Алкалойды спарыньи

Содержание

 

Введение 3

1. Ботаническая характеристика спорыньи 4

2. Химический состав и фармакологические свойства алкалоидов спорыньи 6

4. Получение эргоалкалоидов 13

5. Методы аналитического контроля эргоалкалоидов 18

Заключение 24

Список использованной литературы. 25

 

 
Введение

В настоящее время в фармацевтической промышленности большую роль играют вещества, входящие в состав растений, животных, грибов, микроорганизмов.

Одними из подобного рода соединений являются алкалоиды спорыньи - эргоалкалоиды, так как они используются в качестве фармакологических средств разнообразного направления и механизма действия. На сегодняшний день в мире выпускается более 80 лекарственных средств на основе эргоалкалоидов. Применяются эргоалкалоиды как индивидуально, так и в составе многочисленных комбинированных лекарственных препаратов. В России на основе эргоалкалоидов разработаны препараты Абергин, Новокристин, Беллатаминал и Эргометрина малеат различного спектра действия.

Однако, несмотря на актуальность проблемы, в современной литературе данная тема освещена незначительно, а материал разрознен. Поэтому, в ходе выполнения курсовой работы поставлена цель: дать характеристику алкалоидам спорыньи и способам их получения и применения.

Методы исследования: анализ литературы, систематизация теоретического материала.

Задачи исследования:

- изучить литературу по теме работы и провести ее анализ, обобщение и систематизацию полученных теоретических данных;

- дать ботаническую спорыньи пурпурной;

- охарактеризовать особенности строения и фармакологического действия на организм алкалоидов спорыньи;

= рассмотреть методы получения алкалоидов спорыньи;

- рассмотреть методы количественного и качественного определения алкалоидов спорыньи.

 

1. Ботаническая характеристика спорыньи

Спорынья - гриб, паразитирующий на ржи и на других дикорастущих злаках. Реже встречается на некоторых видах осок [1].

Систематическое положение спорыньи:

Класс Аскомицеты (Ascomycetes)

Подкласс Эуаскомицеты (Euascomycetidae)

Группа порядков пиреномицеты

Порядок спорыньевые, или клавицепсовые (Clavicipitaceae)

Семейство спорыньевые (Clavicipitales)

Род клавицепс, или спорынья

Вид спорынья пурпурная (Claviceps purpurea) [2]

Спорынья распространена во всех областях России, где растут хлебные злаки. Наиболее благоприятен для нее климат с повышенной влажностью (70% и выше) [1].

В соцветиях пораженных растений вместо зерен можно заметить образования темно-фиолетового или черного цвета, называемые склероциями или рожками, которые представляют собой зимующую стадию гриба (рис. 2) [2].

Рожки имеют цилиндрическую, слегка изогнутую форму с бороздчатой или немного морщинистой поверхностью, черновато-фиолетового цвета; они достигают длины от 1 до 3 см и таким образом сильно выступают из цветочных чешуек злаков. Внутренняя их ткань, плотная, белая или розоватая, чрезвычайно богата жирными и белковыми веществами [3].

Развитие спорыньи протекает в несколько стадий. Зрелый склероций, или рожок, попадая из колосьев на землю, после осенне-зимнего увлажнения и примораживания, весной, когда температура почвы достигает 10°С, прорастает. Сначала на склероции образуются бугорки, из которых развиваются так называемые стромы, состоящие из ножки длиной 15-25 мм с красновато-фиолетовой головкой диаметром 1-3 мм.

Рис. 2. Склероции спорыньи.

В головках по их периферии образуются грушевидные полости - перитеции (плодовые тела), в которых развивается масса цилиндрических сумок (асков); в каждой из них по 8 нитевидных аскоспор длиной 5-7 см и шириной 1 см. Созревшие аскоспоры выбрасываются из перицтеиев и токами воздуха переносятся на рыльца пестиков зацветающих к этому времени злаков и там прорастают, образуя грибницы (первичная инфекция). На 6-14-й день заражения на складчатой наружной поверхности грибницы развиваются расположенные тесным слоем короткие конидиеносцы, отчленяющие от себя бесцветные одноклеточные конидии (конидиоспоры). Одновременно с этим выделяется сахаристый сок (медвяная роса), в котором и находятся конидии. Эта стадия развития спорыньи называется сфацелиальной. Распространение конидий происходит насекомыми, питающимися медвяной росой, а также каплями дождя, стекающими по колосу, и при непосредственном соприкосновении здоровых колосьев с зараженными, т.е. происходит так называемая вторичная инфекция. При температуре 25-27°С конидии прорастают через 2-6 ч после заражения; на 6-14-й день на вновь зараженных колосьях образуются капли медвяной росы. Этот процесс может повторяться, поэтому растянутое цветение ржи способствует большему распространению спорыньи. Зараженная аскоспорами или конидиями завязь цветка злаков постепенно разрушается и вместо зерна в колоске образуется склероций (покоящаяся стадия гриба). В этом состоянии спорынья перезимовывает.

Спорынья издавна используется в медицине. Она культивируется в совхозах лекарственных растений в Кировской и Новосибирской областях России и Беларуси на посевах ржи, колосья которой заражают с помощью инъекционных машин или ручным способом водной суспензией конидиоспор, выращиваемых на искусственных питательных средах. Урожайность рожков спорыньи достигает 4 ц/га. Для продления сроков цветения ржи и повышения сборов спорыньи рожь подкармливают азотными удобрениями. Сбор рожков ведется по мере их созревания[1].

2. Химический состав и фармакологические свойства алкалоидов спорыньи

Спорынья применялась для медицинских целей уже в глубокой древности (Диоскорид, Гален). В Германии спорынья применяется как народное средство, при кровотечениях. Врачебное употребление спорыньи как средства, вызывающего родовые потуги, было известно издавна китайцам. Но в Европе спорынью для этой цели стали применять только в конце XVII столетия  и широкое применение спорынья в терапии вообще и в акушерской практике в частности началось лишь с двадцатых годов XIX столетия, благодаря Прескотту и Стерну [2].

В склероциях спорыньи содержатся эргостерин (0,1%), при облучении превращающийся в витамин D₂; амины тирамин, гистамин, агматин; алкиламины триметиламин, метиламин, гексиламин; аминокислоты аспарагин, валин, лейцин и фенилаланин; бетаин, холин, ацетилхолин, эрготиоксин, эрготионеин, урацил, гуанозин; жирное масло (33-35%), окрашенные вещества; секалоновая и хризергоновая кислоты; эргохризин, эргофлавин, клавоксантин и клаворубин. Рожки содержат:  макроэлементы (мг/г) - К- 15,0, Са - 0,4, Mg - 2,1, Fe - 0,1; микроэлементы (мкг/г) - Mn - 0,17, Cu - 0,69, Zn -1,29, Со -0,04, Мо - 2,2, Cr - 0,02, Al - 0,05, V - 0,01, Se - 1,1, Ni - 0,03, Pb - 0,01, I - 0,09, В - 3,6; концентрируют Zn, Mo, Se, Cu.

Однако, фармакологическое применение спорыньи обусловлено содержанием в ней эргоалкалоидов.

Алкалоиды - группа азотсодержащих органических соединений природного происхождения (чаще всего растительного), большинство из которых обладает свойствами слабого основания. Некоторые нейтральные и даже слабокислотные соединения также относятся к алкалоидам.

Склероции маточных рожков содержат индоловые алкалоиды (более 30), которые разделяют на две основные группы: производные (+)-лизергиновой и (+)-изолизергиновой кислот и клавиновые алкалоиды.

К классическим алкалоидам рожков относятся 7 пар стереоизомерных алкалоидов -- производных (+)-лизергиновой и (+)-изолизергиновой кислот. Левовращающие алкалоиды (производные лизергиновой кислоты) проявляют более сильную фармакологическую активность, чем правовращающие изомеры (производные изолизергиновой кислоты).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

7 пар классических алкалоидов маточных рожков относятся к четырем группам:

• группа эрготамина: левовращающие алкалоиды эрготамин и эргозин, правовращающие -- эрготаминин и эргозинин;
• группа эргостина: левовращающий алкалоид эргостин и правовращающий эргостинин;
• группа эрготоксина: левовращающие алкалоиды эргокристин, эргокриптин и эргокорнин, правовращающие -- эргокристинин, эргокриптинин и эргокорнинин;
• группа эргометрина -- левовращающий алкалоид эргометрин и правовращающий эргометринин.

Алкалоиды групп эрготамина, эргостина и эрготоксина -- соединения лизергиновой кислоты с разными пептидами. Пептидные алкалоиды являются наиболее ценными для медицины.

К непептидным (водорастворимым) алкалоидам относится эргометрин -- соединение лизергиновой кислоты с аминопропанолом.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  Некоторые производные лизергиновой кислоты (амид, диэтиламид) обладают галлюциногенными свойствами. Первый химически чистый алкалоид этой группы получил в 1918 г. швейцарский ученый A.Штолл. В 1938 г. в лаборатории фирмы «Sandoz» (Шейцария) был произведен химический синтез диэтиламида лизергиновой кислоты -- препарата ЛСД-25. Сначала предполагалось его применение в акушерстве и гинекологии, а также для лечения мигрени, но после серии лабораторных исследований была признана бесперспективность данного препарата, а дальнейшее изучение прекращено. Через 5 лет в апреле 1943 г. Альберт Хоффман обнаружил психотропные свойства спорыньи и установил наркотическое галлюциногенное действие ЛСД.

Позднее этот стимулятор центральной нервной системы был запрещен не только для использования с лечебной целью, но и для исследований в лабораторных условиях.

Установлено, что специфическим психотропным компонентом этого средства является эргин - амид (+)-лизергиновой кислоты.

Приведем общую формулу пептидных алкалоидов спорыньи:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Вторая группа алкалоидов рожков - клавиновые алкалоиды (агроклавин, элимоклавин, ханоклавин I, костаклавин, эргоклавин, лизергин, пенинклавин, сетоклавин) - известна относительно недавно. Они не являются производными лизергиновой кислоты, в основе их структуры лежит скелет эрголена. Эти алкалоиды содержатся в больших количествах в склероциях рожков на дикорастущих злаках в Африке и на Дальнем Востоке.

 

 

 

 

 

 

Продолжительное время с фармакологической точки зрения клавиновые алкалоиды рожков не представляли интереса. Но в последние годы на их основе получен ценный полусинтетический препарат ницерголин - 1,6-диметил-8β-(5-бром-никотиноил-окисметил)-10α-метоксиэрголин, который, кроме эрголинового ядра, содержит бромзамещенный остаток никотиновой кислоты.

 

 

 

 

 

 

 

Наряду с индоловыми алкалоидами склероции рожков содержат алкалоид эргомонамин и алкалоиды - производные имидазола, в частности эрготионеин [4].

 

 

 

 

 

Содержание эргоалкалоидов и их состав колеблются в зависимости от биологической расы гриба, растения-хозяина и внешних факторов. Так, по Келлеру, русская спорынья содержит 0,245% алкалоидов, австрийская - 0,225% алкалоидов, испанская - 0,205% алкалоидов, немецкая - 0,157% алкалоидов, швейцарская - алкалоидов [5].

В среднем, общее содержание алкалоидов в рожках составляет не менее 0,15% в перерасчете на эрготоксин, а количество водорастворимых алкалоидов - не менее 0,01% в эквиваленте эргометрина [4].

Фармакологическое действие спорыньи обусловлено наличием физиологически активных левовращающих эргоалкалоидов. Препараты спорыньи вызывают сильное и длительное сокращение маточной мускулатуры и широко применяются для остановки маточных кровотечений. Кровоостанавливающий эффект при этом обусловлен в основном сжатием кровеносных сосудов при сокращении миометрия. Особенно активным эргоалкалоидом является эргометрин. По сравнению с остальными алкалоидами он менее токсичен, быстрее, но менее продолжительно действует на матку [1].

В малых дозах алкалоиды спорыньи не нарушают правильного чередования сокращений и расслаблений мускулатуры. Однако более высокие дозы вызывают спазм мускулатуры и уменьшение амплитуды маточных сокращений с одновременным сужением сосудов и повышением артериального давления. В связи с этим наступает замедление сердечных сокращений, обусловленное возбуждением центров сердечных волокон блуждающего нерва в связи с раздражением прессорецепторов артериальной и синокаротидной сосудистых зон. Большие дозы алкалоидов спорыньи - эрготоксина и эрготамина - наряду с сужением сосудов вызывают повреждение эндотелия в сосудах конечностей и могут привести к развитию гангрены [5].

Эргоматин и алкалоиды эрготоксиновой группы обладают, помимо маточного, сильным адренолитическим действием. Основными свойствами гидрированных алкалоидов являются их седативное действие на центральную нервную систему, рефлекторное и периферическое сосудорасширяющее действие и гипотензивный эффект [1]. Они замедляют сердцебиение [5]. В связи с этим все они, переставая быть активными маточными средствами, становятся особенно ценными препаратами для лечения мигрени, базедовой болезни, гипертонии, психических заболеваний [1].

4. Получение эргоалкалоидов

В промышленном производстве используют три основных метода получения алкалоидов рожков: из склероциев, выращенных на растениях, биосинтез алкалоидов в сапрофитной (лабораторной) культуре рожков и их частичный или полный химический синтез [6].

Учитывая фармакологическую ценность алкалоидов маточных рожков, трудность культивирования данного сырья и получения из него алкалоидов, в некоторых странах разработаны синтетические методы получения алкалоидов маточных рожков. В частности, швейцарской фармацевтической фирмой «Sandoz» запатентован метод получения пептидных алкалоидов рожков на основе L-моногидрата лизергиновой кислоты, а также способ получения пара-R-оксиэрготаминов и их солей (которые обладают адренолитической активностью и являются антагонистами серотонина) на основе лактама L-пролил-L-(о-метил)-тирозина и N-метил-морфолина [4].

В целом же химический синтез алкалоидов спорыньи начинается с алкилирования триптофана диметилаллилпирофосфатом, при этом атом углерода C₄ индольного ядра играет роль нуклеофила. Образовавшийся 4-диметилаллил-L-триптофан подвергается N-метилированию. Дальнейшими ступенями биосинтеза являются ханоклавин-I и агроклавин. Последний гидроксилируется до элимоклавина, который в свою очередь окисляется до паспаловой кислоты. В процессе аллильной перегруппировки паспаловая кислота преобразуется в лизергиновую кислоту, из которой могут быть получены различные эргоалкалоиды и их производные[7].

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Однако, до настоящего времени наиболее выгодным методом является культивирование гриба на ржи. Ранее склероции собирали на пораженных в естественных условиях полях. В 30-40-е г.г. XX в. были разработаны методы искусственного разведения рожков на ржи. С этой целью озимая рожь высеивается ленточным способом на высоком агрофоне. При этом на одном квадратном метре должно быть не менее 500 колосоносных стеблей. Для заражения используют селекционные штаммы, которые отличаются более высоким и стабильным содержанием алкалоидов (эрготамина) в склероциях - 0,4-0,6% (в дикорастущих склероциях их содержание колеблется в пределах 0,027-0,24%).

Заражают рожь в начале колошения, когда на посевах в 50% растений из влагалищного листа появляется ость. В настоящее время делают инъекцию жидкости в верхнюю колосистую часть ржи. При этом инфицированная жидкость вместе со спорами из игл попадает на колоски ржи, где затем развивается плодовое тело маточных рожков. На тычинках злаков споры прорастают, образовывая грибницу - нитевидный мицелий. На зараженных грибом растениях через 1-2 недели начинают выделяться капли «медовой росы», где содержится большое количество конидиеспор. Конидиеспоры переносятся насекомыми на другие растения. В результате завязь атрофируется и образуется склероций. Для полного образования склероция необходимо 30-40 дней [4].

Маточные рожки собирают в период созревания, когда они приобретают буро-фиолетовую окраску. Рожки собирают ручным способом или путем прямого комбайнирования переоборудованными зерновыми комбайнами. При сборе ручным способом следует помнить об отравляющих свойствах алкалоидов и защищать лицо и руки. Урожай рожков составляет 50-100 кг/га, а в годы с благоприятными погодными условиями - до 150-200 кг/га. Рожки должны быть твердыми на ощупь и легко выниматься из колоса.

Сушат в сушилках при температуре около 50°С или в хорошо проветриваемом темном помещении. Процесс сушки заканчивают, когда рожки ломаются с легким треском. Предусматривается влажность не более 11 %, рожков в изломе желтых, побуревших - не более 5 %, раздробленных и ломаных рожков - не более 7 %, органических примесей - не более 1,5 %, минеральных - не более 0,5 %. Упаковывают в мешки по 30-40 кг. Хранят по списку Б [8].

Недостатками вышеописанного метода является получение только одного урожая склероциев в год и значительная зависимость от погодных условий. Поэтому уже давно предпринимались попытки освоения сапрофитной (лабораторной) культуры рожков для получения алкалоидов. При этом культуру гриба для получения эргоалкалоидов выращивают на искусственных питательных средах (сусло-агар, солод-агар, стерилизованные зерна ржи) в колбах в стерильных условиях. Через неделю после внесения в питательную среду чистой культуры маточных рожков появляется белый мицелий гриба. Для заражения посева мицелий вынимают из колбы, помещают на шелковое или капроновое сито и растирают с чистой водой. Потом инфицированную жидкость переносят на планшет-доску с иглами и войлоком, пропитывая его суспензией спор.

Основные трудности заключаются в том, что на искусственной питательной среде (в сапрофитной культуре) образуется мицелий, который продуцирует только конидиеспоры, последующие стадии развития гриба отсутствуют. а алкалоиды обычно синтезируются на стадии формирования паразитирующих склероциев. Первый патент на такой метод получен еще в 1910 г., но только в последние десятилетия в глубинной и поверхностной культуре рожков удалось получить достаточно высокий и стабильный выход алкалоидов клавиновой группы и простых производных лизергиновой кислоты. Из сапрофитной культуры этого гриба получают также паспаловую кислоту -- изомер (+)-лизергиновой кислоты. Эти соединения предложено преобразовывать в лизергиновую кислоту, из которой путем полусинтеза можно получить эрготамин и эргометрин.

Такой способ получения пептидных алкалоидов маточных рожков введен в фармацевтическую промышленность во многих странах -- России, США, Германии, Канаде, Швеции, Японии и других. Сейчас интенсивно изучаются факторы, которые влияют на биосинтез алкалоидов в сапрофитных культурах рожков [6].

Методы выделения эргоалкалоидов зависят, в первую очередь, от физико-химических свойств индивидуальных соединений, которые отражает классификационная группа эргоалкалоида, а также от решаемых аналитических задач. Для выделения эргоалкалоидов в виде оснований используют, в основном, такие органические растворители как эфир, хлороформ, дихлорметан и др. При получении соответствующих солей применяют подкисленные водные растворы ацетона, спирта метилового, этилового и др. В некоторых случаях, до проведения экстракции, используют различные методы пре- дочистки: сырье обезжиривают с помощью петролейного эфира или других растворителей [8].

Для эргопептидов характерен процесс сольватации, где образование сольвата зависит от используемого растворителя и строения эргоалкалоида. Так, Р-эргокриптин не кристаллизуется из метилового спирта, а эргокорнин образует кристаллосольват с одной молекулой метилового спирта. При кристаллизации из бензола для α- и β-эргокриптинов характерно образование сольватов с двумя молекулами бензола, эрго стин образует сольват с одной молекулой бензола. Эргокриптина мезилат практически не растворим в воде, однако после растворения его в спирте, образующийся сольват смешивается с водой в любых соотношениях. Образование сольватов является необходимым этапом в технологическом процессе выделения эргоалкалоидов [6].

Первые методы выделения эргоалкалоидов были основаны на извлечении эфиром в присутствии аммиака [9]. Более полное и быстрое извлечение эргоалкалоидов достигается при использовании хлороформа и ацетона, однако, при последующей очистке алкалоидов было найдено, что переход цикло-пептидов из хлороформных экстрактов в виннокислые растворы затруднен и может приводить к потерям. Известен метод водной экстракции эргоалкалоидов подкисленными до рН = 2 растворами [8].

Во всех случаях, при работе с эргоалкалоидами необходимо учитывать их высокую лабильность, поэтому большинство работ проводится в затемненных помещениях, при свете красной лампы, тщательно контролируется качество используемых растворителей и реагентов, поддерживается температурный режим, при необходимости ряд работ проводят в среде инертного газа [6].

5. Методы аналитического контроля эргоалкалоидов

В процессе аналитического контроля эргоалкалоидов, в зависимости от решения аналитической задачи, применяют химические, физико-химические, физические методы анализа или их комбинации.

Для идентификации эргоалкалоидов химическими методами используют общеалкалоидные реакции с осадительными реактивами - полийодидами, солями тяжелых металлов, гетерополикислотами и др. [10]. Некоторые из осадительных реактивов обладают селективностью: алкалоиды эрготоксиновой группы осаждаются пикриновой и пикроноловой кислотами и не взаимодействуют с треххлористой сурьмой. Из полийодидов наиболее часто используется реактив Драгендорфа при детектировании эргоалкалоидов на тонкослойных хроматограммах.

В качественном и количественном анализе эргоалкалоидов широко применяются хромогенные реакции с концентрированными кислотами, из которых наиболее распространены специфические реакции на наличие в молекуле алкалоида индольного ядра. Впервые цветная реакция была предложена Тарне в 1875 году - взаимодействие с концентрированной серной кислотой, содержащей следы хлорного железа (окраса от фиолетовой до синей).

Известны цветные реакции с глиоксиловой кислотой в среде концентрированной серной кислоты (сине-фиолетовое окрашивание), ванилином, с реактивом Келлера (пурпурно-синее окрашивание), Ван-Урк (темно-синее окрашивание). Наиболее широко применяют реакции конденсации с и-диметиламинобензальдегидом (и-ДМБ). Эта реакция обладает высокой чувствительностью, и интенсивность образующейся в растворе окраски пропорциональна содержанию эргоалкалоидов, что позволило использовать ее в спектральных методиках количественного определения [11]

Первоначально предложенные методики количественного определения эргоалкалоидов: гравиметрический метод Келлера (осаждение минеральных солей эргоалкалоидов), микрометод Кьельдаля, оксидиметрический метод (окисление эргоалкалоидов бихроматом калия), метод биологической оценки склероций - не нашли широкого применения, и в настоящее время не представляют особого интереса.

Распространенный химический метод количественного определения эргоалкалоидов - титрование в неводных средах - является прямым методом определения по фрагменту молекулы, отвечающему за фармакологическую активность, - третичному атому азота эрголинового ядра. Титрование ведут в среде ледяной уксусной кислоты или ее смесях с уксусным ангидридом, титрант - раствор хлорной кислоты. При визуальном титровании используют индикатор кристаллический-фиолетовый. Метод позволяет вести дифференцированное титрование эргоалкалоидов, при этом отмечено, что основные свойства алкалоидов убывают в ряду: эргометрин - эрготамин - эргокриптин - эргокристин.

Помимо химических методов анализа используются фотоколориметрические методы

Метод фотоколориметрического определения эргоалкалоидов, основанный на применении химической реакции окрашивания с и-ДМБ, был предложен Смитом в 1930 году. Далее метод был усовершенствован: для ускорения реакции добавляли хлорное железо.

Предложен также метод хроматофотоколориметрического определения, основанный на реакции с реактивом Оллпорта. Окрашенный раствор колориметрировали при длине волны 533 нм.

Позднее колориметрическое определение стали проводить с использованием реактива Ван-Урка. В настоящее время эта методика широко используется при проведении массовых анализов по определению суммы алкалоидов в склероциях спорыньи. Колориметрический метод позволяет определить до 90 % активного компонента. При этом побочные продукты окисления эргоалкалоидов не определяются.

Спектрофотометрический метод, применяющийся при количественном определении эргоалкалоидов, обладает высокой чувствительностью (2-10 нг/мл). Однако метод недостаточно селективен. Большинство производных лизергиновой кислоты, включая ряд продуктов деструкции и изомеризации, имеют УФ-спект- ры с максимумом поглощения около 312-313 нм].

В спектрофотометрическом методе анализа используют как прямое определение эргоалкалодов, так и с их продуктами цветных реакций с и-ДМБ (реактивы Ван-Урка, Оллпорта и др.). Образующийся при этом продукт конденсации имеет максимум поглощения в области спектра около 570 нм.

Сочетание методов спектрофотометрии и хроматографии позволяет увеличить селективность определений. Метод хроматоспектрофотометрии используется при изучении селекционных штаммов спорыньи.

Метод флуоресцентной спектроскопии обладает высокой чувствительностью, позволяя определить до 1 нг производных лизергиновой кислоты. Несмотря на идентичность спектров различных эргоалкалоидов, индивидуальное определение возможно при использовании различных длин волн возбуждения. Спектры флуоресценции эргоалкалоидов зависят от применяемого растворителя и рН среды. Спиртовые растворы эргоалкалоидов имеют максимум энергии возбуждения в области 320 - 340 нм, а максимум испускания в области от 400 до 425 нм.

Метод получил широкое применение при изучении продуктов метаболизма эргоалкалоидов и других производных лизергиновой кислоты в организме животных и людей. Обычно флуориметрический метод используют в сочетании с хроматографическими методами анализа.

Метод ИК-спектроскопии эргоалкалоидов в основном используют для идентификации и характеристики индивидуальных природных и синтетических соединений.

Сигналы в ИК-спектре в области 3460, 3160 и 3300 см соответствуют ОН- и NH-группам эргоалкалоидов, сигналы в области 1721 - 1723, 1663, 1644- 1648, 1540-1550 см соответствуют СО-группам, которые являются характеристичными.

Одним из основных методов идентификации эргоалкалоидов, изучения их стереоконфигурации, установления структуры, лабильности, а так же решения других задач, связанных с изменением конфигурации и структуры соединений, является метод ЯМР-спек- троскопии. Метод позволяет также определять соотношение эргоалкалоидов в смеси, с одновременным подтверждением их структуры.

Метод масс-спектрометрии применяется для идентификации и установления строения эргоалкалоидов, характеристики пептидной части молекулы.

Фрагментация эргоалкалоидов по пептидной части молекулы при одинаковых условиях ионизации происходит по общей схеме, в которой значения массы отдельных ионов зависят только от строения пептидного фрагмента молекулы, и являются характеристичными при диагностике соединений. Метод масс-спектрометрии позволяет достаточно быстро определить возможные изменения, произошедшие в пептидной части эршалкалоида. Метод был применен при изучении ротамеров эргометрина и эргина.

Метод бумажной хроматографии (БХ) впервые применил Фостер для разделения эргометрина и его изомеров. Штолль исследовал применение метода БХ для разделения эргоалкалоидов различных групп, используя подвижные фазы на основе формамида и воды с различными значениями рН среды. Метод БХ успешно применялся для разделения пептидных эргоалкалоидов, алкалоидов эрготоксиновой группы и в анализе эрготамина тартрата, для чего используются различные подвижные фазы: смеси бензола с формамидом, хлороформ с метиловым спиртом, ацетон или эфир с добавлением концентрированного раствора аммиака.

Метод хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ) в настоящее время практически полностью вытеснил применение БХ. Метод ТСХ используют для разделения и идентификации эргоалкалоидов, исследования алкалоидного состава в скле роциях спорыньи, изучения стабильности при хранении лекарственных препаратов, путей деструкции, определения содержания примесей в лекарственном веществе и т.д. Наряду с инструментальными методами анализа, ТСХ используют для установления аминокислотного состава пептидной части молекулы.