Вирус бешенства

Федеральное  государственное  бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования  московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологий  имени К.И.Скрябина

 

 

 

 

 

Кафедра ветеринарной вирусологии

 

 

 

 

 

Реферат

 

 

по частной вирусологии  на тему:

 

 

 

 

 

« Вирус бешенства»

 

 

 

 

 

 

                                                              Исполнитель студентка 3-го курса  ФВМ

         Хомягина О.С.

 

 

 

 

 

Москва 2013

 

Содержание

Содержание ……………………………………………………………………..2

1.Введение ………………………………………………………………………3

2.Характеристика возбудителя…………………………………………………4

2.1. Морфология вируса бешенства………………………………….....4

2.2. Устойчивость к физико-химическим воздействиям………………5

2.3. Антигенная структура……………………………………………….5

2.4. Антигенная активность……………………………………………...6

2.5. Культивирование вируса…………………………………………….6

2.6. Клинические признаки………………………………………………7

2.7. Патоанатомические изменения……………………………………..7

2.8. Локализация вируса…………………………………………………7

3. Лабораторная диагностика…………………………………………………..8

          3.1. РИФ…………………………………………………………………...9

          3.2 РДП……………………………………………………….…………..10

          3.3. Выявление телец Бабеша-Негри…………………………………...11

          3.3. Биопроба………………………………………………….………….12

4. Специфическая профилактика  и иммунитет………………………………14

5. Заключение…………………………………………………………………..16

6. Список литературы………………………………………………………….17

 

1.Введение

Вирус бешенства вызывает специфический энцефалит (воспаление головного мозга) у животных и  человека. Передаётся со слюной при  укусе больным животным. Затем, распространяясь  по нервным путям, вирус достигает  слюнных желёз и нервных клеток коры головного мозга, гиппокампа, бульбарных центров, и, поражая их, вызывает тяжёлые необратимые нарушения.

Вирус размножается в нейронных  клетках организма, частицы переносятся  через аксоны нейронов приблизительно со скоростью 3 мм в час. В 60% или более  случаев заболевания человека, инкубационный  период длится между 20-90 дней, и развивается  в течение 6 месяцев после экспозиции в 90% случаев.

Бешенство встречается на всех континентах, кроме Австралии и Антарктиды, но не регистрируется в островных государствах: в Японии, в Новой Зеландии, на Кипре, на Мальте, в Норвегии, Швеции, Финляндии, Испании и Португалии.

По данным ВОЗ от бешенства  ежегодно умирают 55000 человек, наиболее уязвимыми остаются страны Азии и  Африки (56% в Азии, 44% в Африке).

 

 

 

 

 

 

2.Характеристика возбудителя

2.1.Морфология вируса бешенства

Вирус относится к семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. РНК-содержащий. Геном представлен единой односпиральной линейной молекулой минус-РНК. Вирионы вируса состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии и липопротеидной оболочки с гликопротеиновыми булавовидными выступами. Вирион пулеобразной формы, средний размер его 180—175 нм.

Рис. 1. Схема строения вируса бешенства.

 

2.2.Устойчивость к физико-химическим воздействиям

Низкие температуры консервируют вирус. Для него губительны высокие температуры (80— 100 °С), в гниющем материале вирус может сохраняться до двух недель. Дезинфицирующие средства (растворы формальдегида, едкой щелочи, хлорной извести) в обычных концентрациях действуют на вирус губительно.

2.3.Антигенная структура

Вирионы вируса бешенства  содержат гликопротеидный (наружный) и нуклеокапсидный (внутренний) антигены. Гликопротеидный антиген индуцирует образование вируснейтрализующих и антигемагглютинирующих антител и обеспечивает развитие иммунитета у животных, а нуклеокапсидный — комплементсвязывающих и преципитирующих антител.

Вирус бешенства имеет 4 серотипа (прототипы): вирус бешенства, Лагос, Мокола, Дювенхейдж. Эпизоотические штаммы вируса бешенства в иммунобиологическом отношении родственные, но различаются по вирулентности. Все выделенные штаммы вируса по вирулентности разделяют на 5 групп. Штаммы первой группы характеризуются высокой, а пятой группы — низкой вирулентностью.

Спектр патогенности вируса тесно связан с его экологией, которая имеет особенности. Так, необходимо различать два основных и независимых эпизоотических проявления лиссавирусной инфекции:

1) эпизоотии бешенства, поддерживаемые наземными животными (лисицы, волки, енотовидные собаки, шакалы, мангусты, скунсы, еноты-полоскуны и др.);

2) эпизоотии хироптерного происхождения, поддерживаемые вампирами, насекомоядными и плотоядными летучими мышами.

С 1960-х годов бешенство диких животных стало преобладающим. Основным резервуаром и источником инфекции оказались лисицы и другие дикие животные. Болезнь у них может протекать латентно, обеспечивая персистенцию вируса в естественных условиях. Бешенство собак при городских эпизоотиях, как правило, заканчивается их гибелью.

2.4.Антигенная активность

Животные, иммунизированные против бешенства, продуцируют вируснейтрализующие, комплементсвязывающие, преципитирующие, антигемагглютинирующие и литические антитела.

Вирус обладает гемагглютинирующими свойствами в отношении эритроцитов гусей, кур, морских свинок, овец, человека (группы 0). Обычно реакцию гемагглютинации ставят с эритроцитами гуся при 0—4 °С, рН 6,2—6,4. Между инфекционной и гемагглютинирующей активностью существует линейная зависимость.

2.5.Культивирование вируса

В лабораторных условиях вирус  можно культивировать на лабораторных животных (мышатах, кроликах, хомячках, морских свинках и др.) при интрацеребральном методе заражения. Вирус репродуцируется в первичных и перевиваемых культурах клеток (почках сирийского хомячка, эмбрионах овец, телят, ВНК-21, клетках невриномы Гассерова узла крысы и др.). В первых пассажах вирус размножается медленно, не вызывая ЦПД. К вирусу бешенства после предварительной адаптации восприимчивы и куриные эмбрионы.

2.6.Клинические признаки

Продолжительность инкубационного периода зависит от места укуса, характера раны, количества и вирулентности попавшего в рану вируса, вида, возраста и резистентности покусанного животного. Инкубационный период длится от одной недели до года и даже дольше. Клиническое проявление болезни в основном одинаково у всех животных, но наиболее типично оно у собак, у которых можно наблюдать как буйное так и тихое (паралитическое) течение болезни. У крупного рогатого скота бешенство может протекать атипично (потеря аппетита, атония рубца, паралич глотки, слюнотечение).

2.7.Патологоанатомические изменения

Вскрывать подозрительных по заболеванию бешенством животных в полевых условиях запрещено. У мясоядных (в основном у собак) в желудке можно обнаружить инородные предметы.

2.8.Локализация вируса

Вирус бешенства обладает выраженной нейропробазией. Проникая центростремительно с периферии (место укуса) по нервным стволам в центральную нервную систему, в организме он распространяется центробежно по периферическим нервам и попадает в разные органы, включая слюнные железы.

В организме вирус локализуется главным образом в центральной нервной системе, а также в слюнных железах и слюне. Доказано нахождение вируса в некоторых внутренних органах. Из организма выделяется со слюной, через легкие, кишечник и с мочой.

Источник инфекции — больные  животные. Они передают вирус во время укуса. Возможно заражение при ослюнении поврежденной кожи. Плотоядные животные могут заражаться при поедании головного и спинного мозга погибших от бешенства животных. Доказана возможность заражения бешенством аэрогенным путем (в местах, где имеются летучие мыши). До 1960-х годов основным источником распространения бешенства были собаки и кошки, позднее лисицы, волки, корсаки и другие дикие животные.

3.Лабораторная диагностика

Диагноз на бешенство ставят на основании эпизоотологических, клинических данных и результатов лабораторных исследований, имеющих решающее значение.

При работе с больными животными и инфекционным материалом необходимо строго соблюдать меры личной безопасности: надевать резиновые перчатки, халаты с нарукавниками, резиновый или полиэтиленовый фартук, резиновые сапоги, защитные очки, защитную маску на лицо.

Для исследовании на бешенство направляют в лабораторию свежие трупы мелких животных целиком, и от крупных и средних животных — голову с двумя первыми шейными позвонками. Трупы мелких животных перед отправкой на исследование обрабатывают инсектицидами.

Патологический материал упаковывают в пластмассовые мешки, вкладывают в плотно закрывающиеся ящики с влагопоглощающей прокладкой, пропитанной дезинфектантом. Материал и сопроводительное письмо, в котором указывают отправителя и его адрес, вид животного, анамнестические данные и обоснование подозрении в заболевании животного бешенством, дату и подпись врача, отправляют с нарочным.

Лабораторная диагностика  включает: обнаружение вирусного антигена в РИФ и РДП, телец Бабеша—Негри и биопробу на белых мышатах.

3.1.Реакция иммунофлуоресценции (РИФ)

 

Для данной реакции биопромышленность выпускает флуоресцирующий антирабический у-глобулин (гамма-глобулин).

На обезжиренных предметных стеклах готовит тонкие отпечатки или мазки из различных отделов головного мозга левой и правой стороны (аммонов рог, кора полушарий, мозжечок и продолговатый мозг). Готовят не менее двух препаратов каждого отдела мозга. Можно также исследовать спинной мозг, подчелюстные слюнные железы. Для контроля делают препараты из мозга здорового животного (обычно белой мыши). 

Препараты высушивают на воздухе, фиксируют в охлажденном ацетоне (минус 15—20 °С) от 4 до 12 ч, высушивают на воздухе, наносят специфический  флуоресцирующий у-глобулин, помещают во влажную камеру при 37 °С на 25—30 мин. Затем тщательно промывают физиологическим раствором или фосфатным буфером с рН 7,4, споласкивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло и просматривают под люминесцентным микроскопом. В препаратах, содержащих антиген вируса бешенства, наблюдают разной величины и формы флуоресцирующие желто-зеленым цветом гранулы в нейронах, но чаще вне клеток. В контроле подобного свечения не должно быть, нервная ткань обычно светится тусклым сероватым или зеленоватым цветом. Интенсивность свечения оценивают в крестах. Отрицательным считают результат при отсутствии специфической флуоресценции.

Материал от животных, вакцинированных  против бешенства, нельзя исследовать в РИФ 3 мес после прививки, так как может быть флуоресценция антигена вакцинного вируса.

В РИФ не подлежат исследованию ткани, консервированные глицерином, формалином, спиртом и т. д., а также материал, имеющий признаки даже незначительного загнивания.

3.2.РДП (реакция диффузной преципитации) в агаровом геле

Метод основан на свойстве антител и антигенов диффундировать в агаровом геле и при встрече образовывать видимые визуально линии преципитации (комплекс антиген+ антитело). Применяют для обнаружения антигена в мозге животных, павших от уличного вируса бешенства, или при экспериментальной инфекции (биопроба).

Реакцию ставят на предметных стеклах, на которые наливают 2,5—3 мл расплавленного 1,5 %-ного раствора агара .

После застывания в агаре делают лунки по трафарету диаметром 4—5 мм, помещенному под предметное стекло с агаром. Агаровые столбики вынимают ученическим пером. Лунки в агаре заполняют компонентами по схеме.

От крупных животных исследуют  все отделы головного мозга (левой  и правой стороны), от средних (крысы, хомяки и др.) — какие-либо три отдела мозга, у мышей —весь мозг. С помощью пинцета из мозга готовят пастообразную массу, которую и помещают в соответствующие лунки.

Контроли с положительным и отрицательным антигенами ставят на отдельном стекле по тому же трафарету.

После заполнения лунок компонентами препараты помещают во влажную камеру и ставят в термостат при 37 °С на 6 ч, затем оставляют при комнатной температуре на 18 ч. Учет результатов ведут в течение 48 ч.

Реакцию считают положительной при появлении между лунками, содержащими суспензию мозга и антирабический у-глобулин, одной или двух-трех линий преципитации любой интенсивности.

Бактериальная контаминация и загнивание мозга не препятствуют использованию его для РДП. Материал, консервированный глицерином, формалином и другими средствами, для РДП непригоден.

 

 

3.3.Выявление телец Бабеша—Негри.

Рис.2. Тельце Бабеша – Негри.

На предметных стеклах  делают тонкие мазки или отпечатки  из всех отделов головного мозга (как для РИФ), не менее двух препаратов из каждого отдела мозга, и окрашивают по одному из методов (по Селлерсу, Муромцеву, Манну, Ленцу и т.д.).

Пример окраски по Селлерсу: на свежий, невысохший препарат наносят краситель , покрывая им весь препарат, выдерживают 10—30 с и смывают фосфатным буфером (рН 7,0—7,5), высушивают в вертикальном положении при комнатной температуре (в затемненном месте) и просматривают под микроскопом с масляной иммерсией.

Положительным результатом  считают наличие телец Бабеша— Негри — четко очерченных овальных или продолговатых гранулированных образований розово-красного цвета, расположенных в цитоплазме клеток или вне их.

Данный метод имеет  диагностическое значение только при обнаружении типичных специфических включений.

3.4.Биопроба

Она более эффективна по сравнению со всеми указанными выше методами. Ее ставят при получении отрицательных результатов предыдущими методами и в сомнительных случаях.

Для биопробы отбирают белых мышей массой 16—20 г. Нервную ткань из всех отделов головного мозга растирают в ступке со стерильным песком, добавляют физиологический раствор до получения 10%-ной суспензии, отстаивают 30—40 мин и используют надосадочную жидкость для заражения мышат. При подозрении на бактериальное загрязнение добавляют на 1 мл суспензии по 500 ЕД пенициллина и стрептомицина и выдерживают 30—40 мин при комнатной температуре.

На одну биопробу заражают 10 — 12 мышат: половину интрацеребрально по 0,03 мл, половину подкожно в область носика или в верхнюю губу по 0,1—0,2 мл.

Зараженных мышат помещают в стеклянные банки (лучше аквариумы) и наблюдают за ними в течение 30 дней, ведя ежедневную регистрацию. Гибель мышей в течение 48 ч считают неспецифической и не учитывают в оценке результатов. При наличии вируса бешенства в патологическом материале с 7—10-го дня после заражения у мышей наблюдают следующие симптомы: взъерошенность шерсти, своеобразную горбатость спины, нарушение координации движений, паралич задних, затем передних конечностей и гибель. У павших мышей головной мозг исследуют в РИФ, на обнаружение телец Бабеша—Негри и ставят РДП.

Биопробу на бешенство считают положительной, если в препаратах из мозга зараженных мышат обнаруживают тельца Бабеша— Негри или выявляют антиген методами РИФ или РДП. Отрицательный диагноз — отсутствие гибели мышат в течение 30 дней.

Рекомендуют для ранней диагностики  методом биопробы (особенно это важно, когда исследуемое животное покусало человека) использовать для заражения не 10—12, а 20—30 мышат, и с третьего дня после заражения ежедневно забивать по 1—2 мышонка для исследования их головного мозга в РИФ. Это позволяет (в п0ла в тельных случаях) сократить срок исследования на несколько дней. В лабораторной практике иногда ставят метод так называемой специфической биопробы. Сущность его в том, что мыши заболевают при заражении мозговой тканью больных бешенством  животных и не заболевают, если эту ткань предварительно обработать (10 мин при 37°С) антирабической сывороткой. 

Обычно в лаборатории  проводят исследование в следующей  последовательности: из головного мозга  делают мазки-отпечатки для РИФ и обнаружения телец Бабеша—Негри, ставят РДП, при получении отрицательных результатов делают биопробу.

При высококвалифицированном  выполнении РИФ получают 99—100 % совпадения с биопробой. Тельца Бабеша—Негри выявляют лишь в 65—85 % случаев бешенства, в РДП — от 45 до 70 %.

 

 

 

 

 

4.Специфическая профилактика и иммунитет

     Необходимо  вести  систематическую  борьбу  с  бродячими  собаками  и кошками.  Собак,  принадлежащих  частным  владельцам,  нужно своевременно регистрировать и  прививать  против  бешенства.  В  особо  неблагополучных местностях подвергают вакцинации и кошек.

     Собак или  кошек, покусавших людей  или  других  животных,  немедленно доставляют в ветеринарное учреждение для  осмотра  и  карантина,  бродячие животные  берутся  под  наблюдение.  Если  в  течение  10  дней   признаки заболевания не будут обнаружены, животных возвращают владельцам. Животных, имеющих признаки заболевания,  изолируют.  Покусанных  и  подозреваемых  в заражении бешенством малоценных собак и кошек  усыпляют,  а  ценных  собак содержат под ветеринарным надзором в течение 6  месяцев.  Собак,  повторно наносивших укусы животным или людям, изымают у владельцев. При работе  с больными бешенством  животными   необходимо   строго соблюдать правила личной безопасности:  пользоваться  защитными  очками  и перчатками, мыть руки с мылом и хорошо дезинфицировать их.

Из 47 собак экспериментально зараженных прививкой вируса уличного бешенства 8 выжили, а 39 погибли. Ни у одной из выживших не диагностировались антитела к бешенству в сыворотке и спинномозговой жидкости во время периода наблюдения — более двух лет. После этого эти 8 собак и 10 собак из контрольной группы были заражены большой дозой вируса уличного бешенства. 8 из 10 собак из контрольной группы погибли от бешенства, но ни одна собака из группы 8 ранее выживших бешенством не заразилась. Однако, в организме всех 8 ранее выживших собак в течение 5 суток после повторного заражения диагностировался высокий уровень антител, указывающий на иммунный вторичный ответ. Мелкие же грызуны погибают в течение трёх дней после заражения.

Профилактика бешенства  заключается в борьбе с бешенством среди животных: вакцинации (домашних, бездомных и диких животных), установлении карантина и т. д. Людям, укушенным  бешеными или неизвестными животными, местную обработку раны необходимо проводить немедленно или как  можно раньше после укуса или  повреждения; рану обильно промывают  водой с мылом (детергентом) и  обрабатывают 40-70 градусным спиртом  или настойкой йода, при наличии  показаний вводят антирабический иммуноглобулин вглубь раны и в мягкие ткани вокруг неё, после местной обработки  раны немедленно проводят специфическое  лечение, которое заключается в  лечебно-профилактической иммунизации  антирабической вакциной.

Сейчас для профилактики бешенства применяют инактивированные и живые вакцины. Условно вакцины можно разделить:

• на вакцины первого поколения, которые готовят из головного мозга животных, инфицированных фиксированным вирусом бешенства;
• вакцины второго поколения, которые готовят из штаммов вируса бешенства, адаптированных к культуре клеток;
• вакцины третьего поколения, которые получают с помощью генно-инженерных методов.

За рубежом разработали  и в некоторых странах успешно применяют рекомбинантную вакцину, которая содержит рекомбинантный вирус оспы, несущий ген основного гликопротеида оболочки вируса бешенства. В настоящее время начата разработка и показана возможность применения ДНК-вакцин для профилактики бешенства. В России и СНГ широко применяют инактивированную вакцину из штамма Щелково-51, которую готовят с использованием культуры клеток ВНК-21.

 

5.Заключение

Опасная болезнь известна человечеству более 4000 лет, известны доклады  испанских конкистадоров уже  в 1514 году. В июле 1885 г. Луи Пастер успешно разработал вакцину против бешенства.

Эффективность вакцинации напрямую связана со временем обращения после  укуса животного.

При подозрении на бешенство  животное необходимо  надежно  изолировать (закрыть в будке или отдельном помещении)  и  сообщить  о  случившемся специалистам  ветеринарной  службы.  Покусанные  или   обслюненные   таким животным лица должны немедленно обратиться в ближайшую поликлинику. Лечение не  производится,  больных  животных  усыпляют.  Высокоценных собак,  покусанных   больными   или   подозрительными   животными,   можно подвергнуть (не позже 7-8-го  дня!)  вынужденным  прививкам  гипериммунной сывороткой и антирабической вакциной в соответствии с наставлениями.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

6.Список литературы

1. Белоусова Р.В., Преображенская  Э.А., Третьякова И.В. Ветеринарная  вирусология / Под редакцией проф. Р.В. Белоусовой. – М.: КолосС, 2007. – 424с.

2. БелоусоваР.В., Троценко Н.И., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии. – 3-е изд., перераб. и доп. – М.: КолосС, 2006. – 248 с.

3. Alan C. Jackson, William H. Wunner – Бешенство. 2001- Academic Press.

4. Шувалова Е. П. «Инфекционные болезни». Москва: «Медицина», 2001.

5. ВОЗ - Бешенство. Архивировано из первоисточника 11 февраля 2013.