Бруцеллез сельскохозяйственных животных

 

СОДЕРЖАНИЕ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ  ………………………………………………..………………….5 ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ…………………………..……………..........  ВВЕДЕНИЕ ………………………………………………………………………… II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ……………………………………….….…………..

2.1. Эпизоотология бруцеллеза .……………………...…………………………

2.2. Диагностика бруцеллеза …………………………………………………...

2.3. Аллергический метод ………………………………………………………

2.4. Серологический метод (РА) ………………………..…………..………….

2.5. Пластинчатая реакция агглютинации (РБП) …………………….………..

2.6. Химиотерапия ……..……………………………………………..…………

2.7. Мероприятия против бруцеллеза крупного рогатого скота……..……….

III. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ХОЗЯЙСТВА

IV. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ….………………………..…

V. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.…………………..…..

5.1. Анализ эпизоотической ситуации по бруцеллезу крупного рогатого скота в КХ «Нур» Бурлинского района...……………………..…………………………

5.2. Аллергическая диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота………

5.3.  Результаты изучения аллергической реакции при бруцеллезе крупного рогатого скота ………………………………………………………………….….

5.4. Реакция агглютинации …………………………………………..…………

5.4.1. Разработка антигена для РА …………………………………..….………

5.4.2. Испытание разработанных средств диагностики и профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией по бруцеллезу крупного рогатого скота…………………………..…

5.5. Мероприятия по профилактике и ликвидации бруцеллеза крупного

рогатого скота ……………………………………………………………………..

5.6. Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий по бруцеллезу крупного рогатого скота………………………..……………....

VI. ЗАКЛЮЧЕНИЕ ……………………………………………………………

VII. ВЫВОДЫ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ…………………………………..…

VIII СПИСОК  ИСПОЛЬЗОВАННЫХ  ИСТОЧНИКОВ…………………

ПРИЛОЖЕНИЕ

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

В настоящей дипломной работе применяют следующие термины с соответствующими определениями:

Антиген – высокомолекулярное соединение, которое при парентеральном введении в организм вызывает иммунологическую реакцию, сопровождавшуюся образованием специфических антител.

Аллерген – высокомолекулярное соединение, которое при подкожном введении в организм вызывает аллергическую рекцию.

Аггллютинация– склеивание в комочки и выпадение в осадок микробов, форменных элементов крови и других клеток. Различают неспецифическую (химическую) и специфическую агглютинацию (иммуноагглютинацию).

Антитела – специфические гамма-глобулины, которые вырабатываются иммунокомпетентными клетками лимфоидной ткани в ответ на введение в организм антигена.

Диагностика – мероприятие, направленное на определение иммунологического статуса организма по данному инфекционному заболеванию.

Доза – количество лекарственного вещества, назначенного животному.

Иммунология – наука, изучающая иммунитет. Как самостоятельная наука выделилась из микробиологии.

Мероприятия профилактические – система организационно -хозяйственных и ветеринарно-санитарных мероприятий, направленных на предупреждение заноса источника или возбудителя инфекции и распространение инфекционных болезней животных в хозяйстве.

Мониторинг эпизоотической ситуации – система мероприятий, направленная на диагностику, оценку, прогноз развития инфекционного процесса, борьбу с ним, его предупреждение.

Профилактика – система мероприятий, направленная на предупреждение развития инфекции.

Резистентность – устойчивость организма к действию физических, химических и биологических агентов, вызывающих патологическое состояние.

Серологические методы диагностики – диагностические методы, основанные на использовании свойств антител специфически связывать соответствующие антигены.

Аллергические методы диагностики – диагностические методы, основанные на выявлении повышенной чувствительности тканей организма к специфическим аллергенам. На введение аллергена инфицированный организм отвечает аллергической реакцией, которая протекает как местное явление (гиперемия, отек, болезненность) и как общая реакция (повышение температуры тела, угнетенное состояние, учащение дыхания, нарушение сердечной деятельности).

Патогенность – способность микроорганизмов вызывать заболевания, которые определяются совокупным действием различных свойств или факторов патогенности возбудителя, обуславливающих развитие в организме хозяина патологических изменений. Недавно предложено рассматривать патогенность как функцию адаптации микроба к организму хозяина в основе которой лежит перестройка метаболизма возбудителя, адекватная новым условиям его существования.

Вынужденный убой – убой животных больных, подозрительных в заболевании или подозреваемых в заражении, которых осуществляется как ветеринарно-санитарная мера, преследующая недопущение падежа животных, пресечение дальнейшего распространения заболевания или проводимая для уточнения диагноза.

Вирулентность – мера патогенных свойств данного штамма возбудителя  в организме хозяина в конкретных условиях инфекций.

Реактогенность – свойство некоторых биологических препаратов вызывать иногда повышеннные (чрезмерные) местные и общие реакции у привитых животных.

Фагоцитоз – общебиологическое неспецифическое явление, которое заключается в поглощении фагоцитирующими клетками микроорганизмов, комплексов антиген-антитело, чужеродных или мутировавших клеток, вирусов и др.

Иммуномодуляторы – лекарственные препараты, восстанавливающие в терапевтических дозах функции иммунной системы, т.е. могут целенаправленно повышать ее деятельность или сдерживать.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

МСХ РК – Министерство сельского хозяйства Республики Казахстан;

НИВС - Научно-исследовательская ветеринарная станция;

КазНИВИ – Казахский научно – исследовательский ветеринарный институт;

ГНИИСК– Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля

РВЛ– Республиканская ветеринарная лаборатория;

ПХВ «РВЛ» – Республиканская государственное казенное предприятие  «Республиканская ветеринарная лаборатория»

МЕ – международная единица;

РА – реакция агглютинации;

РСК – реакция связывания комплемента;

РСДК – реакция длительного связывания комплемента;

РБП – розбенгал проба;

КР – кольцевая реакция с молоком;

ПЦР – полимеразная цепная реакция;

КРС – крупный рогатый скот;

pH – показатель концентрации ионов водорода в растворе;

млрд. – миллиард;

млн. – миллион;

тыс. – тысяча;

см³ - кубический сантиметр;

IgM, IgG – различные виды иммуноглобулинов;

КХ – крестьянское хозяйство;

МПА – мясопептонный печеночный агар

МППГГА – мясопептонный  печеночный глюкозоглицериновый агар

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Бруцеллез сельскохозяйственных животных все еще имеет значительное распространение в хозяйствующих субъектах Казахстана и представляет собой одну из наиболее сложных проблем ветеринарной науки и практики, а также медицины, поскольку им болеют и люди.

Несмотря на определенные успехи в борьбе с этим зооантропонозом, до сих пор полное оздоровление животноводческих хозяйств республики от бруцеллеза не произошло. Это связано с тем, что в настоящее время животноводство в республике претерпевает серьезные изменения, связанные с изменением технологии ведения животноводства, в основном характеризующееся совместным содержанием различных видов животных (крупный рогатый скот, верблюды, мелкий рогатый скот и т. д.) в одном фермерском хозяйстве.

Сохранение благополучия и ликвидация бруцеллезной инфекции в таких хозяйствах весьма затруднительно по причине различных сроков проведения диагностических исследований и профилактических мероприятий, регламентированных инструктивным положением.

В республике регламентированы методы сохранения ветеринарного благополучия и оздоровления, неблагополучных по бруцеллезу животных хозяйств, в основу которого  кроме организационно-хозяйственных, санитарных входят специальные ветеринарные мероприятия, связанные с единственным методом при обоих вышеописанных случаях, методом диагностических исследований.

Известно, что метод диагностических исследований оправдывает себя при сохранении благополучия и оздоровлении неблагополучных по бруцеллезу хозяйств, где наблюдается единичные выделения реагирующих животных. Хозяйства со значительным выделением реагирующих на бруцеллез животных, методом систематических диагностических исследований, оздоровить от названной болезни весьма сложно. Кроме того, в биосфере постоянно происходит кумуляция эпизоотического изолята в результате чего может произойти реверсия его, трансформация, длительная персистенция, индукция посредством фагов или антибактериальных веществ, последствием которого может являться повышение или понижение патогенных, генетических свойств, нарушится биоценоз.

Вышесказанные недостатки разрешимы при умении регулировать, влиять на бруцеллы. Такими рычагами управления могут быть оптимальные методы применения перспективных средств диагностики, профилактических препаратов и мероприятий по борьбе с названной инфекцией. При этом сами по себе отпадают проблемы носительства микроорганизмов, влияние бруцеллезной инфекции на восприимчивых животных и человека.

В связи с этим, весьма важно продолжать поиски  приемлемых для практического применения средств диагностики, профилактических препаратов, методов их использования и мероприятий, оптимальных для хозяйств имеющих различную эпизоотическую ситуацию.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований является разработка и  совершенствование диагностических и профилактических препаратов и на основе их мероприятий по борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота.

В связи с этим на разрешение были поставлены следующие задачи:

1. Эпизоотическая ситуация по бруцеллезу крупного рогатого скота в КХ «Нур» Бурлинского района за 2011-2013 годы.

2. Усовершенствование и разработка препарата для диагностики и профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота.

3. Усовершенствование мероприятий против бруцеллеза крупного рогатого скота.

4. Экономические потери в КХ «Нур» Бурлинского района и эпизоотическая ситуациия по бруцеллезу крупного рогатого скота.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Эпизоотология бруцеллеза

Бруцеллез – хроническое заразное заболевание человека и животных (домашних, сельскохозяйственных и диких) вызываемое микробами бруцеллами вида, melitensis, abortus suis, ovis, canis, neotomae, которые подразделяются на биовары Животные чаще заражаются алиментарно с кормом, водой. Овцы, свиньи – при случке; основное проявление у животных – выкидыши; люди заражаются при уходе за больными животными и при употреблении в пищу зараженных мясо – молочных продуктов; проявляется волнообразной лихорадкой, увеличением лимфатических узлов, печени, селезенки, поражением центральной нервной, сердечно – сосудистой, зрительной, слуховой, желудочно – кишечной, моче – половой систем, поражением суставов и др.

В 1876г. было установлено, что болезнь имеет заразное начало. Это установил Франк, который в качестве инфицирующего агента использовал патологический материал от абортировавших коров и вводил его в родовые пути здоровых животных, в результате чего у них наблюдалось клиническое проявление болезни. Это же подтвердили Ленерт в 1978 году и Броулер в 1980 году. Поэтому болезнь назвали инфекционный аборт.

Бруцеллез назван согласно по имени Брюса, который 1887г, выделил возбудителя  болезни на острове Мальта из селезенки солдата, умершего от «мальтийской лихорадки». Микроб назван «мальтийским микрококком» (Micrococcus melitensis).

Спустя 10 лет после того как возбудитель бруцеллеза Брюса, была выделена бактерия из плода абортировавшей коровы Бангом, а в 1914 году из материала абортировавшей свиньи выделил палочку весьма похожую на «палочку Банга» Траум.

После открытия Брюса Заммит установил, что источником заболевания людей мальтийской лихорадкой являются козы, а экспериментально эта версия была подтверждена путем выпаивания сырого молока коз людям. Таким образом, была установлена связь заболевания людей мальтийской лихорадкой с заболеванием животных в частности коз.

Была установлена идентичность микроорганизмов, выделенных вышеупомянутыми учеными [1 -3].

Установлено, что заболевание животных вызываемые бруцеллами в зависимости от вида в некоторой степени приспособились к определенному виду животных: крупному рогатому скоту, овцам, свиньям и др. Однако каждый из них, обладая индивидуальными свойствами, не являются облигатными паразитами только для того вида животных, к которому он приспособился, но может в любой момент мигрировать на другие виды животных [4, 5].

При этом наблюдается прямая зависимость от заражающей дозы. Человек может заболеть каждым из трех видов, наиболее опасным для него является козье – овечий тип бруцеллеза. Нельзя умолять эпидемиологическое значение бруцелл вида абортус, т.к. весьма часто регистрируется массовое заражение людей им.

Бруцеллезом заражаются и болеют почти все виды животных (домашних, сельскохозяйственных, диких), а носителями могут быть клещи, мухи, комары, также птицы, грызуны и др. [6- 9].

Внутриродовая классификация бруцелл обсуждается с момента открытия возбудителя, и за последние годы претерпела значительные изменения. Очевидно, определенные коррективы в нее будут внесены и в дальнейшем. Так как для создания унифицированной номенклатуры микроба был организован специальный Подкомитет по таксономии бруцелл. В 1970г. в Мехико Комитет по номенклатуре бактерий принял новую классификацию. Для дифференциации видов и биотипов бруцелл используются различные тесты (табл.1).

Бруцеллы по своей морфологии отличаются выраженным полиморфизмом. Они могут быть шаровидной, овальной и палочковидной формы. B. melitensis имеют преимущественно кокковую форму, B. suis и  B. abortus – палочковидную с закругленными концами размером от 0,3 до 0,6 мкм в ширину и от 0,5 до 2,5 мкм в длину. Бруцеллы неподвижны, спор и капсул не образуют, в препарате, как правило, расположены беспорядочно, но могут быть в виде цепочек или диплококков. Клетки бруцелл грамотрицательны, хорошо красятся всеми анилиновыми красками. На питательных средах рост бруцелл, как правило, регистрируется только через 1-3 недели. Комитет экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ¹ рекомендует в качестве питательных сред сывороточно – декстрозный агар; агар из картофельного настоя и сыворотка 5%; кровяной агар (5% овечьей крови в среде). Для выращивания бруцелл используются мясопептонные и печеночные среды, сухая среда «Д», содержащая рыбный  и дрожжевой гидролизат. Можно культивировать бруцеллы и на курином эмбрионе. На агаре колонии бруцелл бесцветны, с перламутровым оттенком. Рост в бульоне сопровождается помутнением последнего.

Нормальное строение бруцелл характеризуются S-формой. Помимо этих типичных вариантов, под воздействием неблагоприятных физических, химических, иммунобиологических факторов бруцеллы образуют измененные варианты –R, М (мукоидная) и МБВ (минус вариант по поверхностному антигену бруцелл) формы. К наиболее измененному варианту бруцелл относятся L- формы, обладающие особенностями антигенной структуры, метаболизма и принципиально отличаются от других форм, в том числе от дегенерирующих форм МБФ - форма – последняя стадия диссоциации бруцелл, когда еще сохраняется стенка микробной клетки. Степень диссоциации микробов определяется утратой способности, к агглютинации, т. е. утратой поверхностно - оболоченного  S- антигена.

В природе в естественных условиях в основном  встречаются бруцеллы в S- форме.

 

 

                                                                                                                                                                                              Таблица 1

Дифференциация видов и биотипов бактерий рода  Brucella.

	Биотип		Лизис фагум		Потреб. в СО 2	Продукция	Рост на средах с красками*						Агглютинация			Основной хозяин
			Раб. разведен фага	103 от раб. разв фага									Моноспеци- фич. Сыворот- ками**		Антисы- ворот. шероховат. форм.
							Основ. фуксин			Тионин
							II	III		I	II	III	А	М
1	2		3	4	5	6	7	8		9	10	11	12	13	14	15
Br. melitensis	1		-	-	-	-	+	+		-	+	+	-	+	-	Овцы, козы
	2		-	-	-	-	+	+		-	+	+	+	-	-	» »
	3		-	-	-	-	+	+		-	+	+	+	+	-	» »
Br. abortus	1		+	+	++	+	+	+		-	-	-	+	-	-	КРС
		2	+	+	+	+	-	-	-		-	-	+	-	-
		3	+	+	++	+	+	+	+		+	+	+	-	-	То же

 

Продолжение таблицы 1

1	2	3	4	5		6	7	8		9	10		11	12	13	14	15
	4	+	+	++		+	+	+		-	-		-	-	+	-	»
	5	+	+	-		-	+	+		-	+		+	-	+	-	»
	6	+	+	-		++	+	+		-	+		+	+	-	-	»
	7	+	+	-		++	+	+		-	+		+	+	+	-	»
	8	+	+	+		-	+	+		-	+		+	-	+	-	»
	9	+	+	++		+	+	+		-	+		+	-	+	-	»
Br. suis	1	-	+	-		+	-	-		+	+		+	+	-	-	Свиньи
	2	-	+	-		-	-	-		-	+		+	+	-	-	Свиньи, зайцы
	3	-	+	-		-	+	+		+	+		+	+	-	-	Свиньи
	4	-	+	-		-	+	+		+	+		+	+	+	-	Северные олени
Br. neotomae	-	-	+	-	+		-		-	-		-	+	+	-	-	Пустынная кустарниковая крыса
Br. ovis	-	-	-	+	-		+		+	+		+	+	-	-	+	Овцы
Br. canis	-	-	-	-	-		-		-	+		+	+	-	-	+	Собаки

 

 

• Разведения красок: I – 1:25 000,  II – 1: 50 000, III – 1: 100 000.

** А-abortus, М – melitensis.

 

 

 

Длительная персистенция L- форм бруцелл, способность их к реверсии определяют длительное течение болезни, возможность рецидивов, а заражение L- формами определяет формирование первично-латентной формы L-бруцеллезного инфекционного процесса. Действительно, Т. А. Макарова (1975) обнаружила  L- формы бруцелл через 19 лет после начала болезни. Однако многие стороны проблемы  L- форм бруцелл требуют дальнейшего изучения.

В отношении антигенной структуры бруцелл единого мнения пока нет. G. Wilson и   A. Miles (1932) первыми установили, что имеются два поверхностно-оболоченных антигена: антиген А (B. abortus) и антиген М (B. melitensis). В дальнейшем было установлено, что B. melitensis больше содержит антиген М (отношение антигенов М к А равно 20:1), а B. abortus больше содержат антиген А (соотношение М:А равно 1:20). По содержанию поверхностно-оболоченных антигенов  B. suis занимают промежуточное положение. Помимо комплексного поверхностно-оболоченного антигена, бруцеллы имеют общий j-антиген.

Наряду с поверхностными антигенами у всех штаммов зарегистрированных четыре безусловно патогенных для человека бруцелл (B. melitensis,   B. abortus, B. suis,  В. Ovis) имеется глубинный О - антиген бруцелл. В чистом виде О-антиген получить можно, лишь иммунизируя животных штаммами бруцелл, утративших поверхностно-оболочечный комплексный антиген, состоящий из М- и А- антигена. П. А. Триленко (1976) обозначает этот комплексный антиген объединенным названием S. К утратившим комплексный S-антиген относятся бруцеллы в МБФ-форме. Так как применяемые серологические реакции построены на выявлении  поверхностно-оболочечного S-антигена, то заражение бруцеллами, относящимися к МБФ - форме, не позволяет выявить противобруцеллезные антитела с помощью РА, РСК и РПГА.

Однако вопрос об антигенной структуре бруцелл остается открытым и по настоящий день. Исследуя методом преципитации в геле экстракты типичных штаммов бруцелл, Н.Г. Шин (1964), J. Parnas (1963) выявили 6 линий преципитации. R. Diaz A. и Ghordi (1966) методом иммуноэлектрофореза выявили 24 антигеных компонента. Но серодиагностическое значение авторы придают только шести компонентам.  R. Diaz и соавт. (1968) методом иммуноэлектрофореза выявили наличие у B. melitensis липополисахаридобелковых комплексов. По мнению исследователей, эти комплексы являются специфическими поверхностными антигенами, типичными для S-форм бруцелл.

В силу чрезвычайной пластичности бруцеллы под воздействием неблагоприятных физических, химических факторов, антибиотиков, бактериофагов могут менять свои морфологические, культуральные, тинкториальные свойства, антигенную структуру, вирулентность. Возникновение неспособных к агглютинации форм является наиболее ярким примером изменчивости бруцелл.

Вирулентность и патогенность бруцелл определяются их видовой принадлежностью. Из всех видов бруцелл основную роль в заражении людей играют B. melitensis,  B. abortus, B. suis.

Бруцеллы довольно устойчивы и жизнеспособны во в внешней среде. В жидких культурах при температуре 60°С они гибнут через 30мин, 80 - 90°С – через 5 минут, при кипячении – моментально. В сухой среде температура 90 - 95°С убивает бруцеллы через час.

Бруцеллы чувствительны к тетрациклину (0,5-2 мкг/мл), левомицетину (1-10 мкг/мл), стрептомицину (1-4 мкг/мл), эритромицину (5-10 мкг/мл).

В водопроводной воде концентрация 100 бруцелл в 1мл сохраняется до 76 дней, в сыром молоке они живут до 40 дней, в брынзе, приготовленной из сырого овечьего молока, - до 60 дней, в масле, в сливках, простокваше -  в течение всего периода их пищевой ценности. В сыром мясе больных животных бруцеллы сохраняются до 3 месяцев, в засоленном – до 30 дней, в шерсти – до 3-4 мес. Особую опасность представляют каракулевые смушки, так как их часто снимают с мертворожденных и абортированных плодов.

Бруцеллы очень чувствительны ко всем дезинфицирующим средствам. В условиях эксперимента 0,2 – 1% раствор хлорной извести, 0,5% лизола, 0,2% формалина, 0,1% хлорамина, 2% карболовая кислота и 1% раствор креолина убивают бруцеллы за несколько минут. Однако в естественных условиях эти сроки удлиняются. В почве бруцеллы гибнут при воздействии 5% хлорной извести в течение 50 мин, свежегашеной извести – 6ч [цит.10].

В случае выявления бруцеллеза в хозяйстве можно наблюдать активное распространение его в стаде, но распространение его трудно поддается расшифровке, т.к. он может протекать в виде бурных клинических проявлений (аборты) и совершенно теометрально противоположном направлении (скрытно, незаметно, без особых клинических проявлений, продолжается годами [11].

Бруцеллез как антропоозоноз является наиболее значимой социально-экономической проблемой в нашей республике.

По уровню заболеваемости бруцеллезом людей и животных  Казахстан на протяжении многих лет занимает  первое место среди стран  бывшего союза и СНГ.

Нозоареалы бруцеллеза по своему состоянию  могут быть  неодинаковыми, что обусловлены  в хозяйственно – экономическими, природно-географическими условиями и бытовыми условиями населения и уровнем проводимых специальных ветеринарных мероприятий.

Поэтому деятельность ветеринарной службы должна быть направлена  на повышение эффективности мероприятий по борьбе с бруцеллезом животных, как основного источника заражения людей. Вывод о целесообразности проделанной работы может быть сделан на основании ее эффективности, мерилом которой будут количественные и качественные изменения основных направлений эпизоотического процесса в соответствии с проводимыми мерами борьбы и их результатом.