Способы консервации органов и тканей для приготовления музейных макропрепаратов

Введение

 

Сохранение органов  и тканей после вскрытия трупов животных предусматривает различные цели. Органы и ткани, имеющие патологические изменения, сохраняют для уточнения патологоанатомического диагноза, а также при производстве судебно-ветеринарной экспертизы как вещественное доказательство. Из органов и тканей, взятых при вскрытии трупов, готовят патологоанатомические препараты для учебных и научных целей.

Помещение или комната, где хранятся консервированные органы и ткани  после вскрытия, называется патологоанатомическим музеем. Такие музеи имеются при крупных патологоанатомических кафедрах и научно-исследовательских учреждениях. Для сохранения целого трупа,  его отдельных  частей  или органов предложено большое количество методов. Применение того или иного из них методов зависит от цели предполагаемого консервирования, технических возможностей и имеющихся в наличии материалов, оборудования, химикатов.

Кратковременное сохранение трупного материала, частей трупа или трупа  в целом можно достигнуть путем замораживания. Длительность  хранения  зависит от температуры, степени промораживания и размеров трупа. Нужно учесть, что при недостаточно низкой температуре глубокое промораживание трупа невозможно и внутренние органы трупа подвергаются аутолитическим процессам.

В теплое время года можно прибегнуть к сохранению трупа методом бальзамирования. Для этого в естественные полости  организма (грудную, брюшную, черепную) вводят 10%-ный водный раствор формалина, к которому для предупреждения быстрого  высыхания можно добавить 10 - 30% глицерина. К этому методу сохранения трупа прибегают для сохранения трупа до проведения вскрытия и других диагностических и научных исследований.

Сохранение органов и тканей, взятых от трупа, изготовление из них  учебных и выставочных препаратов, а также препаратов судебно ветеринарного и научного характера, выполняется чаще методом консервирования. Материал для приготовления препаратов следует брать как можно быстрее после гибели или убоя животного, так как чем дольше лежит труп, тем хуже сохраняется картина патологического процесса (особенно быстро изменяется цвет тканей), тем труднее восстановить естественный цвет тканей.

По способу изготовления патологоанатомические  препараты могут быть сухие и  влажные. Сухие препараты изготавливают путем высушивания подготовленных органов (мумификация). При влажном способе консервирование проводиться путем сохранения препаратов в фиксирующих жидкостях. Однако при любом способе изготовления препаратов следует, стремиться сохранить естественную окраску органов и тканей.

 

Изготовление  сухих препаратов

Сухие препараты лучше  изготавливать из органов или  частей тела, имеющие кожный покров, твердые ткани, кости, и мало мягких тканей (голова, конечности, и др.), во избежание большой деформации органа. Для этого, орган фиксируют через промежутки времени, достаточные для полного пропитывания тканей (чем больше величина фиксируемого органа, тем дольше происходит фиксация) последовательно в 3, 5, 7, 10 %-ных растворах формалина, постепенно добавляя в фиксирующий раствор концентрированный формалин, 10%-ный формалин можно заменить любой фиксирующей жидкостью №1 для приготовления мокрых макропрепаратов. Срок фиксации - до полного уплотнения органа. После фиксации орган устанавливают на подставку и высушивают в проветриваемом помещении до полного высыхания.

Таким образом, можно изготовить препарат из целого трупа животного (мумификация). Для этого извлекают внутренние органы из брюшной, грудной, ротовой  полостей, извлекают трахею и пищевод  через небольшой разрез на брюшной стенке по белой линии. Из глазниц извлекают глаза, и через дно глазницы, просверлив отверстие, извлекают головной мозг. Затем животному придают естественное положение, в котором оно будет находиться в дальнейшем. В этом положении проводят длительную фиксацию в 10%-ном формалине или в фиксирующей жидкости №1. После уплотнения препарат высушивают на подставке. При хранении в музее препарат нужно предохранять от моли.

Тонкостенные органы (чаще полостные: кишечник, желудок, пищевод и др.) также сохранять в сухом виде (метод Г. В. Шора). Вначале эти органы обрабатывают так же, как и при влажном способе хранения. Фиксируют, восстанавливают цвет, переносят в консервирующую жидкость (раствор III) и хранят не более двух недель. Затем подсушивают на воздухе во взвешенном состоянии (излишки влаги удаляют гигроскопической ватой или хлопчатобумажной материей). На поверхность сухого препарата наносят тонким слоем расплавленный агар и дают остыть. Из органического или обычного стекла делают камеру по размеру органа, края ее тщательно заделывaют менделеевской замазкой. Чтобы не конденсировалась влага, помещают в уголок камеры на ватке жженую магнезию.

Патологоанатомические препараты из органов и тканей делают в виде пластинок (пластинчатый метод по Талалаеву) и заключают в желатину или агар-агар. Используя этот метод, особенно хорошие препараты, получают из кожи, сальника, сосудов. Из консервирующей жидкости берут орган и вырезают пластинку толщиной 1- 1,5 см. Подсушивают на воздухе. Из стекла (органического или обычного) готовят коробочки высотой до 2 см с таким расчетом, чтобы в них помещалась вырезанная пластинка из органа. В эту коробочку (форму) наливают расплавленный желатин или агар-агар, сразу кладут пластинку из органа и плотно прижимают ее к стеклу дна коробочки. Остывая, агар-агар или желатин сжимаются, поэтому в камеру по мере их остывания доливают эти реактивы. Полное уплотнение среды происходит через 24-36 ч, что зависит от температуры и влажности окружающей среды. Для изготовления коробочек лучше всего пользоваться фотографическими пластинками (они имеют стандартные размеры различной величины и приготовлены из высококачественного стекла). Из них же вырезают и боковые пластики. Края и крышки склеивают менделеевской замазкой или техническим клеем.

Приготовление желатина. В 500 мл дистиллированной воды помещают 180 г желатина, дают ему набухать в течение 2-3 дней, затем нагревают до расплавления. К раствору последовательно добавляют 800 мл глицерина, 350 мл насыщенного при нагревании раствора уксуснокислого калия или натрия и расплавленный химически чистый карболовой кислоты из расчета 1:500. Кипятят в водяной бане и фильтруют через марлю, прослоенную гигроскопической ватой.

Приготовление агар-агара. К 500 мл дистиллированной воды добавляют 15 г мелко нарезанного агар-агара, дают набухать 2-3 дня и   нагревают до полного растворения.  К раствору добавляют 90 г 50%-ного водного раствора уксуснокислого калия или натрия, 200 мл глицерина и расплавленной химически чистой карболовой кислоты из расчета 1:500, фильтруют так же, как и желатин.

В анатомическом музее  Московской академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.А. Скрябина широко применяется способ сублимационной сушки промороженных органов  в зимний период. Для этого орган  фиксируют также как и при других методах сохранения препаратов. Препарат устанавливают на подставку, замораживают на морозе и помещают в темное, проветриваемое помещение с отрицательной температурой (например, чердак). В таком виде препарату дают высохнуть в течение зимнего периода. Благодаря этому методу можно подготавливать препараты из мягких тканей без излишней деформации и уменьшения объема.

 

 

 

 

 

 

 

 

Изготовление  влажных препаратов

В практических условиях наиболее распространенными являются влажные методы сохранения органов и отдельных тканей (частей) трупа животного в консервирующих жидкостях, как более надежные для сохранения естественной окраски.

Изготовление влажных  патологоанатомических препаратов слагается из ряда этапов:

- отбор материала и  подготовка его к фиксации;

- фиксация; восстановление  цвета;

- консервирование (пропитывание глицериновой смесью);

- монтирование препарата. 

Для фиксации, восстановления цвета и консервирования патологоанатомического материала предложено несколько  прописей растворов. Из них наибольшее практическое значение имеют жидкости Кайзерлинга, Мельникова-Разведёнкова и Пика.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Отбор материала  и подготовка его к фиксации

 

  При влажном способе изготовления патологоанатомических препаратов удаляют все части, не подлежащие демонстрации, и берут такие участки органов и тканей, которые содержат не только пораженные, но и здоровые ткани для сравнения.

Перед изготовлением  патологоанатомических препаратов вначале проводят их предварительную  обработку. Она заключается в том, чтобы удалить все ненужные для демонстрации того или иного процесса ткани. Для сохранения формы объекту придают то положение, в котором он будет демонстрироваться.

Различные загрязнения, обрывки тканей, сгустки крови удаляют до фиксации, поскольку после нее придать соответствующую форму препарату или снять загрязнение и кровь практичecки невозможно, не нарушая его внешнего вида. Иногда препарат на 4-8 часов помещают в фиксирующую жидкость, а затем проводят его соответствующую обработку: снимают загрязнения, срезают обрывки тканей, удаляют жир и др.

При влажном методе изготовлении толщина препарата не должна превышать 3-4 см, так как фиксирующая жидкость медленно проникает в глубь тканей. В случаях, когда препараты по какой-либо причине нельзя сделать требуемой толщины, то до погружения их в жидкость, острым ножом с противоположной для показа стороны делают надрезы, в которые кладут гигроскопическую вату, смоченную фиксирующей жидкостью. Фиксирующую жидкость в толщу препарата удобнее вводить шприцем, прокалывая его во многих местах.

При фиксации целиком органа или  трупа мелкого животного, фиксирующую  жидкость вводят в крупные кровеносные сосуды или другие естественные каналы под давлением. Кроме того, удаляют внутренние органы через разрез брюшной стенки, затем ее аккуратно зашивают, или кишечник из трупа можно удалять также через тазовую полость и прямую кишку.

Перед фиксацией тканей, обладающих способностью быстро сморщиваться, растягивают  на каком-либо твердом предмете (на тонкой доске, картоне или пробковой пластинке) и вместе с ним помещают в фиксирующую жидкость.

Отрезки кишечника фиксируют слизистой  оболочкой вверх, также укрепив на кусочке картона или пробковой пластинке. В тех случаях, когда нужно сохранить целостность и толщину полостного органа, фиксирующую жидкость наливают в его полость, а затем заполняют гигроскопической ватой или выворачивают слизистой оболочкой наружу, а полость заполняют гигроскопической ватой или другим гигроскопическим материалом, придав ему соответствующий внешний вид.

Плотные трубчатые органы (трахея, бронхи, гортань) фиксируют  в раскрытом состоянии. В этих целях в качестве распорки в местах их разреза или разъединения вставляют  стеклянные трубочки или деревянные палочки. Эти распорки вставляют таким образом, чтобы они не заслоняли измененных участков.

Под митральный, трехстворчатый и полулунные клапаны сердца, а  также в аорту и легочной артерии  кладут кусочки гигроскопической ваты, смоченной фиксирующей жидкостью.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Фиксирование  препарата

При фиксации патологоанатомических  препаратов предложено множество фиксирующих  жидкостей. Из них наиболее лучшими считаются следующие жидкости:

Формалин впервые в патологоанатомической практике был применен в 1893 году и с тех пор благодаря доступности, дешевизне и способности надежно предохранять органы и ткани от гниения стал одним из наиболее употребительных фиксаторов.

Формалин представляет собой 40%-ный водный раствор формальдегида (СН₂О), который обладает сильным бактерицидным действием. Формалин легко растворяется в воде и представляет собой  бесцветную или слегка желтоватую жидкость с резким запахом. Растворы формалина легко испаряются, и его пары вызывают раздражение слизистых оболочек, что вызывает слезотечение, кашель, чихание (опасен для верхних дыхательных путей).

При работе с патологическим материалом, фиксированным в формалине, без перчаток происходит дубление и сморщивание кожи рук. Действие формалина на ткани зависит от концентрации его и продолжительности фиксации. Если растворы концентрированные, быстро образуется поверхностный слой коагулированного белка и фиксация замедляется, слабые растворы легче проникают в ткань, но действуют медленнее.

Хранение формалина  на свету, а также в холодном помещении приводит к полимеризации его, образуется параформальдегид (параформ), который выпадает на дно сосуда (бутыли) в виде плотного белого осадка или хлопьев, которые плавают в жидкости и придают ей цвет молока.

Для растворения осадка (или восстановления) формалин нагревают до 80-85°С со щелочами. На 100 мл такого формалина (с осадком) берут 130 мл воды и 20 мл нормального раствора едкого кали (56 г КОН на 1 л воды). В результате формалин становится прозрачным. Иногда для просветления формалина бывает достаточно лишь подогреть его. Подогревают формалин в вытяжном шкафу или на открытом воздухе.

Лучшими фиксирующими свойствами обладает 10%-ный раствор нейтрального формалина.

Жидкость Кайзерлинга 

Формалин                                              800,0

Азотнокислый калий                             45,0

Уксуснокислый калий                           85,0

 Вода                                                    4000,0

 

    Жидкость Мельникова-Разведенкова

 

Формалин                                              100,0

Хлористый калий                                     5,0

Уксуснокислый калий (натрий)            30,0

Вода                                                     1000,0

 

  Жидкость  Пика

 

Формалин                                              200,0

Карловарская соль (искусственная)   200,0

Вода                                                      4000,0

 

Подготовленный препарат фиксируют на дно стеклянной посуды, где кладут слой гигроскопической ваты, смоченной фиксирующей жидкостью. На нее помещают препарат, придают ему соответствующую форму и заливают одной из жидкостью, указанной выше.

В случаях, если одновременно фиксируют несколько препаратов, то каждый из них аккуратно прокладывают ватой смоченной фиксирующей  жидкостью. Это делают для того, чтобы препараты не деформировались. Объем фиксирующей жидкости должен в несколько раз превышать объем фиксируемого материала. Продолжительность фиксации зависит от размеров органа или ткани и определяется опытным путем.

Стенки полостных органов (желудок, кишечник, мочевой пузырь и др.) фиксируют 1-2 сут, паренхиматозные органы (селезенка, почки, сердце, легкие и др.) – 1-2 нед и дольше. Показателем того, что материал профиксировался является его уплотнение, равномернoe окрашивание с поверхности и на разрезе в грязно-серый или буроватый цвет. Передерживать препараты в фиксирующей жидкости не рекомендуется, так как формалин разрушает гемоглобин и способность органа восстанавливать eстeственную окраску утрачивается.

 

 

 

 

 

 

 

 

Восстановление  цвета препарата

Впервые в 1895 году Н.Ф. Мельниковым-Разведенковым было установлено, что метоглобулин, образующий при фиксации препарата и придающий органу или ткани грязно-серый цвет, переводится спиртом в нейтральный гематин, восстанавливающий цвет естественной окраски органа или ткани.

  В целях восстановления цвета препарата, профиксированный материал переносят в этиловый спирт концентрацией не ниже 80-90% (спирт сырец непригоден). Небольшие органы или ткани или кусочки крупных органов полностью погружают в спирт. Чтобы не расходовать много спирта крупные органы обкладывают ватой, обильно смоченной спиртом. Посуду, в которой восстанавливают препарат, плотно закрывают.

В практических случаях  иногда естественный цвет органа или  ткани восстанавливается очень  быстро, в течение нескольких минут. Однако, чтобы спирт проник глубже в ткани, препарат выдерживают в спирте не менее 12 ч. В целях экономии можно вначале погрузить препарат в спирт, уже бывший в употреблении, а затем на 1-2 ч в свежий. Если препарат достаточно полно восстановил естественный цвет, процесс нужно приостановить. При передержке в спирте препарат обесцвечивается.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Консервирование препарата

Консервирование – это пропитывание препаратов глицериновой смесью. После восстановления цвета органа или ткани его переносят в консервирующий раствор для длительного хранения.

Для консервирования патологоанатомического материала предложено достаточно много  прописей растворов. Из них наибольшее практическое значение имеют следующие  смеси растворов:

 

По Кайзерлингу

Глицерин                                         300,0

          Уксуснокислый калий                   200,0

Вода                                                 900,0

 

По Мельникову-Разведенкову

Глицерин                                        600,0

          Уксуснокислый калий (натрий)   400,0

Вода                                               1000,0

 

По Пику

Глицерин                                        540,0

          Уксуснокислый калий (натрий)   400,0

Вода                                               1000,0

 

Перед консервацией препарат опускают в стеклянную банку со смесью и, чтобы он не всплывал, покрывают  ватой или тканью. Через 2-3 нед  препарат опускается на дно. В дальнейшем препараты хранят в этих же смесях.

 При длительном хранении препаратов глицериновая смесь мутнеет в результате перехода красящих веществ из ткани в глицерин и может выпадать осадок. Причинами этого могут быть плохая первичная фиксация, несоблюдение сроков фиксации, объемных пропорций, содержание в препарате повышенного количества пигмента, неправильное хранение (перепад температур) и др. В таких случаях препарат заделывают заново.

 Для удаления осадков  и пигмента его промывают в воде, затем на 30-60 мин помещают в жидкость следующего состава: 1000 мл воды, 30 мл концентрированной химически чистой соляной кислоты и 10 мл азотной кислоты. Затем столько же времени промывают в воде, выдерживают в 0,5%-ном растворе хлорамина, переносят в 2%-ный раствор хлорной извести, опять промывают водой (желательно проточной) и заливают свежей смесью глицерина.

 

 

Заключение  препарата в стеклянную банку

Посуда, предназначенная  для изготовления и хранения музейных экспонатов, должна быть прозрачной, не искажать цвет и форму препарата  и герметически закрываться крышкой. Для хранения влажных патологоанатомических препаратов чаще используются прямоугольные стеклянные банки. Можно также употреблять и цилиндрические сосуды, редко – банки домашнего обихода (консервная посуда).

Посуду для хранения препаратов готовят заранее. Банки тщательно моют  водой с мылом при помощи щетки. Заранее подбирают к ним и также тщательно моют стеклянные крышки. В практических условиях их вырезают из стекла чуть больше периметра отверстия банки.

Перед приклеиванием  крышки края банки обезжиривают спиртом или авиационным бензином и обмазывают менделеевской замазкой. При этом лучше окунуть края банки в расплавленную замазку. Затем в банку наливают немного глицериновой смеси (раствор для консервирования) и опускают смонтированный препарат.

Стеклянную пластинку обычно вырезают по ширине банки, а препарат к ней прикрепляют белыми нитками вплотную. После этого заливают препарат консервирующей смесью, не доводя до краев на 3-4 см. Туда же опускают кусок ватмана или другой плотной белой бумаги, на которой тушью или графитным карандашом написан код препарата. В книге записей под этим номером-шифром обозначают все данные о препарате: вид животного, когда и откуда он поступил, чем болело и др.

 Затем нагревают крышку на пламени спиртовой или газовой горелки  и кладут ее на ребра банки, на которой предварительно была нанесена менделеевская замазка. Последняя плавится, и крышка плотно прилегает к банке. Вместо нагревания крышки на нее можно поставить горячий тяжелый предмет (например, утюг). Когда крышка остынет и замазка затвердеет, края крышки еще раз обмазывают менделеевской замазкой и покрывают черной эмалью или черным лаком. В верхнем углу банки обычно наклеивают этикетку с указанием органа и патологоанатомического процесса.

В состав менделеевской  замазки входят:

- пчелиный воск 125 г 

- канифоль 500 г 

- мумия просушенная  (или прокаленная охра) 200 г 

- льняное (подсолнечное) масло 5 мл 

Менделеевскую замазку  готовят следующим образом. Сначала  в водяной бане расплавляют пчелиный воск, затем добавляют канифоль, массу перемешивают, добавляют мумию (охру), размешивают и добавляют масло. Смесь варят до прекращения пенообразования (примерно 2 ч).

Музейная посуда обычно продается в конторах Зооветснаб или  зоомагазинах. Если специальной  посуды нет, то ее можно приготовить из органического стекла. Техника изготовления описана в соответствующих руководствах.

СОДЕРЖНИЕ

1. Введение

2. Изготовление сухих препаратов

3. Изготовление влажных препаратов

4. Отбор материала и подготовка его к фиксации

5. Фиксирование препарата

6. Восстановление цвета препарата

7. Консервирование препарата

8. Заключение препарата в стеклянную банку

9. Список используемой  литературы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Список используемой литературы

1. Д.Г. Латыпов, М.Г. Бехтер, Л.А. Гайсина Д.Г «Патологическое вскрытие сельскохозыйственных животных»
2. Интернет ресурсы