибели пораженных вирусом клеток, могут 
быть: механическое воздействие массы вирионов (вплоть до разрыва клетки), токсическое действие промежуточных и структурных белков (в т. ч. ферментов), интеграция вирусного генома с клеточным, накопление в клетке кристаллопо-добных. вирусных образований (в т. ч. телец-включений и др.), паралич клеточного генома.

По мере нарастания числа пораженных вирусом клеток развиваются патологические изменения в функционировании органа или нескольких органов. Последнее  ведет к появлению определенных клинических признаков заболевания  и патологоанатомических изменений  органов и тканей. Клинические  симптомы болезни представляют наиболее характерное ее проявление. Время  от момента заражения до появления  клинических симптомов называется инкубационным периодом.

В зависимости от вирулентности  возбудителя и реактивности организма течение инфекционного процесса по форме может быть острым, хроническим и латентным. Острое течение инфекции характеризуется яркими клиническими признаками, протекает быстро и заканчивается выздоровлением или гибелью. Хроническое течение болезни характеризуется стертыми клиническими признаками и длительным течением. Латентное течение характеризуется отсутствием клинических проявлений болезни. Под действием различного характера стрессов хроническое и латентное течения могут обостряться.

Контактный путь передачи: прямой путь (прямой путь при непосредственном контакте здорового животного с  больным) и непрямой путь передачи (возбудитель  передаётся через предметы ухода, одежду обслуживающего персонала и т.д.) ; 
   Воздушный (респираторный) путь передачи возбудителя осуществляется через воздух в виде аэрозоля жидких и твёрдых частиц, содержащих патогенные микроорганизмы ; 
   Кормовой и водный (алиментарный) пути передачи возбудителя наблюдаются при большинстве инфекционных болезней . Патогенные микробы попадают в корм и воду с выделениями больных животных (слюна, выделения из глаз, носа) ; 
   Трансмиссивный путь передачи возбудителей инфекций осуществляется живыми переносчиками, прежде всего членистоногими (блохи, клещи, комары и т.д.). 
Некоторые владельцы наотрез отказываются прививать животных и переубедить их невозможно до тех пор, пока у них не заболел любимец.

Признаки и симптомы болезни  являются результатом, кульминацией цепи взаимодействий между вирусом и  организмом хозяина. Прежде всего вирус  должен внедриться в организм, затем  пройти период первичной репликации, за которым следует его поступление  в конечные точки — ткани-мишени После того как вирус достиг органа-мишени, он должен внедриться в восприимчивую  популяцию клеток, где произойдет его успешная репликация. Итогом этого  последнего этапа может быть продуктивный инфекционный процесс с повреждением клеток или без него, латентное  течение инфекции или персистирующая инфекция. Для того чтобы передача инфицирующего вируса следующему хозяину  произошла, вирус должен успешно  миновать или преодолеть иммунный ответ  организма, а также целый ряд  других защитных механизмов. Множество  вирусных репликаций может произойти  до того, как какие-либо признаки и  симптомы заболевания станут клинически заметны. Этот инкубационный период может варьировать от нескольких дней (при гриппе) до нескольких недель (корь, ветряная оспа), месяцев (бешенство, гепатит) и даже лет (медленные инфекции).

Большая часть вирусных болезней является результатом воздействия  экзогенных вирусов. Однако в некоторых  случаях заболевание развивается  вследствие реактивации эндогенных вирусов, скрытых в специфических  клетках организма. Примерами инфекций, вызванных реактивированными эндогенными  вирусами, могут служить опоясывающий герпес, прогрессирующая мультифокальная  лейкозэнцефалопатия (паповавирусы JC или ВК), рецидивирующий лабиальный и генитальный герпес (простой  герпес) и некоторые типы цитомегаловирусов (ЦМВ

Бешенство

– вирусное заболевание, поражающее нервную систему животных, характеризующееся 100% гибелью животных. Болеют все  млекопитающие , включая человека. Основными  источниками бешенства являются собаки, волки, лисы, крысы, мыши, летучие  мыши и т.д.. Вирус передаётся при  попадании слюны от заражённого  животного на повреждённый кожный покров или слизистою оболочку. Кошка  может заразиться во время драки  с собакой, другой кошкой, при поедании крыс или мышей. Вакцинировать животных отданного заболевания необходимо с 3-х месячного возраста с ежегодной  ревакцинацией.  
От попадания вируса в организм животного до появления клинических признаков (по данным различных исследований) может пройти от 1-го месяца до 2-х лет. При появлении подозрений на бешенство владелец животного не может вспомнить, были ли контакты его любимца с другими животными. 
Больные животные (волк, лиса, собаки и др. псовые) во время проявления клинических признаков могут преодолевать расстояния более 100 км.. При этом они не боятся ни человека, ни машин, ни шума городов, ни других животных.

Панлейкопения

кошек – вирусное заболевание, характеризующееся летальностью в 80% случаях заболевания кошек. Возбудитель  панлейкопении обладает высокой  контагиозностью (способность инфекционных болезней распространяться путём передачи возбудителя от больных животных здоровым) и устойчивостью во внешней  среде (может сохраняться в квартире до 1 года). Данное заболевание передаётся не только при контакте с больным  животным, но и воздушно - капельным  путём, а это значит, что, несмотря на то, что ваше животное не выходит  на улицу и не общается с другими  животными, оно может заболеть. Дело в том, что возбудитель данного  заболевания выделяется с фекалиями  и мочой больного животного и, проходя по улице, вы сами можете принести его в свой дом на обуви или  одежде. Обладая высокой вирулентностью, находясь в ничтожно малом количестве, вирус вызывает заболевание, которое  может закончиться летальным  исходом, достаточно кошке понюхать вашу обувь или пройти там, где  обувь стояла.

Герпесвирус

Ринотрахеит кошек (герпесвирус  тип 1) – вирусное заболевание кошек, проявляющееся заболеванием верхних  дыхательных путей. Возбудитель  заболевания является неустойчивым в окружающей среде – до 24 часов. 
Возбудитель заболевания является высокопатогенным (патогенность – способность микроорганизма вызывать инфекцию) для кошек и обладает высокой контагиозностью. 
Поэтому, приходя в гости, где есть кошки, являющиеся вирусоносителями, вы можете перенести возбудителя заболевания на своей одежде, обуви. 
Данная инфекция хорошо распространена в питомниках, приютах для животных и других местах, где собирается большое количество кошек, и менее распространена у изолированных домашних животных.  
Дело в том, что животные могут быть скрытыми вирусоносителями, не проявляющими клинических признаков. При стрессовых факторах (изменение места жительства, посещение выставки кошек и т.д.) и применение лечебных препаратов ряда кортикостероидов (кортикостероиды стимулируют выделение вируса) может начаться вирусовыделение в окружающую среду и перезаражение животных. Поэтому любое животное, недавно перенёсшее респираторное заболевание или с периодически повторяющимися симптомами респираторного заболевания может рассматриваться как вирусоноситель. Нет данных, что вакцинация защитит тех животных, которые являются вирусоносителями, но вакцинация животных значительно уменьшает распространение вируса в популяции кошек.

Калицивирус

Калицивирус кошек – это  вирус, имеющий чашевидную вдавленность на своей поверхности, от чего и пошло  их название «калицивирус» (calices – чашка). Он может существовать во внешней  среде около двух недель. Как и  ринотрахеит кошек, обладает высокой  патогенностью и контагиозностью. При исследовании кошек было выявлено наличие калицивируса у 40% животных, находящихся в питомнике, у 25% животных, посещающих выставки, и у 8% животных, находящихся дома. Кроме того, было установлено, что половина кошек  выделяют вирус в течение 75 дней после исчезновения клинических  симптомов, большинство остальных  – в течение 30 дней и незначительное количество животных продолжают выделять вирус в течение всей жизни. 
Передача инфекции происходит в основном через прямой контакт от больного животного к здоровому. При этом больное животное зачастую не имеет никаких видимых признаков заболевания. В большинстве случаев заражаются молодые животные в период, когда заканчивается материнский иммунитет. Передача инфекции происходит через выделения из ротовой полости, слизистой носа и глаз; через заражённые выделениями больных животных клетки, посуду и т.п.. Аэрозольный путь передачи вируса имеет место при чихании, когда большие капли слизи из носовой полости разлетаются на расстояние до 2-х метров.

2. Что такое культуры  клеток, какие они бывают, их возможности, для чего и как они используются в вирусологии?

Культуры клеток представляют собою клетки многоклеточных организмов (напр. животных), живущие и размножающиеся вне организма (in vitro). В настоящее время в практике вирусологических работ используются главным образом однослойные культуры клеток, образующие на стекле (в пробирке, матрасе) слой, толщиной в одну клетку. Однослойные культуры клеток делятся на первичные, перевиваемые и диплоидные.

Первичные культуры клеток получают из тканей животных, чаще всего убитых в эмбриональном возрасте, т. к. клетки эмбрионов обладают наиболее высокой способностью к размножению in vitro. Для этого от эмбриона (коровы, овцы, свиньи, курицы) берут определенный орган (чаще почку) и с помощью 0,25%-го раствора трипсина (фермент поджелудочной железы, расщепляющий белки) разделяют на отдельные клетки. Полученные живые клетки суспендируют в питательной среде (специально разработаны такие среды), высевают в пробирки или матрасы и инкубируют в термостате при температуре +37° в горизонтальном положении. В термостате живые клетки оседают на стенку пробирки или матраса, плотно к ней пристают и начинают размножаться митотическим путем (под слоем питательной среды). Размножение продолжается до тех пор, пока не образуется сплошной слой толщиной в одну клетку. Питательную среду меняют по мере загрязнения ее продуктами жизнедеятельности клеток. Выросший слой клеток можно снять со стекла (тем же раствором трипсина) и, ресуспендировав в новой питательной среде, пересадить на большее количество новых матрасов или пробирок. Таких пересадок (или перевивок) удается сделать не более 2-5, а далее клетки стареют и перестают размножаться.

Иногда, в исключительно редких случаях, удается получить культуру клеток, которая сохраняет способность  перевиваться бесконечное число  раз (полагают, что это результат  соответствующей мутации). Тогда  такую культуру клеток бесконечно поддерживают в лаборатории, присваивают ей название (напр.«СПЭВ», «КЭМ» и др.) и она  именуется перевиваемой культурой  клеток. Кроме способности бесконечно перевиваться перевиваемые культуры клеток приобретают и ряд других особенностей, в частности гетероплоидный набор хромосом (у первичных культур клеток он диплоидный).

Диплоидными называются культуры клеток, также получившиеся из первичных, но сохраняющие диплоидный набор хромосом и способные к большому (но не бесконечному) количеству перевивок (примерно 50-70).

Все три типа клеток пригодны для  размножения в них вирусов. При  этом большей частью размножение  вируса удается получить в культуре клеток, полученных из тканей того вида животного, от которого выделен данный вирус и к которому он уже адаптировался.

Заражение культур клеток производится внесением в пробирку или матрас с выросшим монослоем клеток вируссодержащего материала и после небольшой  выдержки (0,5-1,5 часа), необходимой для  адсорбции вируса на клетках, добавляется поддерживающая питательная среда (т. е. среда, не обеспечивающая дальнейшее размножение клеток). При дальнейшей инкубации в термостате адсорбировавшиеся на клетках вирусные частицы проникают в клетки и репродуцируются в них; затем вирусы выходят в культуральную жидкость, заражают новые клетки, из них в следующие и так до тех пор, пока не останется живых клеток.

Обнаружение вируса, размножающегося  в культуре клеток, производят в  основном по цитопатическому действию (ЦПД). ЦПД - это любые изменения  клеток, под влиянием размножающегося  в ней вируса. Наиболее быстро и  просто обнаруживаются морфологические  изменения, путем просмотра зараженных культур клеток под малым увеличением микроскопа. Наблюдаемые формы ЦПД весьма разнообразны (от едва заметных изменений в цитоплазме до полного распада клеток на фрагменты).

Обнаружение в культуре клеток вируса, способного вызывать гемагглюти- инацию (склеивание эритроцитов) возможно методом  гемадсорбции. Гемадсорб- цией называется прилипание (адсорбция) эритроцитов  крови к поверхности кле- 
ток, зараженных гемагглютинирующим вирусом. Чтобы наблюдать гемадсорбцию, из пробирки с зараженной вирусом культурой клеток удаляют культуральную жидкость вносят 2-3 капли 0,5% -ной суспензии эритроцитов. Пробирку оставляют лежать горизонтально около 10 минут, после чего слой клеток слегка споласкивают физраствором (чтобы смыть эритроциты). Одновременно то же проделывают с пробиркой, в которой та же культура клеток, но не зараженная (контроль). Если в зараженной культуре клеток идет репродукция вируса, на таких клетках под микроскопом можно видеть адсорбировавшиеся эритроциты при отсутствии таковых в контроле.

Размножающиеся в культурах  клеток вирусы частично или полностью (в зависимости от степени разрушения клеток) выходят в культуральную жидкость, которая и используется после этого как готовая суспензия , вируса. Если не все клетки культуры успели самопроизвольно разрушиться под влиянием размножения в них вируса, можно добиться выхода из них вируса в жидкость дезинтеграцией клеток путем 2-3-кратного замораживания и оттаивания.

Вирусологические методы исследования

методы изучения биологии вирусов и их идентификации. В  вирусологии широко используются методы молекулярной биологии, с помощью  которых удалось установить молекулярную структуру вирусных частиц, способы  проникновения их в клетку и особенности  репродукции вирусов, первичной  структуры вирусных нуклеиновых  кислот и белков. Развиваются методы определения последовательности составляющих элементов вирусных нуклеиновых  кислот и аминокислот белка. Появляется возможность связать функции  нуклеиновых кислот и кодируемых ими белков с последовательностью нуклеотидов и установить причины внутриклеточных процессов, играющих важную роль в патогенезе вирусной инфекции.

Вирусологические методы исследования основаны также на иммунологических процессах (взаимодействие антигена с  антителами), биологических свойствах  вируса (способность к гемагглютинации, гемолизу, ферментативная активность), особенностях взаимодействия вируса с  клеткой-хозяином (характер цитопатического  эффекта, образование внутриклеточных  включений и т.д.).

В диагностике вирусных инфекций, при культивировании, выделении  и идентификации вирусов, а также  при получении вакцинных препаратов широко применяют метод культуры ткани и клеток. Используют первичные, вторичные, стабильные перевиваемые и  диплоидные клеточные культуры. Первичные  культуры получают при диспергировании  ткани протеолитическими ферментами (трипсином, коллагеназой). Источником клеток могут быть ткани и органы (чаще почки) эмбрионов человека и  животных. Суспензию клеток в питательной  среде помещают в так называемые матрацы, бутыли или чашки Петри, где после прикрепления к поверхности  сосуда клетки начинают размножаться. Для заражения вирусами используют обычно клеточный монослой. Питательную  жидкость сливают, вносят вирусную суспензию  в определенных разведениях и  после контакта с клетками добавляют  свежую питательную среду, обычно без  сыворотки.

Клетки большинства первичных  культур могут быть пересеяны, такая  культура называется вторичной. При  дальнейшем пассировании клеток формируется  популяция фибробластоподобных  клеток, способных к быстрому размножению, большая часть которых сохраняет  исходный набор хромосом. Это так  называемые диплоидные клетки. При  серийном культивировании клеток получают стабильные перевиваемые клеточные  культуры. При пассажах появляются быстро делящиеся однородные клетки с гетероплоидным набором хромосом. Стабильные линии клеток могут быть однослойными и суспензионными. Однослойные  культуры растут в виде сплошного  слоя на поверхности стекла, суспензионные  — в виде суспензий в различных  сосудах с использованием перемешивающих устройств. Существует более 400 линий  клеток, полученных от 40 различных видов  животных (в т.ч. от приматов, птиц, рептилий, амфибий, рыб, насекомых) и человека.

В искусственных питательных  средах можно культивировать кусочки  отдельных органов и тканей (органные культуры). Эти типы культур сохраняют  структуру ткани, что особенно важно  для выделения и пассирования вирусов, которые не репродуцируются  в недифференцированных тканевых культурах (например, коронавирусы).

В зараженных клеточных культурах  вирусы можно обнаружить по изменению  морфологии клеток, цитопатическому  действию, которое может иметь специфический характер, появлению включений, путем определения вирусных антигенов в клетке и в культуральной жидкости; установления биологических свойств вирусного потомства в культуральной жидкости и титрования вирусов в культуре ткани, куриных эмбрионах или на чувствительных животных; путем выявления отдельных вирусных нуклеиновых кислот в клетках методом молекулярной гибридизации или скоплений нуклеиновых кислот цитохимическим методом с помощью люминесцентной микроскопии.

Выделение вирусов является трудоемким и длительным процессом. Его осуществляют с целью определения  циркулирующего среди населения  типа или варианта вируса (например, для идентификации сероварианта вируса гриппа, дикого или вакцинного штамма вируса полиомиелита и т.д.); в случаях, когда это необходимо для проведения срочных эпидемиологических мероприятий; при появлении новых  типов или вариантов вирусов; при необходимости подтверждения  предварительного диагноза; для индикации  вирусов в объектах окружающей среды. При выделении вирусов учитывают  возможность их персистирования  в организме человека, а также  возникновения смешанной инфекции, вызванной двумя и более вирусами. Генетически однородная популяция  вируса, полученная от одного вириона, называется вирусным клоном, а сам  процесс получения его — клонированием.

Для выделения вирусов  применяют заражение восприимчивых  лабораторных животных, куриных эмбрионов, но чаще всего используют культуру ткани. Наличие вируса обычно определяют по специфической дегенерации клеток (цитопатический эффект), образованию  симпластов и синцитиев, обнаружению  внутриклеточных включений, а также  специфического антигена, выявляемого  с помощью методов иммунофлюоресценции, гемадсорбции, гемагглютинации (у гемагглютинирующих вирусов) и т.д. Эти признаки могут  обнаруживаться лишь после 2—3 пассажей вируса.

Для выделения ряда вирусов, например вирусов гриппа, используют куриные эмбрионы, для выделения  некоторых вирусов Коксаки и  ряда арбовирусов — новорожденных  мышей. Идентификацию выделенных вирусов  проводят с помощью серологических реакций и других методов.

При работе с вирусами определяют их титр. Титрование вирусов проводят обычно в культуре ткани, определяя  наибольшее разведение вируссодержащей  жидкости, при котором происходит дегенерация ткани, образуются включения  и вирусоспецифические антигены. Для титрования ряда вирусов можно  использовать метод бляшек. Бляшки, или негативные колонии вирусов, представляют собой очаги разрушенных  под действием вируса клеток однослойной  культуры ткани под агаровым покрытием. Подсчет колоний позволяет провести количественный анализ инфекционной активности вирусов из расчета, что одна инфекционная частица вируса образует одну бляшку. Бляшки выявляют путем окрашивания культуры прижизненными красителями, обычно нейтральным красным; бляшки не адсорбируют краситель и поэтому видны как светлые пятна на фоне окрашенных живых клеток. Титр вируса выражают числом бляшкообразующих единиц в 1 мл.

Очистку и концентрацию вирусов  обычно осуществляют путем дифференциального  ультрацентрифугирования с последующим  центрифугированием в градиентах концентраций или плотности. Для очистки вирусов  применяют иммунологические методы, ионно-обменную хроматографию, иммуносорбенты и т.д.

Лабораторная диагностика  вирусных инфекций включает обнаружение  возбудителя или его компонентов  в клиническом материале; выделение  вируса из этого материала; серодиагностику. Выбор метода лабораторной диагностики  в каждом отдельном случае зависит  от характера заболевания, периода  болезни и возможностей лаборатории. Современная диагностика вирусных инфекций основана на экспресс-методах, позволяющих получать ответ через  несколько часов после взятия клинического материала в ранние сроки после заболевания, К ним  относятся электронная и иммунная электронная микроскопия, а также  иммунофлюоресценция, метод молекулярной гибридизации, выявление антител  класса lgM и др.

Электронная микроскопия  вирусов, окрашенных методом негативного  контрастирования, позволяет дифференцировать вирусы и определять их концентрацию. Применение электронной микроскопии  в диагностике вирусных инфекций ограничивается теми случаями, когда  концентрация вирусных частиц в клиническом  материале достаточно высокая (10⁵ в 1 мл и выше). Недостатком метода является невозможность отличать вирусы, принадлежащие к одной таксономической группе. Этот недостаток устраняется путем использования иммунной электронной микроскопии. Метод основан на образовании иммунных комплексов при добавлении специфической сыворотки к вирусным частицам, при этом происходит одновременная концентрация вирусных частиц, позволяющая идентифицировать их. Метод применяют также для выявления антител. В целях экспресс-диагностики проводят электронно-микроскопическое исследование экстрактов тканей, фекалий, жидкости из везикул, секретов из носоглотки. Электронную микроскопию широко используют для изучения морфогенеза вируса, ее возможности расширяются при применении меченых антител.

Метод молекулярной гибридизации, основанный на выявлении вирусоспецифических  нуклеиновых кислот, позволяет обнаружить единичные копии генов и по степени чувствительности не имеет  себе равных. Реакция основана на гибридизации комплементарных нитей ДНК или  РНК (зондов) и формировании двунитчатых  структур. Наиболее дешевым зондом является клонированная рекомбинантная ДНК. Зонд метят радиоактивными предшественниками (обычно радиоактивным фосфором). Перспективно использование колориметрических реакций. Существует несколько вариантов молекулярной гибридизации: точечная, блот-гибридизация, сэндвич-гибридизация, гибридизация in situ и др.

Антитела класса lgM появляются раньше, чем антитела класса G (на 3—5-й  день болезни) и исчезают через несколько  недель, поэтому их обнаружение свидетельствует  о только что перенесенной инфекции. Антитела класса lgM выявляют методом  иммунофлюоресценции или с помощью  иммуноферментного анализа, используя  анти- μ-антисыворотки (сыворотки против тяжелых цепей lgM).

Серологические методы в  вирусологии основаны на классических иммунологических реакциях . Реакции связывания комплемента, торможения гемагглютинации, биологической нейтрализации, иммунодиффузии, непрямой гемагглютинации, радиального гемолиза, иммунофлюоресценции, иммуноферментного, радиоиммунного анализа. Разработаны микрометоды многих реакций, техника их непрерывно совершенствуются. Эти методы используют для идентификации вирусов с помощью набора известных сывороток и для серодиагностики с целью определения нарастания антител во второй сыворотке по сравнению с первой (первую сыворотку берут в первые дни после заболевания, вторую — через 2—3 нед.). Диагностическое значение имеет не менее чем четырехкратное нарастание антител во второй сыворотке. Если выявление антител класса lgM свидетельствует о недавно перенесенной инфекции, то антитела класса lgC сохраняются в течение нескольких лет, а иногда и пожизненно.

Для идентификации индивидуальных антигенов вирусов и антител  к ним в сложных смесях без  предварительной очистки белков используют иммуноблоттинг. Метод сочетает фракционирование белков с помощью  электрофореза в полиакриламидном геле с последующей иммуноиндикацией белков иммуноферментным методом. Разделение белков снижает требования к химической чистоте антигена и позволяет  выявлять индивидуальные пары антиген  — антитело. Такая задача актуальна, например, при серодиагностике ВИЧ-инфекции, где ложноположительные реакции  иммуноферментного анализа обусловлены  наличием антител к клеточным  антигенам, которые присутствуют в  результате недостаточной очистки  вирусных белков. Идентификация антител  в сыворотках больных к внутренним и наружным вирусным антигенам позволяет  определять стадию заболевания, а при  анализе популяций — изменчивость вирусных белков. Иммуноблоттинг при  ВИЧ-инфекции применяют как подтверждающий тест для выявления индивидуальных вирусных антигенов и антител  к ним. При анализе популяций  метод используют для определения  изменчивости вирусных белков. Большая  ценность метода заключается в возможности  анализа антигенов, синтезируемых с помощью технологии рекомбинантных ДНК, установлении их размеров и наличия антигенных детерминант.

3. В промышленном комплексе  откормочного типа среди телят  5-8-месячного возраста возникло  заболевание, которое протекало  со следующими клиническими признаками: лихорадка (39,5-42°С), учащенное и затрудненное дыхание, угнетение, гиперемия и отечность конъюнктивы и слизистой оболочки носовой и ротовой полостей, обильное слезотечение, слюноотделение и истечения из носовой полости слизистого или слизисто-гнойного характера, сильный кашель. Понос через 1-4 дня после появления первых признаков заболевания. Эрозия и язвенные поражения в ротовой полости. Около 10% заболевших телят имели помутнение роговицы глаз. Заболеваемость - 80%, летальность - 8%.