Диагностика чумы крупного рогатого скота

1.ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

 

1.1.Диагноз на чуму крупного  рогатого скота (чуму КРС) ста-

вят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков

болезни, патологоанатомических изменений и лабораторных исследова-

ний патматериала от павших и больных животных.

 

1.2. Лабораторная диагностика чумы  КРС основана на примене-

нии комплекса серологических,вирусологичесских, физико-химических

методов исследования и постановке биопробы (см.схема I) и включа-

ет:

- исследование проб патматериала  на наличие специфического

антигена вируса чумы КРС в реакциях связывания комплемента (РСК),

диффузионной преципитации в агаровом геле (РДП), непрямой гемаг-

глютинации (РНГА) и реакции нейтрализации (РН), методами иммуно-

ферментного анализа (ИФА) и флуоресцирующих антител (MФА);

- исследование проб сывороток  крови от перебо-

левших животных на наличие специaических антител в РСК, РДП, ИФА и РН;

 

- выделение возбудителя болезни  в первичной

культуре клеток почки телят (ПТ) или перевиваемых

культурах клеток почки овцы (ПО) и почки свиньи (СПЭВ)

с последующей идентификацией выделенного вируса в РН,

ИФА, МФА, РСК, РНГА;

- исследование проб патматериала  и зараженной

культуры клеток на наличие вируса чумы КРС методами

электронной (ЭМ) и иммуноэлектронной (ИЭМ) микроскопии;

- постановку биопробы на восприимчивых животных,

неиммунных и иммунных к вирусу чумы КРС, с последующим

подтверждением специфичности заболевания в серологичес-

ких реакциях.

 

1.3. По результатам серологических  исследований

диагноз на чуму КРС ставят на основании обнаружения

вирусного антигена в органах и тканях павших и убитых больных животных

в РСК, РПД, ИФА, РНГА, МФА (не менее, чем в двух из указанных реакций) и спе-

цифических антител у переболевших животных в РСК, РДП и РН.

 

При получении сомнительных результатов сероло-

гических исследований проводят выделение возбудителя

болезни в чувствительных культурах клеток и постановку

биопробы на крупном рогатом скоте. В этом случае диагноз на чуму КРС

ставят на основании выделения и идентификации возбудителя болезни в РН,

ИФА, МФА и подтверждения специфичности заболевания животных в

серологических реакциях.

 

1.4. Для постановки диагноза по  результатам серологических

исследований требуется 24-72 ч, а по результатам выделения,

идентификации возбудителя болезни и постановки биопробы с под-

тверждением специфичности заболевания необходимо 15-30 суток.

 

1.5. Чуму КРС необходимо дифференцировать  от злокачественной

катаральной горячки, ящура, вирусной диареи, инфекционного рино-

трахеита, геморрагической септицемии и кровепаразитарных болезней.

 

2. ВЗЯТИЕ И ПОДГОТОВКА ПАТОЛОГИЧЕСКОГО  МАТЕРИАЛА

ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ

 

2.1. В лабораторию для  исследования  направляют пробы органов

и тканей от  убитых больных и павших животных, гепари-

низированную кровь от больных и сыворотку крови от переболевших

животных.

 

2.2. Пробы патологического материала  берут от 3-5

павших и 1-2 голов  убитых больных животных, убой кото-

рых проводят в период максимального проявления, клинических призна-

ков болезни, характерных для  чумы КРС (на 3-4 сут гипертермии).

Патматериал от трупов берут не позднее 4-6 ч после гибели

животных.

 

От павших и убитых животных берут предлопаточные,

заглоточные и мезентериальные лимфатические узлы, кусочки селезен-

ки и пораженные участки слизистых оболочек сычуга и кишечника.

Масса проб каждого органа должна быть не менее 10 г.

 

Каждую пробу патматериала берут отдельно в стерильную плотно

закрывающуюся посуду (флаконы) или полиэтиленовые пакеты, которые

упаковывают в общий полиэтиленовый пакет с ватой, смоченной 1-2%

раствором хлорамина, и помещают в термос со льдом.

 

2.3. Кровь для вирусологических  исследований берут от 5-10

больных животных через 2-3 сут   после подъема температуры тела

в объеме 10-15 см3 в стерильные пробирки или пенициллиновые фла-

коны с резиновыми пробками, содержащие гепарин (5 ЕД на I см3

крови). Взятую кровь тщательно перемешивают с гепарином, упаковы-

вают в общий полиэтиленовый пакет и помещают в термос со льдом.

 

2.4. Кровь для серологических  исследований берут от 10-15 пе-

реболевших животных в стерильные пробирки в объеме 10-15 см3

не ранее 2 недель после переболевания. Одновременно берут кровь от

10 неболевпшх  животных этой  же фермы. Пробирки с кровью  поме-

щают на 3-4 ч, в тепло (тепература 30 - 37°С), а затем на

16-18 ч; при (4(1)°C. Сыворзтку осторожно отбирают и переносят

в стерильные пробирки или пенициллиновые флаконы с резиновыми

пробками, упаковывают в общий полиэтиленовый пакет и помещают

в термос со льдом.

 

2.5. При взятии патологического  материала каждую пробу нуме-

руют. В сопроводительном документе на патматериал указывают: по-

рядковый номер, наименование, дату взятия и краткую характеристику

каждой пробы. К сопроводительному документу прилагают краткую

пояснительную записку, в которой указывают: наименование хозяйства,

фермы, время и место появления, заболевания, количество заболевших

и павших животных, клинические признаки и картину патвскрытия,

краткие эпизоотологические данные.

 

2.6. Отобранный патологический материал  направляют в лабора-

торию с нарочным в опечатанном  термосе со льдом или  термочемодане при стро-

гом соблюдении ветеринарно-санитарных мер предосторожности.

 

2.7. Поступивший патологический  материал освобождают от

соединительной ткани, взвешивают по 3-5 г каждого органа, измель-

чают ножницами и тщательно растирают в фарфоровой ступке со стериль-

ным песком или битым стеклом. Гомогенат разводят стерильным 0,85%

раствором хлорида натрия, до 20% концентрации, замораживают, отта-

ивают и центрифугируют при 3 тыс. об/мин, в течение 30 мин.

Надосадочную жидкость используют для выявления антигена в сероло-

гических реакциях в концентрации, указанной в соответствующих

методиках.

 

2.8. Гепаринизированную кровь, поступившую  для выделения

вируса, используют для заражения культур клеток в цельном виде и

в  разведении 1:10. При поступлении свежевзятой гепаринизирован-

ной крови без признаков гемолиза для выделения, вируса лучше ис-

пользовать лейкоцитарную фракцию крови. С этой целью кровь цент-

рифугируют при 2,5-3 тыс.об/мин  в течение 20 мин и образовав-

шийся слой клеток (лейкоцитарная фракция) на границе плазмы и эритроцитов

используют для  заражения  клеточных культур.

 

 

             Общая схема проведения лабораторных исследований                   

патологического материала на чуму КРС

Схема 1

 

2.9. Пробы сывороток крови исследуют  в РСК и РДП без прогре-

вания, в РН - только после предварительной инактивации  при

(56±1)°С в течение 30 мин.

 

3. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ПРОБ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО  МАТЕРИАЛА

 

3.1. Реакция связывания комплемента

 

3.1.1. Реакция связывания комплемента (РСК) применяется

для прижизненной и посмертной диагностики чумы крупного рогатого

скота путем обнаружения антигена в патологическом материале,

выявления антител в сыворотках крови переболевших животных и иден-

тификации возбудителя, в инфицированной клеточной культуре.

 

3.1.2. Компоненты реакции:

- гемолизин - биофабричного производства;

- комплемент - биофабричного производства  с активностью

               не ниже 1:40;

- 2,5% взвесь эритроцитов барана на физиологическом растворе;

- стандартные (специфическая и  нормальная) сыворотки;

- стандартные (специфический и  нормальный) антигены;

- испытуемые антигены или сыворотки;

- 0,85% раствор хлорида натрия (физиологический  раствор).

 

3.1.3. РСК при чуме крупного  рогатого скота ставят в объеме

0,5 см3. Реакцию проводят при двух  температурных режимах: (4±2)°С

в течение 16-18 ч. (фаза связывания комплемента) и (37±1)°С

в течение 45 мин. (фаза выявления). Разведения  компонентов реакции

готовят на физиологическом растворе. Все сыворотки (испытуемые,

заведомо специфические и нормальные) в РСК используют без пред-

варительного прогревания. Перед постановкой главного опыта прово-

дят титрование гемолизина согласно наставлению по его применению.

Гемолизин применяют в составе гемсистемы, которую готовят путем

смешивания равных объемов гемолизина в рабочем титре и 2,5% взвеси

эритроцитов барана. Приготовленную смесь выдерживают в термостате

при (37(1)°C в течение 45 мин и используют в РСК в дозе 0,2 см3.

 

3.1.4. Постановка качественной РСК

Для  обнаружения специфического антигена в испытуемых пробах

РСК ставят одновременно с двумя  стандартными (специфической и

нормальной) сыворотками, взятыми в рабочем титре, указанном на

этикетках. Испытуемые органо-тканевые антигены используют в раз-

ведении 1:20, культуральные - 1:4.

 

Для выявления специфических антител в истуемых сыворотках

РСК ставят одновременно с двумя стандартными (специфическим и нор-

мальным) антигенами в рабочем титре. Испытуемые сыворотки исполь-

зуют в разведении 1:10.

 

В качестве контроля служат стандартные антигены и сыворотки

в рабочем титре.

 

3.1.5. PCК  ставят с 9 дозами комплемента, которые готовят  по схеме 2.

Схема 2

Компоненты	№ пробирок
	1	2	3	4	5	6	7	8	9
Комплемент в разведении 1:5, куб. см	0,2	0,3	0,4	0,5	0,6	0,7	0,8	0,9	1,0
Физиологический раствор, куб. см	0,8	0,7	0,6	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1	-
Общий объем смеси, куб. см	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
Доза комплемента в 0,1 куб. см  смеси	0,02	0,03	0,04	0,05	0,06	0,07	0,08	0,09	1,0

Для постановки РСК каждый испытуемый и контрольный антигены

в объеме по 0,1 см3 вносят в два ряда пробирок (по 9 пробирок в

каждом ряду). Затем в пробирки первого ряда добавляют по 0,1 см3

нормальной, а в пробирки второго - по 0,1 см3 специфической стан-

дартных сывороток в рабочем разведении. При исследовании сыворо-

ток компоненты разливают по 0,1 см3 в следующем порядке: испытуе-

мые и контрольные сыворотки - в 2 ряда пробирок, потом в первый

ряд вносят нормальный антиген, во второй - специфический.

 

Затем в первые пробирки каждого ряда вносят по 0,1 см3  комп-

лемента в дозе 0,02, во вторые пробирки каждого ряда - 0,03, в

третьи - 0,04 и т.д. (см.схему 3).

 

После добавления комплемента штативы с пробирками встряхи-

вают и оставляют при (4(1)OC на 16-18 ч. По истечении указанного

срока во все пробирки добавляют по 0,2 см3 гемолитической  смеси,

штативы встряхивают и помещают в термостат при (37(1)°С на 45 мин.

Учет результатов реакции проводят по 4-крестовой системе.

 

Реакцию считают:

- положительной - при задержке гемолиза   на 4 или 3 креста

в двух или более рядом стоящих пробирках, содержащих испытуемые

пробы (антигены или сыворотки) и специфические компоненты (сыворот-

ки, антигены), при полном гемолизе в аналогичных пробирках (пробирки,

содержащие одну и ту же дозу комплемента), содержащих испытуемые

пробы и нормальные компоненты;

 

-сомнительной - при задержке гемолиза  на 2 креста в двух

и более рядом стоящих пробирках с испытуемыми пробами и специфи-

ческими компонентами при полном гемолизе эритроцитов в аналогич-

ных пробирках в ряду испытуемых проб с нормальными компонентами;

 

-отрицательной - при задержке на 1 крест или полном гемолизе

эритроцитов в аналогичных пробирках испытуемого материала со спе-

цифическими и нормальными компонентами.

 

Постановка качественной РСК позволяет не только выявить на-

личие антигена или антител в исследуемых пробах, но и определить

оптимальную дозу комплемента, необходимую для проведения количест-

венного анализа поступивших проб. В приведенной схеме 3 оптималь-

ная доза комплемента для антигенов № I и № 2 составляет 0,06, для

антигена № 3 - 0,05 в объеме 0,1 см3.

 

3.1.6. Постановка количественной  РСК

Для проведения количественного анализа проб в РСК испытуемые

органо-тканевые антигены используют в разведении от 1:20 до 1:5120,

культуральные пробы и испытуемые сыворотки - от 1:4 до 1:256. Стан-

дартные антигены и сыворотки используют в рабочих титрах, компле-

мент и гемолизин в установленных титрах. Общий объем реакции 0,5 см3.

 

Реакцию считают положительной, если испытуемый органо-тканевой

материал в разведении 1:20 и выше, а испытуемые культуральные про-

бы и сыворотки в разведении 1:10 и выше со специфическими компонен-

тами (сывороткой и антигеном) вызывают задержку гемолиза эритроци-

тов на 3-4 креста при полном гемолизе эритроцитов в аналогичных

разведениях испытуемых проб в смеси с нормальными компонентами

реакции.

 

За титр антигена или антител принимают наибольшее разведение

испытуемого материала, дающее задержку гемолиза эритроцитов на

3-4 креста с соответствующими  специфическими компонентами реакции.

 

3.2. Реакция диффузионной преципитации  в агаровом геле

3.2.1. Реакцию диффузионной преципитации  в агаровом геле

(РДП) применяют для прижизненной  и посмертной диагностики чумы

крупного рогатого скота путем обнаружения специфического антигена

в органо-тканевом материале сольных и павших животных и специфи-

ческих антител в сыворотках крови переболевших животных.

 

3.2.2. Компоненты реакции:

- 1% агаровая, среда;

- стандартные антигены и сыворотки;

- испытуемые антигены или сыворотки.

 

3.2.3. Для. приготовления, агаровой среды  используют бакто-агар

Дифко или отечественный агар после промывания, и сушки обычным спо-

собом (промывание в течение суток водопроводной,   затем  в течение

суток дистиллированной водой, сушка до исходного веса при комнат-

ной температуре).

 

Из агара готовят 1% гель на физиологическом растворе, к ко-

торому добавляют риванол 10 мг/куб.дм. Расплавленный агар фильтруют

через ватно-марлевый фильтр и разливают в чашки  Петри слоем

0,4-0,6 см. В затвердевшем агаре  по трафарету с помощью металли-

ческой трубки делают лунки диаметром 0,5 см на расстоянии 0,3-0,4см

друг от друга. Лунки располагают таким образом, чтобы одна из них

находилась в центре и 6 лунок вокруг неё.

 

Для обнаружения, антигена или антител в испытуемых пробах

РДП ставят одновременно с двумя стандартными (специфическим и

нормальным) компонентами реакции. При исследовании антигена в одну

из центральных лунок вносят стандартную специфическую, в другую -

стандартную нормальную сыворотки в рабочем разведении в объеме

по 0,1 куб.см. В периферические лунки разливают испытуемые антигены

в цельном виде (20% суспензия) в объеме по 0,1 куб.см. При исследова-

нии сывороток в центральные лунки вносят стандартные специфический

и нормальный антигены в рабочем разведении, а в периферические -

испытуемые сыворотки в цельном виде. При титровании испытуемых

антигенов и сывороток в РДП в периферические лунки вносят их

разведения от 1:2 до 1:32. Параллельно ставят контроля (специфи-

ческая и нормальная сыворотки с нормальным и  специфическим анти-

геном). После постановки реакции чашки Петри закрывают крышками,

ставят под стеклянный колпак и инкубируют при комнатной темпера-

туре в течение 18-24 ч.

 

Схема постановки РСК для обнаружения антигена.

Антигены по 0,1 куб.см	Сыворотки по 0,1 куб.см	Дозы комплемента по 0,1 куб.см
		0,02	0,03	0,04	0,05	0,06	0,07	0,08	0,09	0,1	Оценка результатов
Антиген испытуемый №1	СН	++ ++	++ ++	++ +-	+	-	-	-	-	-	Полож.
Антиген испытуемый №1	СС	++ ++	++ ++	++ ++	++ ++	++ ++	++ ++	++ ++	-	-	.
Антиген испытуемый №2	СН	++ ++	++ ++	++ ++	+	-	-	-	-	-	Полож.
Антиген испытуемый №2	СС	++ ++	++ ++	++ ++	++ ++	++ ++	++ +	+	-	-	.
Антиген испытуемый №3	СН	++ ++	++ ++	++ +-	-	-	-	-	-	-	Сомнит.
Антиген испытуемый №3	СС	++ ++	++ ++	++ ++	++	++	-	-	-	-	.
Антиген специф. (контроль)	СН	++ ++	++ ++	++ +-	+	-	-	-	-	-	Полож.
.	СС	++ ++	++ ++	++ ++	++ ++	++ ++	++ ++	++ ++	+	-	.
Антиген нормальный (контроль)	СН	++ ++	++ ++	++ --	-	-	-	-	-	-	Отриц.
.	СС	++ ++	++ ++	++ +-	-	-	-	-	-	-	.

Примечание: СН-сыворотка нормальная,

            СС-сыворотка специфическая

Антиген испытуемый №4	++	-	-	-	-	-	-	-	-	Отрицат.	-
Разбавитель без антигена	-	-	-	-	-	-	-	-	-	Отрицат.	-

- ацетон х.ч. для фиксации препаратов;

- забуференный ФБР физиологический  раствор, рН 7,2;

- диметилфталат или нефлуоресцирующее  иммерсионное масло;

- люминесцентный микроскоп.

 

3.5.3. Для обнаружения, и идентификации  вируса чумы КРС методом ФА

используют первичную культуру клеток ПТ или перевиваемую культуру

клеток ПО, выращенные на предметных стеклах в пробирках. Из пробирок

со стеклами удаляют ростовую питательную среду, вносят по 0,3-0,5 куб.см

гепаринизированной крови или 20% суспензии органов и тканей от воль-

ных и павших животных и ставят на контакт при (37(1)°C на 1,5-2 ч.

Каждой пробой заражают не менее 10 пробирок со стеклами. После кон-

такта пробирки со стеклами трижды промывают раствором Хенкса, вносят

по 1,5-2 куб.см поддерживающей питательной среды и инкубируют в термо-

стате при (37(1)°C. Через 48-72 ч стекла извлекают из пробирок,

промывают в двух сменах за суверенного физраствора и подсушивают

на воздухе.

 

Приготовленные культуральные препараты фиксируют в охлажденном

(4(1)°C ацетоне в течение 10 мин , промывают  в двух-трех сменах

забуференного физиологического раствора, подсушивают на воздухе,

затем половину препаратов обрабатывают специфической сывороткой

в рабочем разведении, а другую половину - нормальной сывороткой

в том же разведении. Обработку препаратов ведут во влажной камере

при (37(1)°C в течение 30 мин. После этого все препараты промывают

в 3-х сменах забуференного физиологического раствора, подсушивают

на воздухе и аналогично обрабатывают антивидовой люминесцирующей

сывороткой, взятой в рабочем разведении. Через 30 мин.  препараты

промывают в 3-х сменах забуференного физиологического раствора и

один раз в дистиллированной воде, подсушивают на воздухе и просматри

вают под люминесцентным микроскопом.

 

При наличии в испытуемых материалах вируса чумы крупного рога-

того скота в препаратах, обработанных специфической и люминесцирую-

шей сыворотками, наблюдается яркое зеленовато-желтое или  изумрудно-зеленое

гранулярное или диффузионное свечениев цитоплазме пораженных клеток, при

отсутствии такого свечения в контрольных препаратах, обработанных нормальной и

люминесцирующей сыворотками.

 

3.6. Реакция нейтрализации

3.6.1. Реакцию нейтрализации (РН) при  чуме крупного рогатого

скота применяют для обнаружения вируснейтрализующих антител в сы-

воротках крови переболевших и вакцинированных животных, а также

для идентификации возбудителя болезни в патологическом материале

и инфицированной культуре клеток.

 

3.6.2. Компоненты реакции:

- стандартные специфическая и  нормальная сыворотки;

- вирус (вакцинный штамм К3770);

- первично-трипсинизированная культура  клеток  ПТ или переви-

ваемая культура клеток ПО, выращенные в пробирках;

- испытуемые пробы (пробы сывороток  крови, органо-тканевого

материала и гепаринизированной крови).

 

Все сыворотки для постановки РН используют пссле предваритель-

ной инактивацин при (56(1)°С в течение 30 мин.

 

3.6.3. Постановка качественной РН

Качественную РН применяют для  установления специфичности

вызываемых вирусом поражений культуры клеток (идентификации вируса)

С этой целью испытуемые кровь, органо-тканевой или культуральный

материал в разведении 1:10 соединяют с равным объемом специфической

сыворотки, взятой в том же разведении. В качестве контроля служит

смесь пробы с нормальной сыворотки крови крупного рогатого скота. Смеси

выдерживают при (4(1)°C в течение 16-18 ч. после чего 10 проби-

рок с культурой заражают смесью материала со специфической сыворот-

кой и 10 - смесью материала с нормальной сывороткой. Для этого

в каждую пробирку с культурой клеток вносят по 1куб.см смеси и ставят

на контакт при (37±1 )°С на 2 ч. После  контакта пробирки промы-

вают раствором Хенкса, вносят питательную среду и инкубируют в тер-

мостате при (37±1)°С в течение 12 сут. Смену питательной среды

проводят через каждые 3 дня. В качестве контроля, служат 4-6 проби-

рок с неинфицированной культурой клеток.

 

Учет результатов РН проводят путем ежедневного просмотра про-

бирок с культурой  клеток под световым микроскопом. Реакцию считают

положительной, если в пробирках с культурой, инфицированной смесью

пробы со специфической сывороткой, отсутствует поражение клеточного

монослоя при наличии ЦПД вируса в пробирках с культурой, инфициро-

ванной смесью пробы с нормальной сывороткой.

 

3.6.4. Постановка количественной  РН

 

Количественную РН проводят для определения титра антител

в крови переболевших и вакцинированных животных.

Для исследования в РН используют парные сыворотки не менее,

чем от 10 животных. Первый раз кровь берут в начале болезни и

второй - через 2-3 нед  после переболевания животных.

Количественную РН проводят с постоянной дозой вируса (200-

500 ТЦД 50)  и двукратными последовательными разведениями сыворотки

от 1:5 до 1:2560, которые смешивают в равных объемах.

 

Приготовленные смеси выдерживают при (4(1)°C в течение

16-18 ч. после чего каждым разведением  испытуемой сыворотки

в смеси с вирусом инфицируют по 4 пробирки с культурой клеток.

В качестве контроля, служат 4 пробирки с культурой, инфицированной

смесью вируса с нормальной сывороткой в разведении 1:10. Условия

инфицирования культуры, её инкубирования и сроки смены питательной

среды те же, что и при постановке качественной  РН.

 

Учет результатов количественной РН проводят путем ежедневного

просмотра пробирок с культурой под световым микроскопом.

 

За титр антител принимают наивысшее разведение сыворотки,

подавляющее развитие ЦПД вируса в 50 процентах пробирок с инфици-

рованной культурой клеток. Отсутствие антител в сыворотках крови,

взятых в начале болезни, и наличие их через 2-3 нед. в титре 1:5

и выше свидетельствует о переболевании животных чумой КРС. В слу-

чае течения, болезни по частично иммунному фону четырехкратное и

более увеличение титра антител в сыворотках крови, взятых через

2-3 нед,  свидетельствует об инфекции, имевшей место среди об-

следуемых животных.

 

3.7. Выделение вируса в чувствительных  культурах клеток

Для выделения вируса чумы КРС используют первично-трипсинизи-

рованную культуру клеток ПТ или перевиваемые культуры клеток ПО

и СПЭВ.

 

В пробирки с монослоем клеток после удаления ростовой среды

вносят кровь, лейкоцитарную фракцию крови или 10% осветленную

центрифугированием суспензию органов и тканей от больных и павших

животных в объеме 0,2-0,3 куб.см и ставят на контакт на 1,5-2 ч.

при (37(1)° С. После контакта пробирки трижды промывают раствором

Хенкса, вносят по I см3 поддерживающей питательней среды и инкуби-

руют в термостате при  (37(1)° С в течение 10-12 сут.

 

Каждой пробой заражают не менее 10 пробирок с культурой

клеток. Контролем служат пробирки с неинфицированной культурой

клеток. Смену среды в пробирках с инфицированной и  неинфицирован-

ной культурой клеток проводят через каждые 2-3 дня. Просмотр зара-

женной культуры осуществляют под световым микроскопом ежедневно.

При отсутствия ЦПД в зараженной культуре клеток через 10-12 сут

проводят второй и третий пассажи. При наличии ДПД в инфицирован-