Документация судебно-химических экспертиз

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ 
ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ 
ОМСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ 
ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ 
И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ

--------------------------------------------------------------------------------------------------                   

КАФЕДРА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ ХИМИИ

КОНТРОЛЬНАЯ РАБОТА ПО КУРСУ

«Токсикологическая химия»

Вариант №10

Зачетная книжка №

Вопрос 1.Документация судебно-химических экспертиз.

Судебно-химические исследования очень ответственны. Поэтому на всех стадиях производства они оформляются соответствующими документами. 
Документация при производстве судебно-химической экспертизы. 
Документация оформляется в соответствии с УПК РФ и другими действующими нормативными актами. 
Первая стадия. Основанием для производства судебно-химической экспертизы внутренних органов, тканей и биологических жидкостей трупов являются: 
   а) постановление (письменное) следователя или судебно-следственных органов о назначении судебной химической экспертизы; 
В постановлении о проведении судебно-химической экспертизы указывают фамилию эксперта или наименование учреждения, в котором должна быть произведена экспертиза, формулируют вопросы, поставленные перед экспертом, и перечисляют материалы, предоставляемые в его распоряжение. Следователь обязан ознакомить обвиняемого с постановлением о назначении экспертизы. 
  б) определение суда. 
  в) направление судебно-медицинских экспертов, врачей ЛПУ. 
  Эксперт чаще всего имеет дело с направлением. 
Вместе с вещественными доказательствами, постановлением органов дознания или следствия о назначении экспертизы, направлением судмедэксперта или врача направляют другие сопроводительные документы: а) протокол осмотра места происшествия и изъятия вещественных доказательств; б) копию карты стационарного больного; в) выписку из акта медицинского исследования трупа; г) выписка из протокола допроса и др. При повторных экспертизах направляют заверенную копию первичного «Акта судебно-химического исследования» (или заключения эксперта). В случае необходимости эксперт-химик может запросить другие документы. 
Вторая стадия. 
Все данные о вещественных доказательствах и документах к ним регистрируют в регистрационном и рабочем журналах. 
Журнал регистрации - юридический документ. Журнал должен быть прошнурованным и содержать пронумерованные страницы, разграфлен, опечатан печатью и подписан начальником бюро судебно-медицинской экспертизы. Регистрационный журнал обеспечивает строгий учет вещественных доказательств, помогает эксперту-химику быстро ориентироваться в ответах на запросы по экспертизам, составлять отчеты. Рабочий журнал - также должен быть пронумерован, прошнурован, опечатан печатью и подписан начальником бюро судебно-медицинской экспертизы, каждому эксперту-химику выдается под расписку, по использовании сдается на хранение в канцелярию бюро. В рабочий журнал вносятся все записи, связанные с осмотром вещественных доказательств и производством судебно-химического исследования. Недопустимо делать записи на каких-либо отдельных листах, в черновиках и т.п. Рабочий журнал является прототипом акта. 
Третья стадия. 
По результатам экспертизы (исследования) составляют документы в 2 экземплярах: «Акт судебно-химического исследования» (если материалы на экспертизу направлял судебно-медицинский эксперт или врач ЛПУ) или «Заключение эксперта» (если экспертиза проводилась на основании постановления органов дознания, определения суда). «Акт судебно-химической экспертизы» составляют по определенной форме, он состоит из вводной части, описания объектов исследования, исследовательской части и заключения. Перед составлением «Заключения эксперта» судебно-медицинский эксперт расписывается в том, что в соответствии со ст. 307 УК РФ он несет административную и уголовную ответственность за уклонение или отказ от проведения экспертизы или заведомо ложные результаты экспертного исследования. 
«Акт судебно-химического исследования» или «Заключение эксперта» являются заключительными документами, пишутся на основании записей в рабочем журнале. 
Во введении указывается: 
1) время (начало и окончание исследования, дата, часы); 
2) основание для производства экспертизы (постановление о назначении судебно-химической экспертизы с указанием фамилии следователя и даты), номер и дата сопроводительного документа; 
3) место производства экспертизы; 
4) кем выполнена экспертиза (фамилия, имя, отчество, образование, специальность, степень, звание и квалификационная категория, занимаемая должность); 
5) какие вещественные доказательства, и по какому делу подверглись экспертизе; 
6)кто присутствовал при производстве экспертизы; 
7) цель экспертизы или вопросы, поставленные на разрешение экспертизы; 
8) под заголовком «Обстоятельства дела» кратко излагают содержание материалов дела. 
В разделе «Наружный осмотр» подробно описывают вещественные доказательства: упаковку, надписи на банках, склянках, ящиках, коробках, морфологический состав объекта, массу, цвет, запах, реакцию среды на лакмус и другие индикаторы, наличие консервантов. 
В разделе «Химическое исследование» даётся детальное описание применённых методов, техники исследования вещественных доказательств и результатов исследований. Подробно описывают весь ход судебно-химического анализа: методы изолирования, обнаружения (наблюдавшиеся при этом явления: цвет, осадок, образование кристаллов и т.д.) и количественного определения ядовитых и сильнодействующих веществ (начиная от количества взятого объекта и заканчивая расчетами). 
В заключении (выводах) перечисляют найденные вещества с указанием их количества, затем ненайденные вещества, далее по пунктам приводят ответы на вопросы (в пределах компетенции эксперта-химика), поставленные органами дознания, следствия и суда. 
Если в процессе работы эксперт-химик установит обстоятельства, имеющие значение для дела, но по которому ему не были поставлены вопросы, он указывает на это в заключении. 
«Заключение эксперта» («Акт судебно-химического исследования») подписывает эксперт-химик, производивший экспертизу (исследование), который несёт за ответы в акте ответственность. 
При оформлении акта следует учесть следующее: 
- акт пишется на обеих страницах листа. Для удобного брошюрования поля на первой странице оставляют слева, на второй - справа; 
- пропуски прочеркивают; 
- слова нельзя сокращать, вводить условные обозначения, сокращать предложения (допускаются только общепринятые сокращения); 
- в разделе «Химическое исследование» не допускаются выражения: «получалась положительная реакция», «результат реакции отрицательный», «испытание кислотой хлороводородной показало наличие солей серебра» и т.д.; 
- нельзя ссылаться на автора того или иного метода, приводить формулы и уравнения реакций; 
- количественное определение ядовитых и сильнодействующих веществ должно быть изложено так, чтобы описанная методика и расчеты давали возможность судить о достоверности результатов определения; 
- в местах исправлений на полях следует писать: «исправленному верить» и ставить подпись; 
- в заключении в строчку сначала пишут: обнаружено и перечисляют все обнаруженные вещества; затем не обнаружено, перечисляют вещества, на которые выполняли исследование, но которые не были обнаружены.

2.Основные закономерности поведения  токсических веществ в организме  человека и трупе. Пути проникновения  органических и неорганических  соединений в организм. Всасывание, распределение и пути выделения токсических веществ из организма. Выбор объектов исследования на основе знаний вопросов токсикокинетики.

Судьба различных ядов в организме неодинакова. Одни не претерпевают существенных изменений, другие - окисляются, восстанавливаются, нейтрализуются, адсорбируются и т.д. При этом образуются новые соединения как со сниженной, так и с повышенной токсичностью. Бензол в организме вначале окисляется до хинона, а затем разрушается с образованием токсичных метаболитов: оксигидрохинолона, фенилмеркаптуровой и муконовой кислот. Гидролиз фосфорорганических веществ ведет к утрате их токсичности, окисление - к резкому усилению токсичности. Процессы биотрансформации ядов в основном протекают в печени, желудочно-кишечном тракте, легких, почках, жировой ткани и др. Наибольшее значение имеет степень активности превращения ядов в печени. Задерживаясь в организме, яд может фиксироваться белками тканей и плазмы крови. В этих случаях образующийся комплекс "яд-белок" становится частично или полностью нетоксичным, в других - белок выполняет функцию переносчика яда к пораженным структурам. Образование нетоксических комплексов нередко сопровождается расходованием веществ, важных для жизнедеятельности организма. Дефицит этих веществ может привести к тяжелым, а иногда и необратимым изменениям углеводного и других видов обмена. Превращение яда в организме определяются понятием «токсикокинетики».

Существенную роль в развитии отравления играет физическое (агрегатное) состояние яда. Легче всего проникают в кровь газообразные и парообразные вещества при их вдыхании. Жидкие и твердые растворимые вещества, принятые внутрь, поступают в кровь только после всасывания через слизистые оболочки, причем вещества, принятые в виде порошка, таблеток, действуют медленнее, чем их растворы. Нерастворимые вещества не всасываются и, как правило, не вызывают отравления. Наполнение желудка пищей затрудняет всасывание яда и, тем самым, способствует постепенному развитию отравления и некоторому снижению токсического действия яда. Имеет значение характер пищи. Белковая пища препятствует всасыванию солей тяжелых металлов, жирная пища замедляет всасывание этилового алкоголя, кислая реакция пищевых масс способствует всасыванию цианидов, дубильные вещества, содержащиеся в чае, связывают некоторые алкалоиды.

Наиболее часто яды поступают в организм через рот. Всасываясь из желудка и тонкой кишки, они попадают в кровь и затем через систему воротной вены в печень, где частично обезвреживаются. Яды, введенные через прямую кишку или влагалище, минуют печеночный барьер и, следовательно, оказывают более выраженное действие при тех же дозах. Быстрее и почти в неизменённом виде ядовитые вещества поступают в кровь при парентеральном введении. Наиболее быстро и интенсивно оказывается общее действие ядов при внутривенном введении, а для газообразных и парообразных – при вдыхании через легкие. Через неповрежденную кожу проникают только те вещества, которые хорошо растворимы в жирах и липидах, например, тетраэтилсвинец, фенол, сернокислый анабазин, гидразин и некоторые другие. При этом имеет большое значение длительность контакта и площадь соприкосновения кожи с ядовитым веществом. 
   Находясь в организме, ядовитые вещества под влиянием ферментов и других биологически активных веществ подвергаются химическим превращениям (окислению, восстановлению, гидролизу и др.) с образованием чаще всего безвредных соединений. В других случаях образуются промежуточные продукты, обладающие более выраженными токсическими свойствами (ацетальдегид, щавелевая кислота, формальдегид соответственно - при отравлении этиловым алкоголем, этиленгликолем, метиловым спиртом). Одним из путей превращения ядовитых веществ в организме является образование свободных радикалов, обладающих способностью повреждать внутриклеточные мембраны с последующей гибелью клеток. Как правило, некоторая часть яда выводится из организма в неизмененном виде. 
Выделение ядов может происходить различными путями: через почки, легкие, печень, слизистые оболочки, крупными железами. Чаще всего ядовитые вещества и продукты их превращения, в основном растворимые в воде, выделяются почками. Канальцевый эпителий при этом подвергается дистрофическим, а иногда и некротическим изменениям (отравление сулемой, этиленгликолем), что может обусловить недостаточность выделительной функции почек. 
Соли тяжелых металлов частично выделяются через слизистую оболочку толстой кишки, в которой могут возникать воспалительные и некротические изменения (сулемовый колит). Летучие вещества (алкоголь, эфирные масла, синильная кислота и др.) выделяясь через легкие, сообщают выдыхаемому воздуху свойственный им запах. Печень вместе с желчью выделяет эфирные масла, наркотики, некоторые алкалоиды. 
Ряд веществ при повторных введениях обладает кумулятивным действием, то есть способностью накапливаться в тканях и органах, вызывая более выраженное повреждающее действие.

Токсикокинетика определяет выбор экспертом объектов исследования (кровь, моча, желчь, печень и другие внутренние органы).

3.Реакции идентификации висмута, бария, марганца, хрома, с дитизоном, с диэтилдитиокарбаминатами натрия и свинца, 8-оксихинолином. Химизм.

Дитизон, или дифенилтиокарбазон образует комплекс оранжево-желтого цвета - дитизонат висмута Bi(НDz)3

    C6H5- NH - NH                                                      C6H5 – NH- N  0

3                                    C= S + Bi3+ + 3OH-→                                        C- S- Bi +3H2O

   C6H5 - N =   N                                                         C6H5- N = N 3

    C6H5- NH - NH                                                           C6H5 – NH- N  0

2                                  C= S + Ba2+ + 2OH-→     C- S- Ba +2H2O

   C6H5 - N =   N                                                             C6H5- N = N 2

    C6H5- NH - NH                                                          C6H5 – NH- N  0

2                                   C= S + Mn2+ + 2OH-→    C- S- Mn +2H2O

   C6H5 - N =   N                                                             C6H5- N = N 2

    C6H5- NH - NH                                                         C6H5 – NH- N  0

3                                   C= S + Cr3+ + 3OH-→    C- S- Cr +3H2O

   C6H5 - N =   N                                                             C6H5- N = N  3

Реакция с дифенилкарбазидом. При выполнении этой реакции ионы хрома, находящиеся в минерализате, окисляют персульфатом аммония в присутствии катализатора (ионы серебра) до дихромат-ионов. Образовавшиеся дихромат-ионы реагируют с дифенилкарбазидом. Вначале дихромат-ионы окисляют дифенилкарбазид (I) до дифенилкарбазона (II), который не имеет окраски. При дальнейшем окислении образуется дифенилкарбадиазон (III), имеющий светло-желтую окраску:

При этой реакции дихромат-ионы восстанавливаются до двухвалентного хрома Cr 2+, но не до Cr 3+. Ионы Cr 2+ с енольной формой дифенилкарбазона (IV) дают внутрикомплексную соль (V), имеющую красно-фиолетовую окраску:

К минерализату прибавляют раствор диэтилдитиокарбамата натрия. При этом ионы висмута с этим реактивом образуют внутрикомплексное соединение:

Реакция с оксином основана на переведении ионов висмута в ацидокомплекс [ВiI 4 ] -, который при взаимодействии с оксином в кислой среде образует оранжево-красный осадок, представляющий собой ионный ассоциат (иодвисмутат оксина). Образование этого ионного ассоциата можно представить следующими уравнениями:

4.Соединения мышьяка, имеющие токсикологическое значение. Изолирование. Дробный метод их  обнаружения и определения в  минерализате. Оценка результатов химикотоксикологического анализа.

Применение и токсичность соединений мышьяка. Соединения мышьяка относятся к числу веществ, проявляющих сильное токсическое действие на организм людей и животных. Отмечены случаи отравлений ангидридом мышьяковистой кислоты, арсенитами, арсенатами, хлоридом мышьяка (III), мышьяковистым водородом, органическими препаратами мышьяка и др.

Ангидрид мышьяковистой кислоты применяется в медицине, в сельском хозяйстве (как инсектицид), в стекольной и кожевенной промышленностях. Арсениты и арсенаты некоторых металлов применяются в качестве ядохимикатов. Сюда относится парижская (швейнфуртская) зелень. Определенное токсикологическое значение имеют органические соединения мышьяка, применяемые в медицине (новарсенол, осарсол и др.). Известны случаи отравлений мышьяковистым водородом. Очень токсичными являются боевые отравляющие вещества (люизит, адамсит и др.), содержащие мышьяк. Соединения пятивалентного мышьяка в организме превращаются в более токсичные соединения трехвалентного мышьяка. Определенное количество мышьяка содержится в тканях организма как составная их часть.

Применяемые в химико-токсикологическом анализе методы обнаружения мышьяка основаны на переведении его в мышьяковистый водород и на последующем определении мышьяковистого водорода при помощи реакции Зангер — Блека, реакции с раствором диэтилдитиокарбамата серебра в пиридине и реакции Марша. При всех этих реакциях из соединений мышьяка выделяется летучий и очень ядовитый мышьяковистый водород. Поэтому при выполнении всех перечисленных выше реакций на мышьяк требуется предосторожность.

Дробный метод

Основан на получении мышьяковистого водорода (AsH3) и его обнаружении

-ПРР с Zn (реакция Зангер-Блека), обнаружение AsH3 по реакции с ртутно-бромидной бумагой

-ПР с использованием аппарата Марша, получение AsH3 и его обнаружение

Мышьяковистый водород обнаруживают по следующим признакам:

-чесночному запаху

-синей окраске пламени  при поджигании

-помутнению р-ра AgNO3 при пропускании в него AsH3

-по налету на фарфоровой  пластинке при внесении ее  в пламя горящего AsH3

Основное испытание – термический распад в узкой части трубки Марша до мышьяка и водорода. Налет мышьяка испытывают дополнительно, нагревая его в токе кислорода. Образуются кристаллы мышьяковистого ангидрида октаэдрической формы.

При обнаружении МЕ ядов требуется их количественное определение из-за естественного присутствия в организме или накопления в процессе жизнедеятельности. Используюся следующие методы:

-титриметрия (барий, свинец, цинк, медь, висмут, кадмий, мышьяк и серебро);

-визуальный колориметрический (ртуть, мышьяк);

-атомно-адсорбционная спектрометрия (все МЕ яды).

5.Ядовитые алкилгалогениды (хлороформ, хлоралгидрат).Токсическое значение, метаболизм, реакции обнаружения. Химизм.

Алкилгалогениды находят широкое применение в лакокрасочной, кожевенной, электротехнической, фармацевтической промышленности; при приготовлении полимерных материалов как пластификаторы, мономеры и сополимеры. Используются в качестве растворителей, в том числе для обезжиривания и экстрагирования жиров и эфирных масел, хладагентов, пестицидов, в органическом синтезе, при производстве каучука, резинотехнических изделий. 
Почти все хлорпроизводные алканов опасные яды. Максимальная смертность отмечается при отравлениях хлороформом, четырёххлористым углеродом, 1,2-дихлорэтаном. В картине отравления помимо фазы наркоза, которая проявляется преимущественно при ингаляционных отравлениях, выделяют и токсическую. Токсическая фаза, протекающая с поражением печени, почек и ЦНС, наиболее выражена при приёме хлорпроизводных алканов внутрь, но отмечается и при других путях поступления. Токсичность хлорпроизводных алканов усиливается при одновременном или предварительном действии этанола, как при ингаляции, так и при внутрижелудочном введении. Потенцирующее действие отмечается при комбинации хлорпроизводных алканов и с другими алифатическими спиртами. 
Усиление загрязнения окружающей среды хлорпроизводными углеводородов - вероятная причина роста раковых заболеваний. 
Поступают в организм при ингаляции, перорально, через кожные покровы. 
Определение летучих хлорпроизводных алканов в выдыхаемом воздухе основано на последовательном применении ГХ и масс-спектрометрии. Используют также ГЖХ и хромато-масс-спектрометрический метод. В воде -ГХ и спектрофотометрические. В биологическом материале определяют ГХ и масс-спектрометрическими методами. Применяют также хроматографию в тонком слое. Сохраняют значение методы, основанные на реакции Фудживара - окрашивание раствора пиридина при взаимодействии с хропроизводными углеводородов в щелочной среде. 
ХЛОРОФОРМ(трихлорметан) СНСl3 
 
Хлороформ представляет собой бесцветную прозрачную жидкость с резким характерным запахом, сладковатым, жгучим вкусом; т. кип. 61,1°С; образует азеотропную смесь с водой (т. кип. 56,2 °С, 97,4 % хлороформа). Используют хлороформ главным образом для производства хладона 22, как растворитель, хладагент, в синтезе лекарственных препаратов. Ранее применялся в медицине как средство для наркоза. Хлороформ - негорюч, на свету разлагается, особенно при контакте с открытым пламенем, образуя фосген. Вызывает наркоз. Обладает гепатотропным, нефротоксическим и кардиотоксическим действием; вызывает канцерогенный и мутагенный эффекты; раздражает слизистые оболочки. 
Качественное обнаружение

1. Реакция отщепления атомов хлора

 
Появляется белый осадок, растворимый в растворе аммиака. Параллельно проводят пробу в тех же условиях с 1 мл исследуемого раствора и натрия гидроксидом, но без нагревания (для исключения ионов хлора в исследуемом растворе). 
Реакция не специфична, является общей для всех хлорпроизводных. Чувствительность реакции 0,2 мг.

2. Реакция с резорцином в щелочной среде

 
 
 
После нагревания пробирки на кипящей водяной бане в течение 5-10 мин. появляется розовая или малиновая окраска. Параллельно выполняется контрольный опыт («слепой» опыт), цель которого - исключить ошибки за счет продуктов окисления резорцина, окрашенных в зеленый цвет и маскирующих розовое окрашивание. 
Реакция не специфична, ее дают все хлорпроизводные, кроме дихлорэтана, а также формальдегид.

3. Реакция образования изонитрила

 
Появляется резкий раздражающий запах изонитрила. Реакция не специфична, ее дают все хлорпроизводные, за исключением дихлорэтана. 
Чувствительность реакции 0,01 мг.

4. Реакция с реактивом Фелинга.

 
 
 
Выпадает желтый осадок гидрооксида меди (Cu(OH)2), переходящий в красный осадок закиси меди (Cu2O). 
Реакция не специфична, ее дает хлороформ, хлоралгидрат и формальдегид. Не дают четыреххлористый углерод и дихлорэтан. Чувствительность реакции 3 мг. 
ХЛОРАЛГИДРАТ (2,2,2-трихлорэтандиол-1,1) СС13СН(ОН)2 
 
Бесцветные, прозрачные кристаллы или мелкокристаллический порошок с характерным острым запахом, слегка горьковатого вкуса. Т.пл. 51,4 °С, т. кип. 97,5 °С. Растворим в этаноле, диэтиловом эфире, слабо растворим в бензоле, сероуглероде. 
Применяют как успокаивающее внутрь и ректально, как снотворное и противосудорожное средство. 
Признаки острого отравления при передозировке: глубокий сон, затем наркотическое состояние, ослабление дыхания и падение сердечной деятельности. 
Качественное обнаружение 
Хлоралгидрат дает все реакции, которые используют для обнаружения хлороформа, т.к. они проводятся в присутствии щелочи, под влиянием которой хлоралгидрат разлагается с выделением хлороформа.

 
Для отличия хлоралгидрата от хлороформа используются следующие пробы:

1. Реакция с реактивом Несслера

 
Образуется кирпично-красный осадок, который затем становится грязно-зеленым. Другие хлорпроизводные этой реакции не дают. 
Реакция не специфична, ее дают альдегиды и другие восстановители. 
2. Экстракция из дистиллята.Часть дистиллята 2-3 раза встряхивают в делительной воронке с порциями эфира по 5 мл, эфирные вытяжки соединяют и фильтруют через сухой фильтр в фарфоровую чашку. Фильтрат выпаривают досуха при комнатной температуре под тягой. Если в дистилляте был хлороформ, то он улетучивается вместе с эфиром. При наличии хлоралгидрата в чашке остается остаток кристаллического вещества. Для подтверждения хлоралгидрата в остатке к нему прибавляют 2-Змл воды и полученный раствор подвергают исследованию при помощи вышеуказанных реакций.

6.Какие вещества  экстрагируются органическим растворителем  из кислого раствора и почему? Общие свойства веществ.

При общем (ненаправленном) судебно-химическом анализе изолирование барбитуратов проводится подкисленным спиртом и подкисленной водой. Последующая экстракция их из кислого водного раствора осуществляется органическим растворителем, чаще эфиром или хлороформом. Максимальные количества барбитуратов извлекаются в интервале рН 1-3, т.к. при данном значении рН барбитураты существуют в молекулярной форме, которая хорошо растворяется в органических растворителях и ограниченно в воде. Изолирование подкисленной водой и подкисленным спиртом обеспечивает выход барбитуратов порядка 25-30% (некоторые барбитураты изолируются этанолом на 50% - (барбамил, этаминал-Na, фенобарбитал). 
Последующее выделение барбитурата из водной фазы проводят после подкисления водного раствора (рН=2) экстрагированием органическим растворителем. При этом барбитурат в молекулярной форме извлекается органическим растворителем, а в водной фазе остаются балластные вещества, не растворимые в органическом растворителе.

Вещества кислого характера более полно экстрагируются органическим растворителем из кислого раствора. Одним из свойств алкалоидов является способность их вступать во взаимодействие с молекулой белка и образовывать комплексы, не изолируемые или трудно изолируемые водой. Реакция взаимодействия алкалоидов с белками протекает обычно при величине рН, лежащей выше изоэлектрической точки белков  (рН 4-5), т. е. в слабокислой области. С повышением рН возможность связывания алкалоидов белками увеличивается, а это значит, что комплексообразование между алкалоидами и белками возможно и в живом организме (рН крови 7,3-7,5) и в трупе (рН 6,2 и выше). Для того чтобы изолировать алкалоиды из биологического материала, необходимо прежде всего разрушить комплексы алкалоидов с белками. Разрушение этих комплексов происходит в результате изменения рН среды. По данным В. Ф. Крамаренко, оптимальным является рН 2,5- 3,0. Алкалоиды, освобожденные из комплексных соединений с белками при подкислении объекта до рН 2,5-3,0, экстрагируют из водных растворов органическими растворителями. В зависимости от константы диссоциации алкалоиды переходят из солей в свободные основания при различных значениях рН среды. Слабоосновные алкалоиды, например кофеин (К = 4,1 • 10-14), соли которых полностью гидролизуются в водных растворах, экстрагируются из водных растворов органическими растворителями даже из кислой среды. Более сильные основания, например папаверин (К = 8,15-10~9) или наркотин (К= 1,5-10~8), переходят в основания и экстрагируются из слабощелочной среды и, наконец, алкалоиды со сравнительно большой величиной константы диссоциации, например кодеин (К = 9-10TM7), требуют для своего извлечения более сильного подщелачивания.

7.Идентификация  лекарственных веществ по функциональным  группам. Какие функциональные группы  лежат в основе доказательства  морфина, кодеина, атропина, изолируемых полярными растворителями, реакциями: Витали – Морена, азокрасителя, полиметинового красителя, гидроксамовой пробы и других? Химизм.

Реакция с йодноватой кислотой (НIO 3 ). При взбалтывании раствора морфина, слабо подкисленного серной кислотой, с раствором йодноватой кислоты или раствором иодата калия (KIO 3 ), не содержащего иодидов, выделяется свободный иод, который при взбалтывании с хлороформом переходит в хлороформный слой, окрашивая его в фиолетовый цвет.

Реакция с гексацианоферратом (Ш) калия и хлоридом железа (Ш). Эта реакция основана на том, что гексацианоферрат (III) калия окисляет морфин и превращается в гексацианоферрат (II) калия, который взаимодействует с хлоридом железа (III). При этом образуется берлинская лазурь, имеющая синюю окраску. Реакцию с гексацианоферратом (III) калия выполняют так: к водному раствору исследуемого вещества прибавляют несколько капель смеси растворов гексацианоферрата (III) калия и хлорида железа (III). При наличии морфина появляется синяя окраска или такого же цвета осадок.

Атропин.

Реакция Витали — Морена. Эта реакция основана на том, что при нагревании атропина с азотной кислотой он разлагается на тропин и троповую кислоту. При действии азотной кислоты на троповую кислоту образуется тринитропроизводное этой кислоты, имеющее желтую окраску:

При действии щелочи на тринитропроизводное троповой кислоты появляется фиолетовая окраска:

Кодеин.

Реакция Пеллагри. При нагревании кодеина с концентрированной соляной кислотой, а затем с концентрированной серной кислотой происходит деметоксилирование этого алкалоида и образуется апоморфин, который дает реакцию со спиртовым раствором иода.

8.Составить  примерный  план анализа при подозрении на отравление производными барбитуровой кислоты (фенобарбитал, барбитал, этаминал).

1.Выделение барбитуратов из биологического материала.

а.Изолирование барбитуратов водой, подкисленной щавелевой кислотой.

2.Надосадочную жидкость (центрифугат) сливают с осадка и очищают от примесей методом гель-хроматографии.

3.Обнаружение барбитуратов.

а.Предварительная проба. Для обнаружения барбитуратов в моче применяют предварительную пробу, основанную на реакции этих веществ с ацетатом кобальта и гидроксидом лития.

б. Реакция барбитуратов с изопропиламином и солями кобальта.

в. Реакция с солями кобальта и щелочами.

г. Реакция с пиридином и солями меди.

д. Мурексидная реакция.

е. Выделение кислотной формы барбитуратов.

ё. Реакция с хлорцинкиодом.

ж.Реакция со смесью растворов хлорида железа и иодида калия.

з.Реакция с дииодокупратом калия в растворе иода.

и.Реакция с подкисленным спиртовым раствором иодида калия.

й.Реакция с родамином 6Ж.

4.Обнаружение барбитуратов по спектрам поглощения в УФ-области.

5.Обнаружение барбитуратов методом хроматографии в тонком слое сорбента.

6.Количественное определение барбитуратов

а.Микрокристаллические реакции.

9.Применение биохимических  методов в химико – токсикологическом анализе. На примере количественного определения спиртов, энзимного метода обнаружения ФОС, иммунохимических методов анализа «лекарственных» ядов.

Метод биохимический (энзимный, ферментативный, метод АДГ) был разработан в 1951г. Бюхером и Родецки и применяется, в основном, в зарубежных лабораториях. Метод основан на реакции окисления этанола до ацетальдегида под действием фермента алкогольдегидрогеназы (АДГ). 
Акцептором водорода в реакции служит дифосфопиридин-нуклеотид (ДПН), восстановленная форма которого обладает характерным светопоглощением при длине волны 366 нм. Измеряя оптическую плотность продукта реакции, можно рассчитать содержание этанола в исследуемом объекте, т.к. количество восстановленной формы ДПН, т.е. его оптическая плотность, пропорциональны количеству этанола. Расчет ведут по калибровочному графику, построенному по растворам этанола с известной концентрацией. 
Судебно-химическая оценка метода.  
Метод чувствителен (0,1-0,2%) на уровне естественного содержаний этанола в организме, специфичен, позволяет проводить серийные анализы, однако требует специального оборудования и особо чистых ферментов (АДГ и ДПН), в связи с чем в нашей стране не нашел применения. 
 
Метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ) основан на переведении этанола в более летучее соединение - этиловый эфир азотистой кислоты (этилнитрит). Достоинства метода ГЖХ. 
· Высокая разделяющая способность, что позволяет анализировать сложные многокомпонентные смеси. Это удобно в случаях комбинированных отравлений суррогатами алкоголя. 
· Универсальность метода. Анализировать можно любые соединения при условии их летучести и термостабильности. 
· Возможность качественного и количественного определения в одной пробе. 
· Высокая чувствительность (10-5 – 10-9 г, т.е. на уровне естественного содержания этанола в организме). 
· Возможность выполнения анализа в малом объеме образца (0,5-2 мл биожидкости). 
· Точность метода (ошибка не превышает 1-2%). Экспрессность (время определения 3-5 минут) и возможность проведения, в связи с этим, серийных анализов. 
· Простота и легкость выполнения. 
· Доказательность и объективность. Результат в виде хроматограммы может быть приложен к акту судебно-химического исследования.

Определение ФОС энзимно-хроматографическим методом. Принцип данного метода основан на извлечении ФОС из пробы органическим растворителем, очистке охлажденным ацетоном, идентификации пестицида посредством тонкослойной хроматографии с энзимным проявлением без активации или после активации пестицида на пластинке. 
В основе использования энзимного проявителя лежит способность фосфорорганических соединений подавлять в условиях in vitro активность фермента (энзима) холинэстеразы, в качестве субстрата для определения которой в данном конкретном случае применяют индоксилацетат. Если в исследуемой пробе присутствует ФОС, он подавляет активность холинэстеразы, которая, в свою очередь, не расщепляет или очень слабо расщепляет индоксилацетат. В результате этого на всей поверхности пластинки, где нет ФОС, активность фермента высокая, происходит расщепление индоксилацетата и поверхность пластинки окрашивается в голубой цвет. Там, где имеются ФОС, индоксилацетат не разрушается и окрашивания пластинки не наступает. ФОС проявляется в виде белых пятен на голубом фоне.

Иммунохимические методы.В основе иммунохимических методов анализа лежит высокоспецифичная и высокочувствительная иммунная реакция антигена с антителами. Антитела – это белки класса иммуноглобулинов, которые вырабатываются в иммунной системе в результате проявления защитной функции (иммунитета) при попадании в организм чужеродного вещества – антигена. 
Антиген – это вещество, которое индуцирует выработку антител. 
Достоинства метода: 
 
·                   Быстрота и простота определения;

·                   Возможность автоматизации и использования для массовых анализов в полевых условиях; 
 
·                   Не сложная пробоподготовка; 
 
·                   Высокая точность; 
 
·                   Не требуется дорогостоящей аппаратуры. 
 
Недостатками можно назвать узкую специфичность и влияние компонентов матрицы. 
Метод применяется для обнаружения вирусов, гормонов, лекарственных препаратов, определения биологически активных веществ. 
Для определения моновалентных антигенов используется конкурентная схема – в систему водятся меченые ферментом вещества, которые конкурируют с антигеном при взаимодействии с ограниченным числом центров связывания специфичных антител. 
Существует два способа реализации иммунохимического анализа – прямой и непрямой.  
Прямой способ. Антитела нанесены на твердую фазу, ферментная метка вводится в антиген. Преимущества – небольшое число стадий и, соответственно, возможность автоматизации определения. Недостатки – сложность и неуниверсальность методов синтеза ферментных коньюгатов (промежуточная стадия иммунной реакции), а также возможное влияние компонентов образца на активность фермента 
Непрямой способ. Антиген наносится на твердую фазу, ферментной меткой отмечаются вторичные антитела, полученные против иммуноглобулинов соответствующего типа. Достоинством этого способа является возможность устранения влияний различных эффектов на каталитические свойства ферментов. 
На основе иммунохимического метода создано множество тест-систем. Они реализуются обычно на микропланшетах или в пробирках. С помощью тест-систем определяются гормоны и лекарства в сыворотке крови. Кроме того, на основе иммунной реакции создаются биосенсоры.