Бактериологическое исследование молока

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Оглавление

 

 

 

Введение ………………………………………………………………………..3

 

1. Бактериологическое исследование молока ………………………………..6

 

1.1.Проведение  исследований ………………………………………………...6

 

        1.2.Рецепты питательных сред ………………………………………………12

 

        1.3.Определение лизоцимов молока по В.И.Мутовину …………………..15

 

   1.4.Лечение животных, больных маститом ………………………………..26

 

 

Заключение ………………………………………………………………………..30

 

Список использованной литературы ………………………………………….32

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Введение

 

Бактериологическое исследование — исследование, предназначенное  для выделения бактерий и изучения их свойств с целью постановки микробиологического диагноза. 
Исследуемый материал следует брать  в  асептических  условиях в стерильную посуду и доставлять в лабораторию возможно скорее. В случае необходимости пробы следует хранить на холоде. Методика взятия проб зависит от объекта, характера заболевания и свойств микроорганизма. Одним из распространенных приемов бактериологического исследования является бактериоскопия.

Для изучения нефиксированных  бактерий пользуются двумя методами: раздавленной (между предметным и  покровным стеклами) капли и висячей  капли. Следует помнить, что препараты  нефиксированных бактерий заразны. 
Для бактериоскопии фиксированных препаратов используют мазки. Для их приготовления каплю исследуемой жидкости распределяют по поверхности предметного стекла, а затем высушивают. Наиболее распространенным методом фиксации препарата является пронесение его через пламя газовой горелки. В некоторых случаях используют фиксирующие составы. Фиксированные препараты, как правило, окрашивают. К числу важнейших элементов бактериологического исследования относятся посевы и пересевы бактериальных культур, производимые бактериальной петлей или пастеровской пипеткой. Петлю стерилизуют прокаливанием в пламени, затем ее остужают прикосновением к участку незасеянного агара или ополаскивая в стерильной жидкости. При использовании пастеровской пипетки ее кончик обламывают пинцетом, несколько раз проносят пипетку через пламя горелки и дают остыть. При посевах используют жидкие и твердые питательные среды. При посеве на скошенный агар культуру бактерий растирают петлей по поверхности агара. При посеве в толщу агарового или желатинового столбика питательную среду прокалывают до дна пробирки петлей или особой иглой. При посеве в жидкую среду надо следить, чтобы жидкость не выливалась и не смачивала края пробирок и пробки. Посевы и пересевы следует проводить вблизи пламени газовой горелки, пробирки не должны долго оставаться открытыми, петля или пастеровская пипетка с культурой не должна ни к чему прикасаться; перед тем как закрывать пробирку, края ее следует прожечь. Засеянные пробирки необходимо тотчас же надписать. 
Важнейшим этапом бактериологического исследования является идентификация — определение видовой или типовой принадлежности бактерий, полученных в виде чистой культуры. При идентификации бактерий производится изучение их физиологических и биохимических свойств, токсинообразования. Широко используют серологические методы идентификации   бактерий   (реакции агглютинации и преципитации). Во многих случаях эффективным оказывается биологический метод идентификации микроорганизмов, основанный на заражении лабораторных животных исследуемым материалом или полученной культурой бактерий и выявлении у животных характерных патологических изменений.

Для выделения чистых культур  используют механические и биологические  методы. Пример механического метода: каплю исследуемого материала растирают  одним и тем же стерильным шпателем или бактериальной петлей по поверхности  плотной питательной среды, последовательно  в первой, второй и третьей чашках Петри. Выделение чистой культуры производится из выросших отдельных колоний и  заключается в их исследовании и  отсеве на свежую питательную среду. Биологические методы выделения  чистых культур основаны на учете  того или иного свойства выделяемого  микроба, отличающего его от других микробов, находящихся в исследуемом  материале. 
При биологическом методе используют такого рода питательные среды, в которых созданы условия, благоприятные для развития определенного вида микробов. К числу биологических методов относится также заражение лабораторных животных, чувствительных к выделяемому виду бактерий.

Выращивание бактерий производят в термостатах, в которых поддерживается постоянная температура, обычно 37°. В  большинстве случаев выращивание  продолжают около суток, но в зависимости  от вида бактерий бывают необходимы и другие сроки выращивания. Разные виды бактерий нуждаются при выращивании в разных количествах кислорода. Для поддержания необходимой концентрации кислорода в среде пользуются разнообразными методами аэрации. См. также Питательные среды.

Бактериологическое исследование — комплекс методов для выявления патогенных микроорганизмов у больного, у носителя или на объектах внешней среды. Бактериологические исследования пользуются также для обнаружения условно патогенных и санитарно-показательных микробов, характеризующих степень загрязнения внешней среды, для изучения микробного пейзажа определенной среды (объекта). Бактериологическое исследование может быть использовано для диагностики, профилактики инфекционных заболеваний, для сан.-гиг. характеристики среды, окружающей человека, для научного исследования.

Материал и метод бактериологического исследования зависят от цели анализа, условий среды, патогенеза и течения заболевания. При наличии бактериемии микроб обнаруживают при помощи посева крови. В случаях выраженных местных поражений возбудителя следует искать в отделяемом или выделениях пораженного органа (дифтерия, дизентерия, гонорея и др.). Наконец, при заболеваниях со сложным течением, когда (как, например, при брюшном тифе) бактериемия сменяется поражениями тонких кишок, на каждом этапе применяют соответствующий метод исследования: в течение первой недели заболевания производят посев крови, на второй наиболее достоверно серологическое исследование, начиная с третьей недели положительный результат получают при посеве испражнений; последним методом пользуются и в качестве контрольного исследования для обнаружения бактерионосителей среди реконвалесцентов и для наблюдения за ними.

Выполнение любой из указанных  задач осуществляют применением  методов, предназначенных для выделения  и определения микроорганизмов. В зависимости от 
характеристики микроба используют весь комплекс методов или его части. 
Бактериоскопия — наиболее доступный прием, основанный на микроскопическом изучении материала. При микроскопии свежих препаратов можно пользоваться некоторыми микрохимическими реакциями (например, окраска йодофильных бактерий раствором Люголя) или избирательной окраской разных структурных частей бактерий. 
Более четко бактерии можно выявить в окрашенном препарате. Исследуемый материал наносят на предметное стекло тонким и по возможности ровным слоем. Дают препарату высохнуть на воздухе и фиксируют одним из общепринятых методов, но чаще всего фламбированием, т. е. двух-, трехкратным быстрым проведением препарата над пламенем горелки так, чтобы стекло было теплое, но не горячее. Препарат, остуженный после фиксации, окрашивают простой или дифференциальной окраской (см. Окраска микроорганизмов). При флюоресцентной микроскопии используют как нативные, так и сухие препараты. В этом случае обработка определенными красителями вызывает свечение структур микробного тела или всего микроба в ультрафиолетовых или коротких синих лучах. В другой модификации микробов обрабатывают специфическими сыворотками, меченными флюоресцентами (красителями). Бактерии, соответствующие сыворотке, будут светиться, так как на них осядет меченая сыворотка. Гетерологичные бактерии не будут светиться.

Методом бактериоскопии широко пользуются для бактериологической диагностики некоторых инфекционных заболеваний (гонорея, туберкулез, возвратный тиф), а также при изучении всего  комплекса микрофлоры органа (миндалины, влагалище), продукта или другого  объекта.

Метод посева, т. е. выделение чистой культуры искомого микроорганизма, является более точным и надежным способом бактериологической диагностики, чем бактериоскопия. Свежий материал размазывают по поверхности плотной питательной среды, налитой в чашки Петри. Первичный посев производят на обычные среды, благоприятные для данного микроба, на дифференциальные или на селективные среды. Выбор питательной среды (см.), как и метода предварительной обработки свежего материала для посева, зависит от степени его загрязнения сопутствующей посторонней микрофлорой. Через 24—48 час. содержания в термостате при оптимальной        для данного микроба температуре чашки рассматривают и подозрительные колонии пересевают на среды, способствующие размножению данного возбудителя. Таким образом получают культуру однородных бактерий, которые и должны быть идентифицированы.

Идентификация микроба начинается с изучения его морфологии в окрашенном препарате и в раздавленной капле (см.) для определения формы микробов и их подвижности. Следующим этапом является исследование ферментативной способности бактерий по расщеплению углеводов, аминокислот, мочевины в определенных для каждого вида сочетаниях. У бактерий наиболее изучены сахаро- и протеолитические ферменты.

Идентификация микроба должна быть дополнена изучением других свойств, характерных для каждого  рода и вида микроорганизмов. К таким  свойствам относится способность  выборочно растворять эритроциты разных животных (гемолиз), свертывать плазму крови (плазмокоагуляция), растворять сгусток фибрина (фибринолиз) и пр. Все эти особенности бактерий могут быть использованы при их определении как дифференциальные признаки.

Окончательное определение  микробов некоторых видов, в основном патогенных бактерий семейства кишечных, включает серологическую идентификацию (см. Идентификация микробов). Обычно для этого ставят реакцию агглютинации, т. е. выявляют скучивание бактерий под влиянием одноименной иммунной сыворотки. Агглютинация микробов в сыворотке против определенного вида указывает на принадлежность к этому виду. Обычно реакцию агглютинации ставят ориентировочно на стекле и для окончательного определения в пробирках с разведениями сыворотки. 
Ряд микробов не удается определить до конца описанным путем. Тогда идентификацию необходимо дополнить заражением лабораторных животных, поскольку для некоторых бактерий характерна патогенность или токсигенность, выявляющаяся при заражении животных. В некоторых случаях заражение животных служит также методом накопления патогенных микробов.

Только сопоставление  всех характеристик культуры, собранных  при изучении морфологии, биохимических, серологических, а где нужно и  биологических свойств ее, может  дать основания для идентификации. Ответ при положительном результате исследования не представляет затруднений, если выделенный микроб типичен. В таком случае указывают род, вид и, если определялся, тип бактерии. При выделении микроба, отклоняющегося по каким-то свойствам от типичной характеристики, дается ответ с указанием на отклоняющийся признак. В таком случае полезно повторить исследование, если позволяет течение болезни или условия сбора материала. Полезно также подвергнуть культуру атипичных микробов дополнительному изучению другими, более сложными методами.

Отрицательные результаты бактериологического  исследования имеют относительное  значение и показывают лишь, что  в исследованной порции материала  искомые микробы не содержались  или были нежизнеспособны. Однако они  могут присутствовать в другой порции. По этому, например, при обследовании на бациллоносительство (брюшной тиф, дизентерия, дифтерия) требуется проводить  повторные исследования.

 

1.Бактериологическое исследование молока

 

Бактериологическое исследование молока проводится для определения общей бактериальной загрязненности, выявления микроорганизмов, вызвавших заболевание молочной железы, определения чувствительности их к антимикробным препаратам, оценки результатов лечения больных животных.

 
Правила отбора проб молока (секрета).

 
       Молоко (секрет) для бактериологического исследования отбирают в стерильные пробирки из долей вымени с соблюдением правил асептики. Для этого перед взятием пробы соски вымени и руки исследователя протирают ватным тампоном, смоченным 70° этиловым или денатурированным спиртом, и надаивают в пробирки 5-10 мл альвеолярного молока (в конце дойки). При взятии пробы следят за тем, чтобы сосок не касался края пробирки. При повторном взятии пробы с целью подтверждения диагноза на мастит может быть использовано как цистернальное, так альвеолярное молоко. Пробирку с молоком (секретом) закрывают стерильной ватно-марлевой или резиновой пробкой и на этикетке записывают кличку или инвентарный номер коровы, долю вымени и ее состояние (здоровая, больная).

 
Правила доставки

 
Пробы молока после их отбора с сопроводительным документом доставляют в лабораторию  в течение 3-4 ч с момента взятия в специальных емкостях, обеспечивающих температуру не выше 8-10°С, или в термосах со льдом.

 
 
1.1.Проведение исследований

 
Бактериологическое исследование молока (секрета) проводят сразу после доставки его в лабораторию. Оставшееся молоко хранят при температуре не выше 6°С. 
Посев молока (секрета) проводят на мясо-пептонный агар с цитратной кровью крупного рогатого скота или дефибринированной кровью барана (рецепт 1) и дифференциально-диагностические или элективные среды.

Для идентификации выросших культур микроорганизмов учитывают  характер роста колоний и вид  гемолиза на кровяном МПА, проводят микроскопию  мазков, сделанных из одинаковых по морфологическим свойствам колоний  и окрашенных по Грамму, изучают  культурально-биохимические свойства.

а) Выделение золотистого  стафилококка

Рост на кровяном МПА. Колонии  средние и крупные, выпуклые с  гладкой или шероховатой поверхностью, ровными краями, золотистого цвета. 
Образуют зону гемолиза.

α-гемолиз - зона прозрачная вокруг колонии; β-гемолиз - зона непрозрачная (матовая.), лучше проявляется при выдержке посевов в холодильнике при температуре 5-8°С в течение 24 ч; α и β гемолиз смешанный.

При микроскопии имеют  шарообразную форму и располагаются  в виде гроздевидных скоплений, тетрами или одиночно. По Грамму красятся положительно. 
ДНК-азная активность. Выделение золотистого стафилококка ускоренным методом и определение ДНК-азной активности проводят с использованием элективной, дифференциально-диагностической среды ДНК-новокаинового агара (рецепт 2). 
Элективные свойства среды обусловлены ингибирующим действием на постороннюю микрофлору новокаина, дифференцирующие - наличием ДНК, позволяющей идентифицировать золотистый стафилококк по его дезоксирибонуклеазной активности. 
Готовят разведение исследуемых проб молока, (секрета) на стерильном физиологическом растворе 1:10 и 1:100. В чашку Петри с ДНК-новокаиновым агаром вносят 0,1 мл молока (секрета) в разведении 1:100 и равномерно распределяют стерильным стеклянным шпателем по всей поверхности питательной среды. Засеянные чашки помещают в термостат крышками вниз и инкубируют при 37-38°С в течение 22-24 ч. Для выделения ДНК-азной активности золотистого стафилококка поверхность среды в чашках с выросшими культурами заливают 5-7 мл 1н раствора соляной кислоты. Чашки с кислотой выдерживают 2-3 мин, затем кислоту сливают и учитывают результаты, просматривая чашки в проходящем свете.

При выделении культуры стафилококка на кровяном агаре и наличии изолированной чистой культуры ДНК-азная активность может быть определена путем посева на ДНК-агар (рецепт 3).

На ДНК-новокаиновом агаре золотистый, стафилококк растет в виде крупных круглых колоний с ровными краями, окруженных зоной просветления с четкими границами.

Для определения количества золотистого стафилококка в 1 мл исследуемого молока (секрета) подсчитывают колонии  с зоной просветления по всей поверхности среды и полученное число колоний умножают на 10 (брали 0,1 мл материала) и на 100 (степень разведения).  
Каталазная активность. На предметное стекло наносят каплю 10% перекиси водорода и в ней растирают внесенную бактериологической петлей чистую культуру микроорганизмов. 
При положительной реакции на каталазу происходит интенсивное газообразование которое проявляется вспениванием капли перекиси водорода. Фермент каталазу содержат стафилококки и микрококки.

Реакция плазмокоагуляции (РПК). Культуру стафилококка высевают в пробирки с мясо-пептонным бульоном и через 3 ч после выращивания в термостате при температуре 37°С используют для постановки РПК с цельной или сухой плазмой крови кролика. Для этого плазму разводят стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:5 и разливают в аглютинационные пробирки по 0,5 мл. Бульонную культуру стафилококка по 0,1 мл (2 капли) вносят в пробирки с разведенной кроличьей плазмой. Для контроля в одну пробирку с плазмой не вносят культуру, а в другую засевают заведомо плазмо-аглютинирующий стафилококк. Пробирки помещают в термостат при температуре 37°С и через каждый час в течение 3ч, 18 и 24 ч учитывают результаты.

При положительной реакции  РПК образуется сгусток, который  не выпадает из пробирки при наклоне  или плавает в плазме.

Золотистый стафилококк  является плазмокоагулируюшим.

Ферментация манита в анаэробных условиях. Суточную бульонную культуру стафилококка в количестве 0,2 мл (3-4 капли) высевают в пробирку с 0,15% полужидким агаром, содержащим 0,15% манита и индикатор Андраде, под вазелиновым маслом (рецепт 4). Посевы инкубируют в термостате при температуре 37°С. Результаты учитывают через каждые 24 ч, а окончательный результат - через 5 сут.  
Появление розового окрашивания (изменение цвета индикатора) указывает на ферментацию манита в анаэробных условиях, что является дифференцирующим признаком для золотистого стафилококка.

б) Выделение стрептококков 

 
Рост на 5% кровяном МПА. Колонии мелкие, росинчатые, образуют зону гемолиза α и β, смешанную или она отсутствует. При микроскопии имеют шарообразную, бобовидную форму и располагаются в виде коротких или длинных цепочек. 
Рост на среде Карташовой (рецепт 5). В пробирку со средой вносят 1 мл исследуемого молока или пересевают выросшие на кровяном агаре росинчатые колонии и инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 18-24 ч. 
Из пробирок с измененным цветом среды делают мазки, окрашивают по Грамму и проводят микроскопию на предмет обнаружения стрептококков. 
Каталазная активность. Проводится аналогично как для стафилококков. 
Стрептококки не содержат фермент каталазу, поэтому с перекисью водорода дают каталазоотрицательную реакцию.

 
Устойчивость к желчи.

Предварительно культуру стрептококков выращивают в мясо-пептонном бульоне (МПБ) с I% глюкозы (рецепт 6), а затем вносят 1 мл культуры в пробирки с 5 мл МПБ, содержащего 40% желчи (рецепт 7) и ставят в термостат при температуре 37°С на 24 ч.  
Полное просветление бульона указывает на лизис культуры, помутнение - на рост. 
Рост в МПБ с рН 9,б. 1мл бульонной культуры стрептококков, выращенных на МПБ с глюкозой (рецепт 6), вносят в пробирку с 5 мл МПБ и рН 9,6, инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 24 ч.

 
Обесцвечивание среды указывает  на наличие роста стрептококков, восстанавливающих своими окислительно-восстановительными ферментами метиленовый синий. 
Этим свойствам обладают стрептококки серологических групп D и N. (по Ленсфильд). 
КАМП-тест. Основан на том, что стрептококки групп В при выращивании на кровяном агаре, содержащем стафилококковый β-токсин, образуют дополнительную, ясно выраженную зону гемолиза эритроцитов барана, крупного рогатого скота. 
Суточную бульонную культуру β-гемолитического стафилококка высевают на 5% кровяной агар сплошной линией по диаметру чашки Петри. Перпендикулярно к линии посева стафилококка, не доходя 5-6 мм, высевают ровным штрихом испытуемую культуру стрептококков. На одной чашке можно проверить 8-10 культур. 
КАМП-тест считают положительным, если четко выражена зона гемолиза испытуемого стрептококка в виде усеченного треугольника или полукруга в зоне β-гемолитического стафилококка. Наиболее ярко эта зона проявляется после выдержки чашек в холодильнике в течение 18-84.

 
в) Выделение бактерий группы кишечной палочки (БГКП).

Образцы молока или колоний  с кровяного агара, морфологические свойства которых напоминают БРКП, высевают на среду КОДа (рецепт 9) и помешают в термостат при температуре 35°С на 24 ч.

Изменение цвета среды  из фиолетового в зеленый свидетельствует о наличии ВГКП. 
Идентификацию эшерихий, бактерий рода энтеробактер от сальмонелл и протея проводят на среде Олькеницкого (рецепт 10). Со среды КОДа зеленого цвета посев на среду Олькеницкого в пробирках проводят бактериологической петлей на поверхность скоса среды и внутрь столбика. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 24 ч.

Изменение цвета (глюкоза+, лактоза+) скоса и столбика среды из красного в желтый при отсутствии почернения внутри свидетельствует о росте бактерий группы эшерихий. 
Изменение скоса среды и столбика в малиновый цвет (мочевина+) и почернение внутри столбика (сероводород+) указывает на рост протея.

Изменение скоса в красный, столбика в желтый и почернение внутри столбика указывает на рост сальмонелл.

г) Выделение синегнойной  палочки.

 

Бактерии этой группы при  росте на питательных средах вырабатывают сине-зеленый пигмент - пиоцианин за счет которого происходит окрашивание этих сред. 
Образцы молока или колоний с кровяного агара, при микроскопии которых обнаружены грамотрицательные палочки, высевают на МПА и МПБ, культивируют в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 ч, дополнительно до 72 ч.

Появление сине-зеленого окрашивания  МПБ и МПА, роста гладких плоских  колоний с ровными или изрезанными  краями указывает на рост синегнойной  палочки, вырабатывающей пигмент пиоционин.

Из МПБ и МПА делают мазки, окрашивают по Грамму и просматривают  под микроскопом. При обнаружении в мазках грамотрицательных палочек и изменении цвета сред в сине-зеленый ставят реакцию для обнаружения пиоционина. 

Определение пиоционина. В пробирку с МПБ добавляют 1 мл хлороформа, пробирку встряхивают.  
При положительной реакции хлороформ приобретает зеленый цвет и опускается на дно пробирки. 
У пигментообразующих сапрофитных бактерии в хлороформе пигмент не растворяется.  
 
д) Выделение грибов рода Саndida

 

Пробы молока в количестве по 0,1-0,3 мл высевают на 2 чашки Петри  с элективной дифференциально-диагностической  средой (рецепт 11), равномерно распределяя  материал по поверхности стерильным шпателем. Засеянные чашки помещают в термостат вверх дном при  температуре 37°С на 18-20 ч.

Контролем служит посев культуры этого гриба на ту же самую элективную дифференциально-диагностическую среду. 

После инкубации чашки  Петри просматривают, из подозрительных колоний делают мазки, окрашивают их по Грамму или другими методами, а также делают посев на ту же самую среду для выделения чистой культуры и выявления псевдомицелия. Засеянные пробирки выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 24 ч, затем выдерживают при комнатной температуре 2 суток.

Первичный учет делают через 21-24 ч после инкубации материала, а окончательный - на 4-й день исследования.

Колонии грибов рода Саndida гладкие, морщинистые, плоские, беловато-серые, кремо-беловатые, кремовые, мягкой консистенции, кожистые. 

При микроскопии обнаруживают псевдомицелий, а также почкующиеся клетки (споры, истинный мицелий, -иногда хламидоспоры).

Схема идентификации кокковой микрофлоры молока по В.Д. Парикову, В.И. Сдободянику и др.

 

Пробы молока (секрета) высевают на секторы (4,8) кровяного МПА в  чашках Петри, выдерживают в термостате 24 ч при температуре 37°С, учитывают характер роста и вид гемолиза. Из колоний, характерных для кокковых микроорганизмов, делают посев на секторы (8) кровяного МПА для получения чистых культур. Из других колоний делают мазки, красят их по Грамму и микроскопируют. Чашки Петри с отсеянными микроорганизмами инкубируют в термостате при температуре 37°С 24 ч.  
Выросшие чистые культуры кокковых микроорганизмов проверяют на каталазу с 3% перекисью водорода на предметном стекле, а также готовят мазки, красят по Грамму и микроскопируют. Каталазоположительные микроорганизмы относят к стафилококкам, а каталазоотрицательные - к стрептококкам.

 

Дифференциация стафилококков

 

Учет роста на кровяном МПА, вид гемолиза, микроскопию, постановку ТОК проводят как, как описано раньше. 

Анаэробная ферментация  манита. Среду (рецепт 12) перед применением ставят в водяную баню и кипятят 10-15 мин для удаления растворенного кислорода, охлаждают до 45-50°С и вносят на дно пробирки бактериологической петлей чистую культуру стафилококка. Поверхность среды покрывают стерильным вазелиновым маслом или парафином, слоем 2 см. Пробы культивируют в термостате при температуре 37°С в течение 5 дней.

Отсутствие желтого окрашивания  или пожелтение только поверхности среды свидетельствует об отсутствии анаэробной ферментации манита. 

Анаэробная ферментация  глюкозы. Используют среду, приготовленную по рецепту 12, в котором применяют глюкозу вместо манита, и проводят исследование по аналогичной схеме.

 
б) Дифференциация стрептококков

 

Каталазоотрицательные культуры кокковых микроорганизмов проверяют по КАМП-тесту на среде с эскулином (рецепт 13) по схемам.

Проводят по наличию просветления в зоне β-гемолиза - гемолитического стафилококка и по цвету колоний. Около 5% штаммов Str. agalactiae дают КАМП тест отрицательный и около 30% штаммов Str. uberis дают КАМП тест положительный.

Определение бактериальной  обсемененности молока редуктазным методом. Метод основан на восстановлении метиленового голубого окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности обесцвечивания метиленового голубого оценивают бактериальную обсемененность молока.

1) Приготовление основного  спиртового раствора метиленового  голубого. 
10 г метиленового голубого смешивают со 100 мл 96% раствора этилового спирта, ставят в термостат при температуре 37°С на 24 ч, фильтруют в термостате при той же температуре.

Приготовление рабочего раствора метиленового голубого.

Основной раствор помещают в водяную баню при температуре 45°С на 5-10 мин, перемешивают до полного растворения кристаллов. Затем быстро охлаждают до температуры 20°С и 5 мл этого раствора прибавляют к 195 мл дистиллированной кипяченой воды. Смесь хорошо перемешивают. Хранят рабочий раствор при температуре 8-10°С не более 7 суток. 

В пробирку наливают 1 мл рабочего раствора метиленового голубого и 20 мл исследуемого молока, закрывают стерильной резиновой пробкой и смешивают путем медленного переворачивания пробирки. Пробирку помещают в редуктазник с температурой воды 37°С, или водяную баню, или термостат. Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды 37°С поддерживают в течение всего времени определения. Момент погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа.

Наблюдение за изменением окраски проводят через 20 мин, 2 ч  и 5 ч 30 мин. Окончанием анализа считают  момент обесцвечивания окраски молока. При этом оставшийся кольцеобразный окрашенный сдой вверху и внизу шириной  не более 1 см в расчет не принимается. Появление окрашивания молока в  этих пробирках при встряхивании не учитывают.

В зависимости от продолжительности  обесцвечивания молоко относят к одному из четырех классов по бактериальной обсемененности.

 

Определение ингибирующих веществ  в молоке

 

Ингибирующими веществами, попадающими в молоко, чаще всего  могут быть антимикробные и дезинфицирующие средства. Первые выделяются молочной железой при различных способах применения больным.животным, в том числе и при интрацистернальном введении. Вторые попадают в сборное молоко в результате недостаточного отмывания проточной водой доильного оборудования и молочной посуды. 
а) С индикатором резазурином.