Культивирование вирусов в куриных эмбрионах. Вирус инфекционного гепатита собак

МИНИСТЕРСТВО  СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ   Федеральное государственное обра бюджетное  зовательное учреждение высшего пРофессионального  образования российский государственный  аграрный университет – МСха имени К.А. Тимирязева  (ФГбОУ ВПО ргау - МСХА имени К.А. Тимирязева)

 

 

 

Факультет зооинженерный

 

Кафедра  «Ветеринарии и физиологии животных»

 

 

 

 

 

 

КУРСОВАЯ РАБОТА

      

по  дисциплине

 

«Ветеринарная вирусология»

 

на тему: «Культивирование вирусов в куриных эмбрионах.

Вирус инфекционного  гепатита собак».

 

 

 

 

                                                                         Выполнила студентка

                                                                         32 группы очной формы обучения 

                                                                         Иванова Наталья Алексеевна

                                                                        Руководитель:

                                                                         доцент, к.б.н. Лужская Т.А.

Дата сдачи: «___»_________20__г.

Дата защиты: «___»________20__г.

Оценка:______________________                       

                                                                   

                 

 

Калуга, 2012г.

                                             ОГЛАВЛЕНИЕ

 

 

ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………………..3

 

ГЛАВА I. Общая вирусология………………………………………………..….5

 

ЧАСТЬ 1. Культивирование вирусов в куриных эмбрионах…………………..5

 

1.1. История открытия…………………………………….……...........................5

1.2. Характеристика культивирования ………………………………….………6

1.3. Способы заражения куриных эмбрионов……………….……....................7

1.4. Индикация вируса в курином эмбрионе………………………….....….....10

1.5. Недостатки метода культивирования вирусов в куриных эмбрионах…..10

 

ГЛАВА II. Частная вирусология………………..…..…………………………..11

 

ЧАСТЬ 1. Вирус инфекционного гепатита собак …………………………….11

 

1.1. Введение………………………………………………………..………...….11

1.2. Возбудитель болезни ………………………………………..………...……11

1.3. Эпизоотологические данные …………………………………….………...12

1.4. Симптомы ….………………………………………………….....…...……..13

1.5. Патогенез………………………………………………………..……...……15

1.5.1. Реакция преципитации в геле……………………………………...19

1.5.2. Иммунолюминесценция…………………………………………...20

1.5.3. Взаимоотношения с системой иммунитета………………………20

1.6. Клинические признаки……………………….……………..….……...…...21

1.7. Диагностика. …………………………………..………...……………….…24

1.8. Лечение………………………………………………………………………24

1.9. Профилактика……………………………………………………………….25

 

ЗАКЛЮЧЕНИЕ………………………………………………………………….27

 

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………….................28

 

ПРИЛОЖЕНИЯ………………………………………………………………….29

 

 

 

 

 

ВВЕДЕНИЕ

Вирусология ( от лат. virus – яд животного происхождения, logos - учение) — современная биологическая наука, занимающаяся изучением мельчайших микроорганизмов – вирусов. Как самостоятельная наука вирусология сформировалась сравнительно недавно. Несмотря на то, что заболевания вызываемые вирусами (оспа, бешенства и др.), были известны человечеству еще в глубокой древности, их изучение в основном началось только в конце 19 столетия.

Общая вирусология включает в себя:  общую характеристику и систематику вирусов; взаимодействие вирусов с чувствительными клетками; культивирование, этиологию и генетику вирусов; патогенез вирусных инфекций;  особенности противовирусного иммунитета и др..

Частная вирусология представлена в следующей последовательности: название семейства и вируса; основные свойства вируса; характеристика болезни; клиническая, эпизоотическая и лабораторная диагностика и др., то есть исследует особенности определённых групп вирусов животных и разрабатывает меры борьбы с вызываемыми этими вирусами болезнями.

Для количественного  накопления вирусов наиболее удобную  систему представляют культуры клеток. Первые попытки культивирования  клеток животных вне организма относятся к концу прошлого столетия. Эти отрывочные наблюдения указывали на возможность сохранения жизнеспособности тканей и клеток в искусственных условиях и положили начало глубоким научным исследованиям тканевых культур. Большая заслуга в деле разработки методов культивирования тканей принадлежит Каррелю. Он впервые доказал возможность размножения клеток животных в искусственных условиях и тем самым продемонстрировал их “бессмертность” и сходство с одноклеточными свободноживущими организмами. Значительных успехов в этом направлении достигла группа исследователей под руководством Эрла. Они первые получили рост большого числа клеток на стекле и в жидкой перемешиваемой суспензии.

Тканевые культуры давно нашли применение для решения  различных вопросов биологии и медицины. Однако лишь успехи в области вирусологии, достигнутые с помощью тканевых культур, явились мощным стимулом их развития до современного уровня. Культивирование вирусов помогает решить ряд теоретически проблем, связанных с изучением особенностей взаимодействия "вирус-клетка". Кроме того решение целого ряда прикладных задач, связанных с диагностикой и производством препаратов для профилактики вирусных инфекций невозможно без накопления вируссодержащего сырья.

В настоящее  время существуют следующие методы культивирования вирусов:

• на восприимчивых домашних и лабораторных животных (телята, мыши, белые крысы, кролики, морские свинки, хомяки, цыплята);
• На развивающихся куриных эмбрионах, деэмбрионированных яйцах и эмбрионах других видов птиц;
• В культуре ткани и клеток.

В первой части подробно будет описан один из методов культивирования вирусов, а именно культивирование на куриных эмбрионах.

Во второй части подробно будет описана одна из болезней - заболевание вирусом инфекционной болезни гепатита собак, имеющее большое значения для предупреждения заболевания и осуществление общих ветеринарно-санитарные мероприятия: предупреждение заноса возбудителя; своевременное диагностирование гепатита; проведение мероприятий, направленных на ликвидацию болезни.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ГЛАВА I. Общая вирусология

ЧАСТЬ 1. Культивирование вирусов в куриных  эмбрионах

Культивирование вирусов помогает решить ряд теоретически проблем, связанных с изучением  особенностей взаимодействия "вирус-клетка". Кроме того решение целого ряда прикладных задач, связанных с диагностикой и производством препаратов для профилактики вирусных инфекций невозможно без накопления вируссодержащего сырья.

1. История открытия

Культивирование вирусов в куриных эмбрионах  – наиболее совершенный метод. Впервые  он был применен Раусом в 1911 году для выделения вируса саркомы белых мышей. Однако идея использования куриных эмбрионов для выращивания вирусов не была оставлена и вскоре получила реальное воплощение. Ведь использовать целый эмбрион гораздо удобнее, чем только часть его. Куриный эмбрион - это автономный, снабженный всем необходимым организм, защищенный яичной скорлупой, от природы наделенный всеми необходимыми защитными средствами от бактерий. Они дешевы и доступны, и их можно получать в необходимых количествах. И в 1931 году Вудраффом и Гудпасчером были проделаны опыты – они заразили хорионов-аллантоисную оболочку куриного эмбриона вирусом оспы птиц, и с этого времени культивирование вирусов стало такой же легкой процедурой, как и выращивание бактерий.

Вирусы, имеющие эпителиотропные свойства (оспа, оспа птиц, ларинготрахеит и др.), успешно развиваются на хорион-аллантоисной оболочке, вызывая макроскопически видимые изменения. Различные представители микровирусов (грипп А, В и С, Ньюкаслская болезнь, классическая чума птиц, эпидемический паротит, инфекционный бронхит птиц, вирусный гепатит утят, арбовирусы и др.) хорошо репродуцируются в курином эмбрионе при введении их в аллантоисную полость. Некоторые крупные вирусы культивируются в желточном мешке эмбриона, вакцинные штаммы вируса чумы КРС репродуцируются в эмбрионе при внутривенном его заражении.

В 1937 году выращивание  вирусов в оплодотворенных куриных  яйцах позволило практической медицине одержать крупную победу. Бактериологи Рокфеллеровского института постоянно вели поиски средств, способных оказать помощь в борьбе против вируса желтой лихорадки. Ведь уничтожить комаров полностью было невозможно, помимо этого постоянными носителями инфекции в тропиках были обезьяны. Южноафриканский микробиолог Макс Тейлер, работавший в Рокфеллеровском институте, поставил перед собой цель получить ослабленную культуру вируса желтой лихорадки. Он пассировал вирус, перепрививая его от одного животного к другому, от одного эмбриона к другому, для чего использовал 200 мышей и 100 куриных эмбрионов, пока не получил мутант, который вызывал лишь легкие симптомы желтой лихорадки, но зато способствовал развитию полной невосприимчивости к этой болезни. За эту работу Тейлер в 1951 году был удостоен звания лауреата Нобелевской премии в области медицины и физиологии.

2. Характеристика культивирования

Культивирование в куриных эмбрионах – наиболее доступный и удобный метод как для первичного выделения многих вирусов животных, так и для последующего культивирования их в лаборатории.

В основе метода лежит удаление эмбриона (деэмбринирование) до яйца в период, когда к его скорлупе изнутри полностью прилегает хорион-аллантоисная оболочка. Если внутрь такого яйца добавить питательную среду, то образуется своеобразная культура ткани, в которой может репродуцироваться вирус.

Метод обладает рядом преимуществ, так как позволяет  получить более чистый вирус, чем в аллантоисно-амниотической жидкости, что важно для снижения аллергизирующих свойств вакцин, приготовленных из этого материала, а отсутствие желточного мешка и, следовательно, содержащихся в нем специфических антител способствует размножению некоторых видов вирусов.

Инкубацию проводят в гнездах штатива тупым концом яйца вверх в хорошо вентилируемых  инкубаторах или термостатах  при 37-37,5^оС,относительной влажности 63-65%. Для заражения отбирают 4-13 дневные эмбрионы с зараженными кровеносными сосудами, желточным мешком и подвижной тенью. Перед заражением скорлупу яиц обрабатывают спиртом, обжигают и в области введения (чаще над воздушной камерой) смазывают 2% йодной настойкой. Материал или исследуемую культуру вводят, вскрывая или не вскрывая скорлупу, в желточный мешок (риккетсий), в аллантоисную или в амниотическую полости (большинство вирусов), наносят на хорион-аллантоисную оболочку. Реже культуру вводят в тело эмбриона или в/в. Зараженные КЭ помещают в термостат в условиях и на сроки, которые зависят от вида микроба и целей исследования. Некоторые данные о результатах заражения можно получить при внешнем осмотре КЭ под микроскопом (инъекция сосудов, потеря подвижности и др.). Однако в большинстве случаев КЭ вскрываю. Для этого после обработке спиртом и йодной настойкой скорлупу срезают выше границы воздушного мешка, пастеровской пипеткой или шприцем отсасывают сначала аллантоисную, а затем амниотическую жидкость, избегая повреждения сосудов и желточного мешка. Эмбрион и хорион-аллантоисную оболочку извлекают из скорлупы, помещают в стерильные чашки, промывают стерильной дистил. водой и осматривают. Дальнейший ход исследования эмбриона и его жидкостей зависит от вида микроба или вируса и целей опыта. На размножение вирусов в них существенное влияние оказывает температура инкубации, возраст эмбрионов, метод заражения и количество введенного вируса. Многое вирусы (чума птиц, гриппа, герпеса и др.) активно репродуцируются при температуре от 32 до 37^оС. Некоторые специально селекционированные штаммы удовлетворяет более низкая температура (23…28^оС), но скорость репродукции при этом значительно ниже. При температуре 39…40^оС вирусы размножаются быстрее, а при 41…42^оС, как правило, они не размножаются. Наиболее активно накапливается вирус при введении в эмбрион 1000…10000 инфекцированных доз.

3. Способы заражения куриных эмбрионов

Для заражения  выбирают здоровые эмбрионы. Для этого  проводят овоскопию. На скорлупе делают пометки карандашом - границы воздушной камеры и местоположение зародыша.

Существует  несколько способов заражения:

1. Заражение в аллантоисную полость.

10-суточные эмбрионы  зара-жают через отверстия, сделанные  в скорлупе и подлежащих оболочках  (см. выше). Все операции проводят асептично с горящей газовой горелкой. Место введения обрабатывают 2% йодированным спиртом, вводят 0,1-0,2 мл жидкости. Отверстие закрывают каплей расплавленного парафина. На скорлупе пишут:

• название вируса

• дату

• фамилию

2. Заражение через искусственную  воздушную камеру на ХАО.

1. Делается отверстие в области воздушной камеры.

2. Делается окошко «А»
3. Отсасывается воздух из воздушной камеры.
4. В окошко «А» капается вирус содержащая жидкость. Отверстие заклеивается лейкопластырем.
5. На скорлупе пишется название вируса, дата, фамилия.

 

3. Заражение на хорион-аллантоисную оболочку;

 

Обычно используют 10-12-суточные эмбрионы.

Применяется для  выделения и культивирования  вирусов, образующих на оболочках бляшки (вирусы вакцины, натуральной оспы, простого герпеса). Перед заражением яйца просвечивают с помощью овоскопа, карандашом очерчивают границу воздушного пространства и хорион-аллантоисной оболочки. Поверхность яйца над воздушным пространством и в месте заражения протирают спиртом, прожигают, обрабатывают йодом и делают отверстие в полости воздушного мешка. На месте заражения скорлупу удаляют так, чтобы не повредить подскорлупную оболочку, которую затем прокалывают короткой стерильной иглой, чтобы не повредить хорион-аллантоисную оболочку. Воздух из полости воздушного мешка отсасывают Вирусный материал (0,05 – 0,2 мл) наносят на хорион-аллантоисную оболочку туберкулиновым шприцом с короткой иглой или пастеровской пипеткой. Отверстие в скорлупе закрывают стерильным покровным стеклом или тем же выпиленным кусочком скорлупы и по краям заливают  расплавленным парафином. Зараженные эмбрионы располагают на подставке горизонтально и инкубируют в термостате. Вскрытие эмбрионов производится не раньше 48 часов инкубации. На зараженной оболочке обнаруживаются беловатые непрозрачные пятна разной формы (бляшки).

 

4. Заражение в амниотическую полость;

 

Обычно используют 7-14-суточные эмбрионы.

Вирус, введенный в аллантоис, размножается в эндодермальных клетках, переходя затем в аллантоисную жидкость. Заражение осуществляют следующим способом: в скорлупе над воздушной камерой острием скальпеля или ножниц производят прокол, после чего через отверстие в вертикальном направлении вводят иглу со шприцом, которая проходит через хорион-аллантоисную оболочку и попадает в аллантоисную полость, материал вводится в объеме 0,1 мл и отверстие заливают парафином.

 

5. Заражение в желточный мешок.

 

С этой целью используют эмбрионы 5 – 10-дневного возраста. Наиболее употребительны для метода заражения. По первому материал вводится через  воздушное пространство. В центре яйца делают отверстие, помещают его на подставку тупым концом вправо и через отверстие в вертикальном направлении вводят иглу, надетую на шприц, игла проходит через хорион-аллантоисную оболочку, аллантоисную полость в желток. В желточный мешок можно ввести от 0,1 до 0,5 мл вируссодержащего материала. После заражения отверстие в скорлупе заливают парафином, и эмбрион помещают в термостат. По второму методу на границе воздушного пространства с той стороны, где лежит желток (стороны, противоположной от эмбриона), делают прокол скорлупы, через который вводят инфекционный материал. Направление иглы должно быть к центру яйца.

Наблюдение  и учёт результатов. В качестве вируссодержащего материала можно использовать содержимое желточного мешка, аллантоисную и амниотическую жидкости либо весь эмбрион, нарезанный вместе с окружающими тканями на кусочки. Для выявления характерных поражений на хорион-аллантоисной мембране удаляют скорлупу и наружную оболочку. Затем мембрану извлекают и помещают в стерильную воду. Характер поражений изучают на тёмном фоне.

Рис. 1. Схематическое изображение развивающегося куриного эмбриона.

Вследствие  этого способы заражения куриного эмбриона приведены схематично на рис. 2.

Рис. 2. 1 - в амнион; 2 - в аллантоисную полость; 3 - в желточный мешок.

 

4. Индикация вируса в курином эмбрионе

1.     Гибель куриного эмбриона в характерные для данного вируса сроки. Гибель эмбрионов в первые сутки не специфична. Эмбрионы погибшие в более поздние сроки переносятся в холодильник (+ 4С). Все эмбрионы извлекают из термостата в момент максимального накопления вируса. Срок для каждого вируса - справочные данные.

2.     Вскрытие эмбриона и анализ патологоанатомических изменений.

• Отечная ХАО и белые узелки некроза (оспины).
• Мутность или изменение цвета аллантоисной и амниотической жидкостей. Красноватый цвет жидкостей - результат гемолиза.
• Изменения зародыша: карликовость, кровоизлияния, мумификация.
• Органы зародыша - некроз, кровоизлияния.

3.     Наличие гемаглютинации при проведении капельной реакции ГА. (аллантоисная жидкость + 5% р-р эритроцитов кур)

5. Недостатки метода культивирования вирусов в куриных эмбрионах:

• куриные эмбрионы могут быть носителями микроорганизмов (сальмонеллы, туберкулезная палочка), в том числе вирусов (лейкоз птиц, бронхит кур и др.) и противовирусных антител.

• не все вирусы культивируются в куриных эмбрионах.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ГЛАВА II. Частная вирусология

ЧАСТЬ 1. Вирус инфекционного гепатита собак

1. Введение

Инфекционный гепатит - контагиозное вирусное заболевание, поражающее значительную группу плотоядных. Заболевание впервые зафиксировано в Швеции Рубортом (Rubort) в 1937 году. В литературе прежних лет эту болезнь часто называли болезнью Руборта. Позднее заболевание собак инфекционным гепатитом было отмечено в Америке, Австрии, Финляндии, Германии, Швейцарии и других странах. С 1953 года болезнь регистрируют и в России. 

2. Возбудитель болезни

Возбудитель инфекционного  гепатита (он же возбудитель эпизоотического  энцефалита лисиц) - ДНК-содержащий вирус, относящийся к семейству аденовирусов (впервые вирусы этого семейства были выделены из аденоидов у человека).

Семейство Adenoviridac имеет два основных рода: Mastadcnovirus и Aviadenovirus. Возбудитель инфекционного  гепатита Adcnovirus canine тип 1 (Ad can-1) относится к роду Mastadcnovirus. Сюда же относится и другой аденовирус собак Adcnovirus canine тип 2 -возбудитель инфекционного ларинготрахеита у собак. При этом вид Ad can-2 в антигенном отношении имеет очень мало общего с видом Ad can-1.

Рис. 3. Схематическое строение аденовируса

1. фибрилла; 2. Пентон; 3. Гексон; 4. ДНК вируса.

Возбудитель инфекционного  гепатита собак, как и другие адсновирусы, имеет интересное и сложное строение (рис. 7). Этот вирус представлен в  форме икосаэдра (20 поверхностей и 12 вершин) диаметром 70-80 нм. Белковая оболочка (капсид) состоит из большого количества субъединиц (252), из которых 12 расположены на вершинах и называются пентонами. Остальные капсомсры называют гексонами. От каждого пентона отходит нитевидное образование - фибрилла. Получается, что структурно каждый такой пентон окружен 5 гексонами (поэтому он и называется пептоном), а гексон - 6 соединенными гексонами соответственно. Гексоны и пентоны содержат различные вирусные белки - антигены, причем если с гексонами связывают общегрупповые антигены, то в структурах пентонов расположены антигены определяющие более конкретный серовариант. Внутри капсида находится довольно крупный геном (молекулярная масса вирусной ДНК-23,8х106).

Ad can-1 обладает онкогенной активностью, вызывая образование злокачественных опухолей у лабораторных животных.

Вирус относительно устойчив к факторам внешней среды. Вирус хорошо переносит высушивание и замораживание. При комнатной температуре он сохраняет активность 10-13 недель, при 4°С — более 9 месяцев, при 37°С — до 29 дней, 50°С — 150 мин, 60°С — 3-5 мин, 100°С — 1 мин, однако вирус не термоустойчив и при кипячении погибает практически моментально. В патологическом материале, консервированном 50%-м раствором глицерина, вирус при 4°С не погибает до 8 лет. Неустойчив он также и к многим дезинфицирующим веществам (формалин, фенол, лизол, свежегашеная известь, щелочи), разрушают вирус, но устойчив к эфиру, хлороформу и метанолу. Под воздействием ультрафиолетовых лучей он быстрее всего инактивируется в водных растворах (за 30-60 мин). В испражнениях и различных биологических секретах может сохраняться в природных условиях в течение нескольких месяцев. Кроме характерного заболевания у собак и эпизоотического энцефалита у лисиц, вирус вызывает похожие заболевания у валков, медведей, койотов, песцов и енотов. Заболевание людей вирусом Ad can-1 не зарегистрировано.

3. Эпизоотологические данные

В естественных условиях к инфекционному гепатиту восприимчивы собаки всех возрастов и пород, но особенно молодняк в 1,5-6 месяцев. Животные старше 3 лет заболевают редко. Болеют также песцы, лисицы, волки и шакалы. Мыши, обезьяны некоторых видов и человек могут быть скрытыми носителями вируса инфекционного гепатита плотоядных.

Основным источником возбудителя инфекции служат собаки (реконвалесценты и вирусоносители), у которых вирус выделяется с мочой, носовой слизью, конъюнктивальным секретом и калом. Характерная эпизоотологическая особенность инфекционного гепатита собак - длительное вирусоносительство на протяжении нескольких лет.

Резервуаром вируса в природе являются дикие звери  и бродячие собаки. Заражение происходит алиментарным и контактным путем. Установлены  случаи распространения болезни  при несоблюдении правил асептики и  антисептики, при хирургических операциях, массовых прививках и др.

Имеются данные о том, что самки-вирусоносители в течение ряда лет могут заражать своих щенков, а также самцов-производителей при условии тесного контакта с ними, особенно во время случки.

При возникновении болезни в собаководческих питомниках в течение эпизоотии инфекционного гепатита наблюдается определенная последовательность. В начальном периоде развития эпизоотического процесса отмечают единичные случаи остро-протекающей болезни. В дальнейшем при отсутствии необходимых ветеринарно-санитарных мер эпизоотия распространяется более широко, захватывая в первые 2-3 недели значительное количество собак и постепенно затухая к концу 2-3-го месяца. Такая динамика развития эпизоотического процесса не бывает строго постоянной и зависит от эпизоотической обстановки и степени первичного охвата поголовья.

Заболеваемость  и летальность зависят от способствующих и благоприятствующих заболеванию  факторов. Переохлаждение, перегревание и неполноценное кормление животных, а также секундарные инфекции, различные гельминтозы и другие неблагоприятные воздействия активизируют латентное течение гепатита, обусловливая клиническое проявление болезни. Летальность при инфекционном гепатите среди собак достигает 20%. Часто гепатит сопровождается другими инфекционными заболеваниями - сальмонеллезом, чумой, колибактериозом, что ведет к резкому увеличению гибели животных и затрудняет дифференциальную диагностику.

Инфекционный  гепатит собак чаще наблюдается  весной и летом при рождении молодняка, а также ослабленные и пораженные гельминтами животные. Спорадические же случаи заболевания встречаются в любое время года и связаны в основном с обострением латентного или хронического течения болезни под влиянием каких-либо неблагоприятных факторов.

У переболевших гепатитом собак, независимо от тяжести  перенесенного инфекционного процесса, наступает продолжительный, практически пожизненный иммунитет. Антитела против вируса формируются на 15-21-й день после заражения и достигают максимума на 30-й день.

4. Симптомы

При естественном заражении инкубационный период продолжается от 3 до 9 дней, иногда дольше; при экспериментальном заражении - 6-8 дней.

Болезнь обычно начинается с постепенно нарастающей  вялости: собаки становятся малоподвижными, больше лежат, с трудом встают, при движении походка шаткая, снижается аппетит, а затем они отказываются от корма. Появляются характерные признаки гепатита: рвота с примесью желчи, односторонние или двусторонние кератиты и тонзиллит.

В дальнейшем животные быстро худеют, у них развивается анемия слизистых оболочек глаз и ротовой полости, у некоторых - желтушность склеры. Моча принимает темно-бурую окраску, что также часто является характерным признаком гепатита. Животные болезненно реагируют на пальпацию в области печени, становятся как бы осторожными в движениях. При этом часто принимают позу сидячей собаки, широко расставив передние лапы.

Особого внимания при гепатите заслуживает температурная  реакция. В первые дни болезни  температура обычно нормальная, но на 4-6-й день она быстро повышается до 41-41,7°С и держится на таком уровне почти до гибели животного. В период лихорадки носовое зеркальце у собак сухое и они испытывают повышенную жажду. Отмечается расстройство сердечно-сосудистой системы: число сердечных ударов возрастает до 90-110 в минуту и выше, сердечный толчок усилен, а пульс при тяжелом течении болезни ослаблен, иногда аритмичный. Дыхание учащено до 40-50 в минуту. При прослушивании легких слышны хрипы.

Резко выражена лейкопения (3-2 тыс. лейкоцитов), сменяющаяся в период понижения температуры значительным лейкоцитозом (до 30-35 тыс.). Лейкоцитарная формула почти всегда претерпевает закономерные изменения. В первые дни наблюдается относительное увеличение процента нейтрофилов с исчезновением эозинофилов и сдвигом влево до юных, снижение процента лимфоцитов до 7-15, моноцитоз. Отмечается токсическая зернистость нейтрофилов, у многих животных в крови появляются плазматические клетки. В острый период болезни значительно ускоряется СОЭ - до 20-30 мм, реже до 60 и достигает 70- 80 мм в течение 24 ч.

Подобные изменения  картины крови отражают состояние  организма животного в ходе его  борьбы с инфекцией. Уменьшение количества лейкоцитов и эозинофилов, а также  резко выраженный сдвиг влево - неблагоприятные  показатели, свидетельствующие о злокачественном течении болезни. И наоборот, резкое увеличение числа лейкоцитов и появление нормального числа эозинофилов свидетельствуют о выздоровлении животного.

Продолжительность болезни различна - от нескольких дней до 2-3 недель. Погибают собаки, находясь обычно в глубоком коматозном состоянии и совершенно не реагируя на внешние раздражения. Иногда за несколько часов перед смертью у некоторых животных наблюдаются подергивание отдельных групп мышц, судороги и непроизвольные движения конечностей.

При хроническом  течении гепатита у собак симптомы болезни выражены нерезко и носят неопределенный характер. Иногда они проявляются снижением или временной потерей аппетита, расстройствами деятельности желудочно-кишечного тракта (поносы, сменяющиеся запорами) и прогрессирующим исхуданием. Хроническому течению болезни свойственны редкие кратковременные подъемы температуры тела. Приступы могут быть различны как по интенсивности, так и по продолжительности обострения. Иногда наблюдается тяжелое течение болезни. Ремиссии между приступами лихорадки не имеют особой закономерности, температура повышается с интервалом в несколько дней, недель и даже в месяц. Чаще всего приступы лихорадки сопровождаются отклонениями со стороны сердечно-сосудистой системы, различной степени анемий слизистых оболочек, явлением гастроэнтерита.

Хронически  больные самки чаще всего абортируют или приносят нежизнеспособных щенят. У хроников отмечают долго не проходящие кератиты одного или обоих глаз.

5. Патогенез

Вирус, попав в организм, вначале размножается в регионарных лимфатических узлах, затем появляется в крови. Через 2-3 суток он образует скопление в виде внутриядерных включений в клетках эндотелия капилляров и венул всех органов, особенно печени и селезенки. В результате нарушения центральной части долек печени развиваются дистрофические изменения в паренхиме органа, что ведет к глубокому нарушению обмена веществ и интоксикации организма. Нарастающая интоксикация приводит к дистрофическим изменениям в почках, в сердечной мышце и множественным кровоизлияниям в слизистых и серозных оболочках, а также в паренхиматозных органах.