Витамины

ГОУ ВПО «САРАТОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ  МЕДИЦИНСКИЙ

УНИВЕРСИТЕТ ИМ.В.И.РАЗУМОВСКОГО»  ГОСЗДРАВА

 

 

                                     Кафедра общей биологии, фармакогнозии и ботаники.

                                   Зав. каф.  Дурнова Наталья Анатольевна.

 

 

КОНТРОЛЬНАЯ РАБОТА ПО ФАРМАКОГНОЗИИ

«Витамины»

ВАРИАНТ  № 2

 

 

                                                                                                          ВЫПОЛНИЛА:

                                                                             Студентка 3 курса з/о отделения

                                                                             Фармацевтического факультета

                                            Группа №6

                                                                       Куделина Юлия Павловна.

                                                 Шифр 100295

 

 

 

САРАТОВ 2013

I.Дайте письменные ответы на следующие вопросы и выполните предлагаемые задания:  
 
1. Дайте определение понятию «Лекарственное растительное сырье “ТРАВА”». Приведите пример.

Трава – Herba.

Травами называют лекарственное  растительное сырье, представляющее собой  высушенные или свежие надземные  части травянистых растений. Травы собирают в фазу цветения (май-август). Срезают надземные части ножами, серпами, косят косами. Недопустимо выдергивать растения с корнями (исключение: сушеница топяная). Длина травы в соответствии с НД должна быть 15-40 см. Прикорневые части растения не заготавливают. Иногда нормируется и толщина стебля (например, у пустырника – 5 мм). На каждом 1 м² оставляют 2-3 растения.

Примером трав являются: трава наперстянки (Herba Digitalis), трава пустырника (Herba Leonuri), трава зверобоя (Herba Hyperici), трава чистотела ( Herba Chelidonii), трава полыни ( Herba Absinthii) и др.

 

2. Дайте определение понятию «Лекарственное растительное сырье “КОРНЕВИЩА”». Приведите пример.

Корневища - Rhizomata. 

Используют высушенные, реже свежие подземные органы многолетних (как правило) растений. Заготавливают корневища в период осеннего увядания или ранней весной до начала вегетации. Сбор проводят выкапыванием из земли лопатами, мотыгами, вилами. После выкапывания подземные части отрезают от надземных, отделяют их от почвы и от отмерших частей, промыва ют в проточной холодной воде. Сырье, содержащее слизи и сапонины промывают очень быстро, так как действующие вещества растворяются. Корневище аира в свежем виде очищают от пробки. После сбора в почву подсеивают семена и заравнивают участки сбора. На 1 м² собирают не более 50% растений, а повторные заготовки ведут через 3-5 лет.

Примером корневищ являются: корневище бадана (Rhizoma Bergeniае), корневища лапчатки (Rhizomata Tormentillae), корневище змеевика (раковые шейки) (Rhizoma Bistortae), корневище аира (Rhizoma Calami).

3. дайте определение понятию «ДОБРОКАЧЕСТВЕННОСТЬ лекарственного растительного сырья».

Доброкачественность — соответствие лекарственного сырья  требованиям нормативных документов (определяется на основе данных товароведческого и фитохимического анализов, определения содержания БАВ и если необходимо, путём установления биологической активности сырья).

Доброкачественность включает в себя определение:

А) зараженности амбарными  вредителями;

Б) содержание золы и влаги;

В) содержание действующих  веществ.

 

 

4. Опишите методику проведения макроскопического анализа ЛРС «КОРНИ» и укажите признаки, имеющие диагностическое значение.

Radices - корни (ГФ XI, вып.1, с.263). Корни как лекарственное сырье представляют собой высушенные, реже свежие, подземные органы многолетних травянистых растений, очищенные или отмытые от земли, освобожденные от отмерших частей, остатков стеблей и листьев. Крупные подземные органы перед сушкой разрезают на части (продольно или поперек). Корни осматривают без предварительной обработки. Макроскопический анализ подземных органов предусматривает изучение формы, определение размеров, определение цвета с поверхности и на изломе, определение запаха (при разламывании) и вкуса. Для неочищенных объектов важное диагностическое значение имеет характер поверхности, которая может быть ровной или морщинистой (с продольным или поперечным рисунком складок), с рубцами от прикорневых листьев или буграми и точками — следы отмерших стеблей и корней.

Внешние признаки. У подземных органов определяют форму, особенности наружной поверхности и излома, размер, цвет с поверхности и на свежем изломе, запах и вкус.

Корни цилиндрические, реже конические, простые или разветвленные. Длину, диаметр, толщину определяют с помощью измерительной линейки или миллиметровой бумаги. Диаметр и толщину измеряют в наиболее широком месте. Поверхность неочищенных подземных органов может быть ровной или (чаще) морщинистой. Для корней обычно характерна продольно - морщинистая поверхность.

Цвет сырья определяют при дневном освещении, запах - при  разламывании или растирании, вкус - пробуя кусочек сухого сырья или  его отвар (только у неядовитых объектов).

Корни могут иметь первичное и вторичное строение. При первичном строении в центре виден центральный осевой цилиндр, при вторичном строении в центре находится древесина.

Характер излома корней и  корневищ (ровный, зернистый, волокнистый, занозистый, коротко щетинистый и т. п.) определяется структурой тканей, в первую очередь наличием и характером механических элементов (каменистых клеток, лубяных или древесных волокон). Подземные органы при макроскопическом анализе часто исследуют на поперечном разрезе, где обращают внимание на расположение проводящих элементов (невооруженным глазом или с помощью лупы, стереомикроскопа).  Качественные реакции проводят с 10% водным отваром, нередко используют свежий соскоб корней, корневищ или даже отдельные кусочки сырья (схема 1).

 

 

Схема 1 . Анализ сырья «Radices – корни» по внешним признакам

Форма

↓

Размер

↓

Характер поверхности

↓

Цвет снаружи

↓

Цвет на свежем изломе

↓

Характер излома

↓

Запах при соскабливании

↓

Вкус

 

 

 

 

 5. Опишите методику проведения микроскопического анализа лекарственного растительного сырья «КОРА»:

- подготовку сырья  к анализу;

- признаки, имеющие  диагностическое значение;

- зарисуйте схему  расположения тканей, обозначьте  их.

 

Проведение  микроскопического  анализа   ЛРС  «Кора».

            Cortex – кора.

Цельное сырье. Готовят поперечные или продольные срезы коры. Кусочки коры размером 2-3 Х 0,5-1 см кипятят в колбе или пробирке с водой в течение 5 мин. Размягченные куски выравнивают скальпелем так, чтобы они  имели  строго поперечное или продольное сечение. Делают срезы  и  готовят микропрепараты в растворе хлоралгидрата или глицерина. При необходимости готовят препараты в соответствующих реактивах для выявления различных структур или веществ.

При определении  обращают внимание на наружную кору, располагающуюся  к периферии от окончания сердцевинных лучей и состоящую из первичной  коры (если сохранилась) и перидермы, и на внутреннюю (флоэму), расположенную  от камбия до окончания сердцевинных лучей. Также обращают внимание на толщину, окраску и характер пробки, наличие  колленхимы, соотношение толщины  первичной и вторичной коры, ширину сердцевинных лучей. 

Диагностическими   признаками  коры являются механические элементы - лубяные волокна (стереиды) и каменистые клетки (склереиды), их количество, расположение и строение. Располагаются механические элементы одиночно или группами, рассеянно или поясами. Стенки лубяных волокон или каменистых клеток обычно сильно утолщены и лигнифицированы.

Диагностическое значение имеют также включения оксалата кальция, млечники, клетки с эфирным маслом. Кристаллы оксалата кальция имеют разную форму (друзы и одиночные кристаллы). Одиночные кристаллы часто встречаются в отдельных клетках паренхимы или в клетках паренхимы, окружающих лубяные волокна, образуя кристаллоносную обкладку.

Крахмальные зерна, встречающиеся  в коре, мелкие и диагностического значения не имеют.

Одревесневшие (лигнифицированные) элементы. К срезу на предметном стекле прибавляют несколько капель раствора флороглюцина и 1 каплю 25% раствора серной кислоты. Через минуту жидкость отсасывают полоской фильтровальной бумаги, срез заключают в раствор хлоралгидрата или глицерина и закрывают покровным стеклом (рассматривают без подогревания); одревесневшие механические элементы окрашиваются в малиново - красный цвет.

Для окраски одревесневших  элементов можно использовать также  раствор сафранина. Срезы помещают в 1% раствор сафранина в 50% спирте на 30 мин (в закрытом бюксе или  на часовом стекле), промывают сначала 50% спиртом, затем подкисленным спиртом (на 100 мл спирта прибавляют 2 капли концентрированной  хлористоводородной кислоты) и заключают  на предметном стекле в глицерин. Одревесневшие  оболочки окрашиваются в красный  цвет.

Крахмал. Для обнаружения крахмала делают соскоб с сухой коры и рассматривают его в растворе Люголя. Крахмальные зерна окрашиваются в синий цвет.

Дубильные вещества. Наличие дубильных веществ устанавливают, нанося 1 каплю раствора железоаммониевых квасцов или хлорида окисного железа на внутреннюю поверхность сухой коры; появляется черно - синее или черно - зеленое окрашивание.

Производные антрацена. Наличие производных антрацена определяют, нанося 1-2 капли раствора едкого натра на внутреннюю поверхность коры (кроваво - красное окрашивание), или проводят микросублимацию описанным ниже способом.

Резаное сырье. Соскоб коры или мелкие кусочки кипятят в течение 3-5 мин в 5% растворе едкого натра, промывают водой и готовят микропрепараты, раздавливая объект скальпелем в растворе глицерина или хлоралгидрата.

Одревесневшие элементы определяют по реакции, описанной для  цельного сырья.

Наличие крахмала, дубильных веществ, производных  антрацена определяют в соскобе  сухой коры.

Порошок. Готовят несколько микропрепаратов для выявления  диагностических  элементов коры (в растворе хлоралгидрата) и содержащихся в ней веществ.

Важнейшими  диагностическими  признаками в порошках коры являются: механические элементы (лубяные волокна, каменистые клетки), их расположение (одиночно или группами), включения оксалата кальция, млечники, вместилища.

Обращают внимание также на пласты клеток пробки, состоящие  из многоугольных клеток (вид с  поверхности). В клетках паренхимы  обычно содержатся крахмальные зерна, кристаллы оксалата кальция, иногда эфирное масло.

Одревесневшие (лигнифицированные) элементы. На предметное стекло помещают около 0,1 г порошка, прибавляют 1-2 капли  раствора флороглюцина, 1 каплю 25% раствора серной кислоты и закрывают покровным  стеклом. Затем с одной стороны  наносят 1-2 капли раствора хлоралгидрата, а с противоположной - отсасывают жидкость фильтровальной бумагой. Одревесневшие  механические элементы окрашиваются в  малиново - красный цвет.

Производные антрацена (реакция  микросублимации). На предметное стекло ставят трубку диаметром 1,5 см  и  высотой 2 см. Внутрь стеклянной трубки помещают небольшое количество испытуемого порошка (или соскоба), сверху накрывают другим предметным стеклом, ставят на асбестовую сетку, закрепленную в штативе,  и  подогревают. Пламя горелки следует держать от предметного стекла на расстоянии 5-7 см. На поверхность стекла, которое служит для улавливания сублимата, помещают кусочки фильтровальной бумаги  и  смачивают время от времени холодной водой. Через некоторое время на нижней стороне стекла появляется налет. Под микроскопом в сублимате видны тонкие желтые иголочки, которые в ультрафиолетовом свете (люминесцентный микроскоп)  имеют  яркое желтое или оранжево - красное свечение. В 5% спиртовом растворе едкого кали сублимат растворяется с красным окрашиванием.

 

 

 

 

 

 

 

Рисунок 1 . Расположение тканей коры.

Поперечный срез:

А – первичная кора; Б – вторичная кора; В – древесина; Г – сердцевина:

 1 – перидерма;

2 – колленхима;

 3 – хлоренхима;

4 – крахмалоносное влагалище;

 5 – первичная флоэма;

 6, 7 – вторичная флоэма (6 – мягкий луб, 7 – твердый луб);

 8 – камбий;

 9 – сердцевинный луч ;

 10–12 – годовой прирост древесины (10 – осенняя, 11 – летняя, 12 – весенняя);

 13 – первичная ксилема;

 14 – перимедуллярная зона;

15 –паренхима сердцевины;

 16 – остатки отмершей эпидермы.

6. Зарисуйте анатомическое строение листа (препарат с поверхности), имеющего следующие диагностические признаки:

« …клетки эпидермиса  с извилистыми стенками; устьичный  комплекс аномоцитного типа; волоски  простые многоклеточные очень крупные, состоящие из 7-20 тонкостенных клеток; в мезофилле вдоль жилок –  членистые млечники с зернистым  содержимым».

 

Данные диагностические  признаки относятся к листьям  чистотела. В фармации используется трава чистотела - Herba Chelidonii.

 

Рисунок 2. Микроскопия листа  чистотела.

 

 

1 — верхняя эпидерма;

2 — нижняя эпидерма  с более извилистыми стенками  клеток ;

3— устьица только на  нижней стороне листа с 4—7  околоустьичными клетками (аномоцитный  тип);

4— простые волоски  с тонкими стенками, состоящие из 7—20 клеток, иногда перекрученные или с отдельными спавшимися члениками (на нижней стороне листа по жилкам);

5— гидатода на верхушке  городчатых зубцов в месте  схождения жилок; 

6 — сосочковидная эпидерма  с 2—5 крупными водяными устьицами; 

7—клетки губчатой паренхимы с крупными межклетниками (аэренхима);

8— жилки сопровождаются  млечниками с зернистым содержимым, темнеющим после кипячения листа в щелочи

 

7. Числовой показатель  – влажность ЛРС:

- определение  понятия;

- методика определения  этого показателя ( по ГФ XI );

- факторы, влияющие  на величину этого показателя;

- критерии числового  показателя ( “не более” или “не менее”, средние значения);

- влияние на  качество ЛРС повышенной или  пониженной влажности.

 

 
 
Влажность - один из важнейших показателей доброкачественности ЛРС, влияющий как на состояние сырья, так и на содержание действующих веществ. 
 
Под влажностью понимают потерю в массе за счет гигроскопической влаги и летучих веществ, которую определяют в сырье при высушивании до постоянной массы.  
 
Летучие вещества представлены преимущественно компонентами эфирных масел, а также некоторыми другими соединениями, которые при температуре определения (100-105°С) переходят в газообразное состояние и улетучиваются из ЛРС.

Известны различные способы  определения влажности.

 В частности, иногда  в сырье определение влажности  осуществляется методом отгонки. 

Для этого разработаны  специальные приборы (например, прибор Дина и Старка). Существуют химические методы, из которых наиболее известен метод Карла Фишера (Британская фармакопея).

Кроме того, разработаны  спектроскопические и электрометрические методы и соответствующие при¬боры, которые позволяют определять влажность  с минимальными затратами времени.

В ГФ XI (т. 1, с. 285) для определения  влажности в лекарственном растительном сырье принят метод высушивания  до постоянной массы при температуре 100—105 "С.

 
Методика  определения влажности ЛРС изложена в ГФ XI (вып. 1).  
 
Для установления влажности аналитическую пробу ЛРС измельчают до размера частиц 10 мм, перемешивают и берут две навески массой 3 - 5 г, взвешенные с погрешностью ± 0,01 г. 
Каждую из навесок ЛРС помещают в стеклянные (алюминиевые) бюксы, предварительно высушенные и взвешенные. 
Бюксы с навеской ЛРС взвешивают и помещают (с открытой крышкой) в сушильный шкаф, предварительно нагретый до температуры 100-105°С.  
Время высушивания отсчитывают с момента, когда температура в сушильном шкафу снова достигнет 100 – 105 ⁰С.  
После высушивания бюксы с ЛРС вынимают из сушильного шкафа, закрывают крышкой и помещают в эксикатор, где выдерживают в течение 30 мин. Обычно этого времени бывает достаточно, чтобы бюксы и их содержимое остыли до комнатной температуры.  
Указанные операции повторяют до тех пор, пока масса сырья не станет постоянной.

 Масса считается постоянной, если разница между двумя последующими  взвешиваниями после 30 мин. высушивания и 30 мин. охлаждения не превышает 0,01 г.

Время первого высушивания  зависит от морфологической группы сырья. Так, для листьев, трав и цветков первое взвешивание проводят через 2 часа, а плодов, семян, коры, корней, корневищ и т.п. - через 3 часа. 
 
В зависимости от точности определения выделяют влажность «товароведческую» и «аналитическую». 
 
«Товароведческую» влажность используют для установления доброкачественности ЛРС и соответствия его требованиям НД по рассматриваемому показателю (раздел «Числовые показатели» частной ФС на данный вид ЛРС). 
Для определения «товароведческой» влажности берут навеску ЛРС массой 3—5 г, взвешивание проводят с точностью ±0,01 г. 
 
«Аналитическую» влажность используют при пересчете содержания действующих веществ и золы на абсолютно сухое сырье. 
Для определения «Аналитической» влажности берут навеску ЛРС массой 1-2 г (точная навеска), взвешивание проводят с точностью ±0,0001 г. 
 
Влажность ЛРС (X) в процентах рассчитывают по формуле: 
 

(m – m₁) . 100

х=        m

 

  
где m - масса сырья до высушивания, г; 
m₁ - масса сырья после высушивания, г. 
 
Окончательный результат рассчитывают как среднее арифметическое двух параллельных определений, вычисленных с точностью до 0,1%.  
Между результатами двух параллельных определений допускается расхождение не более 0,5%.

Воздушно-сухое сырьё  содержит обычно 10-14 % гигроскопической воды.

Основными факторами, воздействующими  на ЛРС при хранении, являются внешние: гигиенические (влажность, температура, свет) и природно-климатические (время  года, зональность); внутренние: физико-химические и биологические процессы, протекающие  в ЛРС. Учитывая то обстоятельство, что эфирное масло является летучей  субстанцией, значительное влияние на качество эфиромасличного сырья при хранении оказывает температурный фактор. Разумеется, и другие факторы немаловажны, поскольку эфирные масла представлены компонентами (терпеноиды, ароматические соединения и др.), которые в силу особенностей химического строения под воздействием неблагоприятных факторов (прямые солнечные лучи, повышенная температура, повышенная влажность) могут окисляться, разрушаться или трансформироваться в неактивные соединения. Поэтому жестко регламентируется и показатель влажности ЛРС (не более определенного процента), и показатель влажности воздуха помещения. Повышенное содержание влаги в сырье приводит к его порче: изменяется окраска сырья, появляется затхлый запах, плесень, разрушаются действующие вещества. Такое сырьё нельзя использовать. Поэтому НД для каждого вида сырья устанавливает норму содержания влаги (влажность) не выше определённого значения.

Для большинства видов  лекарственного  растительного сырья допустимый предел влажности обычно 12-15 %.

 

II. Решите ситуационную задачу.

В лабораторию  «Росфарм» поступил образец ЛРС  под наименованием «плоды рябины»  для проведения анализа его доброкачественности.

Опишите результаты анализа, руководствуясь следующим  планом:

1. Запишите латинские и русские названия сырья производящих растений и семейства.
2. Отметьте характерные особенности внешнего вида сырья (в виде схемы).
3. Укажите диагностические признаки микроскопии, присущие представителям морфологической группы сырья.
4. Перечислите «числовые показатели», регламентирующие качество сырья (укажите предел нормирования).
5. Укажите химический состав сырья и изложите возможный вариант методики качественного обнаружения БАВ в сырье. Приведите схему методики.
6. Какие методы предложены для стандартизации сырья по действующим веществам?
7. Укажите пути использования сырья, лекарственные средства и их применение.

Решение:

1.Плоды  Рябины - Fructus Sorbi 
 
Рябина обыкновенная - Sorbus aucuparia L. 
 
Сем. розоцветные - Rosaceae 
 
Другие названия: рябика, яробина

2. Внешние признаки. 
Строение : плоды яблокообразные, без плодоножек, 2-5-гнездные.

Форма:  округлые или овально-округлые

Размер (длина, толщина): в поперечнике до 9 мм

Характер поверхности  кожуры: плоды блестящие, сильно морщинистые.

Форма и особенности строения  околоплодника: на верхушке с остающейся чашечкой из пяти малозаметных смыкающихся зубчиков.

Количество косточек или  семян,  их форма и строение, структура  поверхности: в мякоти плода находятся от 2 до 7 слегка серповидно-изогнутых, продолговатых, с острыми концами, гладких красновато-бурых семян.. На поперечном разрезе плода (лупа 10×) видно 2-5 семенных гнезд. Стенки гнезд хрящеватые, твердые, сросшиеся с мякотью. Внутри каждого гнезда находятся 1-2 семени с красновато-бурой, твердой семенной кожурой и белым семенным ядром.

Мякоть плода рыхлая, мясистая, сверху покрыта кожицей.

Цвет  плодов красновато- или желтовато-оранжевый, буровато-красный.

Запах слабый, своеобразный.

Вкус кисловато-горький

 
3.Микроскопия.

Клетки эпидермиса окончатого типа, разновеликие, наружная стенка сильно утолщена. Кутикула гладкая, тонкая. Эпидермис  подстилается 2-4-рядной колленхимой, вместе они образуют экзокарпий. В эпидермальных  и колленхимных клетках имеются  капли жирного масла желтого  цвета. Клетки мезокарпия разной формы  и величины, тонкостенные, с многочисленными  оранжево-желтыми хромопластами, содержащими  кристаллы каротина разной формы  – треугольные, раздвоенные и  т.п., размером 4,8-12,8 мкм. В мезокарпии проходят проводящие пучки, ксилема  которых состоит из узких спиральных сосудов. Близ эндокарпия находятся каменистые клетки. В мезокарпии встречаются друзы и призматические кристаллы. 

 

4. Числовые показатели.

Цельное сырье. Содержание органических кислот в пересчете на кислоту  яблочную, определяемое титриметрическим методом, не менее 3,2 %; влажность не более 18 %; золы общей не более 5 %; почерневших  и пригоревших плодов не более 3 %; недозрелых плодов (светло-желтых, желтых) не более 2 %; других частей растения (плодоножек, веточек, листьев) не более 0,5 %; плодов с плодоножками не более 3 %; органической примеси не более 0,5 %; минеральной  примеси не более 0,2 %.

 
5.Химический состав. Качественный анализ БАВ.

Плоды рябины содержат каротиноиды (до 20 мг%), кислоту аскорбиновую (до 200 мг%), витамины Р, В₂, Е, сахар – сорбозу, спирт – сорбит, кислоту сорбиновую, флавоноиды, антоцианы, лейкоантоцианидины, тритерпеновые соединения (кислоту урсоловую), органические кислоты (3,9 %), до 2 % пектиновых веществ, небольшое количество эфирного масла. Семена содержат жирное масло, гликозид амигдалин, фосфолипиды. 

Экстракция аскорбиновой кислоты и лекарственного растительного сырья.

 Методика:

1. Отвешивают 5 г растительного сырья (плоды рябины), измельчают в фарфоровой ступке и добавляют 50 мл дистиллированной воды.

2. Полученную смесь настаивают 10 минут, затем фильтруют или центрифугируют.

 
Качественное и количественное определение  содержания аскорбиновой кислоты в  лекарственном растительном сырье  связано с использованием натрия 2,6-дихлорфенолиндофенолята.

Для качественного определения  часть водного экстракта хроматографируют на пластинках «Силуфол» или «Сорбфил», высушивают и обрабатывают указанным  реактивом (нанеся одновременно раствор  свидетеля – чистой кислоты аскорбиновой) – пятна кислоты аскорбиновой выглядят бесцветными на синем фоне. 

Также   качественное определение аскорбиновой кислоты основано на ее высокой восстановительной способности:

1. Реакция с калия перманганатом

К 1 мл реактива раствора перманганата калия по каплям добавляют извлечение из сырья, содержащее аскорбиновую кислоту. Наблюдают обесцвечивание раствора перманганата калия вследствие восстановления марганца до Mn 2+

 

2. Реакция с раствором  йода

К 1 мл реактива раствора йода по каплям добавляют извлечение из сырья, содержащее аскорбиновую кислоту. Наблюдают обесцвечивание раствора.

 

3. Реакция с солью железа (II)

К 1 мл извлечения добавляют 1 мл раствора гидрокарбоната натрия и 1 мл сульфата железа (II). Наблюдают образование аскорбината железа фиолетового цвета.

 

4. Реакция с раствором  нитрата серебра. При этом происходит восстановление серебра, а аскорбиновая кислота окисляется в кетоформу. К извлечению прибавляют 1 мл раствора нитрата серебра, при этом выпадает осадок металлического серебра.

 
Для качественного обнаружения каротиноидов можно использовать химические реакции и хроматографию на силикагеле. Каротиноиды извлекают из сырья хлороформом и к хлороформному извлечению прибавляют кислоту серную концентрированную (синее окрашивание, переходящее в слой кислоты серной) или кислоту азотную концентрированную (синее окрашивание, переходящее в зеленое и грязно-желтое). Хроматограммы проявляют 10 % этанольным раствором кислоты фосфорномолибденовой, нагревают в сушильном шкафу при температуре 60-80 ºС несколько минут. На желто-зеленом фоне появляются синие пятна каротиноидов.

 
Витамин Р (рутин) относится к флавоноидам.

Для выделения флавоноидов проводят экстракцию растительного материала этанолом или метанолом, учитывая растворимость агликонов и гликозидов флавоноидов в спирте. Так, для выделения рутина экстракцию проводят горячей водой. При охлаждении водных извлечений рутин выпадает в осадок, его отфильтровывают и очищают перекристаллизацией из спирта. Специфических реакций для всех групп флавоноидов не существует.

 
 
Часто используют следующие реакции: 
 
1, Характерной реакцией на флавоноиды - Цианидиновая проба или проба Синода (проба Chinoda)(основана на восстановление их атомарным водородом в кислой среде в присутствии магния или цинка): 
флавоноиды при восстановлении магнием или цинком в присутствии концентрированной хлористоводородной кислоты образуют красное окрашивание, обусловливаемое образованием антоцианидинов.

2.С раствором аммиака, щелочи флавоны, флаваноны, флавонолы, флаванонолы дают желтое окрашивание, при нагревании переходящее в оранжевое или красное.

3. Флаваноны и флаванонолы восстанавливаются натрия боргидридом с образованием окрашенных продуктов пурпурно-красного, фиолетового или синего цвета.

 

Витамин В2 (Рибофлавин. Лактофлавин)

Качественные реакции:

1. 0,001%-ный раствор (1 мг: 100) рибофлавина -- бледного зеленовато-желтого  цвета в проходящем свете с  интенсивной желтовато-зеленой флуоресценцией, исчезающей от прибавления минеральных  кислот или щелочей.

2. При восстановлении  цинком в уксуснокислом или  солянокислом растворе рибофлавин  переходит в лейкофлавин, присоединяя  2 атома водорода.

 

Витамин Е (б-токоферол)

Качественные реакции.

При действии азотной кислоты  токоферол образует соединение, окрашенное в яркий красный цвет (реакция  характерна).

 

 

6. Методы стандартизации по действующим  веществам. Количественное определение  действующих веществ.  
 
1. Содержание аскорбиновой кислоты можно определить титрометрическим методом, по методике, описанной в ГФ XI для ФС «Плоды шиповника»:

для количественного определения кислоты аскорбиновой в плодах рябины, также как и у плодов шиповника, можно  навеску сырья экстрагировать горячей водой и аликвоту экстракта оттитровать раствором реактива, который имеет синий цвет. Кислота аскорбиновая способна окисляться до дегидроформы раствором натрия 2,6-дихлорфенолиндофенолята и восстанавливать последний до лейкоформы (стадия 1). Точка эквивалентности устанавливается появлением розового окрашивания, не исчезающего в течение 30-60 сек, которое свидетельствует об отсутствии восстановителя, т.е. кислоты аскорбиновой (2,6-дихлорфенолиндофенол имеет в щелочной среде синее окрашивание, в кислой – красное, а при восстановлении обесцвечивается) .

 

2. Содержание суммы свободных органических кислот в пересчете на яблочную можно определить титрованием раствором натрия гидроксида в присутствии фенолфталеина :

Аналитическую пробу сырья  измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. 25 г измельченных плодов рябины помещают в колбу вместимостью 250 мл, заливают 200 мл воды и выдерживают  в течение 2 ч на кипящей водяной  бане, затем охлаждают, количественно  переносят в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводят объем извлечения водой  до метки и перемешивают. Отбирают 10 мл извлечения, помещают в колбу  вместимостью 500 мл, прибавляют 200-300 мл свежепрокипяченной воды, 1 мл 1% спиртового раствора фенолфталеина, 2 мл 0,1% раствора метиленового синего и титруют раствором  натра едкого (0,1 моль/л) до появления  в пене лилово-красной окраски.