Вірус плямистого в"янення томатів

1. Вступ ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 3

2. Вірус плямистого зів'янення  томатів ... ........................................ 7

2,1 сегментовані негативні  ланцюг РНК вірусів ... ... ... ... 0,7

2,2 Структурні особливості  ВПВТ ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 9

2,3 ВПВТ цикл інфекції ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 0,11

2,4 реплікації діяльності  ВПВТ віріона отриманих та цитоплазматичних RNPs: перемикання між транскрипції та реплікації ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ....... 13

2,5 ВПВТ транскрипції ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 0,14

2,6 ВПВТ транскрипції в пробірці ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 16

2,7 ініціації транскрипції: кришка вихопивши ... ... ... ... ... 17

2,8 ВПВТ термінації транскрипції ... ... ... ... ... ... ... ... 20

2,9 ініціації трансляції вірусної мРНК ... ... ... ... ... 0,21

2,10 методи дослідження транскрипції та реплікації

негативні вірусів пасмо ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 22

2,11 синтезу РНК у відсутність ретикулоцитів

лізат ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 0,24

2,12 синтез РНК у присутності  ретикулоцитів

лізат ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 26

  3.МОРФОЛОГІЯ ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 0,33

3,1 вірусів геному ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 34

  4. ПАТОГЕНЕЗ ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 36

  4,1 Симптоми ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 36

  5.Tрансмісія і епідеміології ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 0,38

  5,1 Поширення комахами ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 0,40

       6. Попереджуючі заходи ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 0,43

6,1 санітарії ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 43

              6.2Screening ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... .. 43

              6,3 культурного управління ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 44

              6,4 Біологічний контроль ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 0,44

Висновок

Примітки та посилання ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... ... 0,47

1. Запис

Вірус не клітинної життя-форма  існування, яка виявляє obligatniy, внутрішньоклітинний  паразит практично для всіх відомих тварин, рослин, бактерій і грибів, найпростіших та інших живих істот. У них є власний геном, а також різних форм біологічного існування, представлена ​​тільки один тип нуклеїнової кислоти, і здатні на відтворення лише в житті клітини (тканини) через хост.

Віруси, на відмінній від  інших життям-форма існування, не є діляться і не формують конкретні  репродуктивної структури, такі, як суперечка  для бактерії, вони можуть викликати  інфекційні процеси (хвороба) і відтворюється  тільки в житті клітини autofity , geterofity і інших організмів (nichuk Д. Мельник Fitovirusology-kiiv, 2005 -. 199s)

Концепція про віруси, їх ознаки та практичне значення.

Віруси не можуть самостійно поширюватися в природі. Допоможіть їм тут в першу чергу комах-векторів (viromorfni комах). Фітопатогенних вірусів нести попелиць, трипсів, цикад найчастіше, кліщі і деякі листя комахами. Наприклад, більше 200 видів попелиць - вектори відомі 160 видів вірусів.

Розрізняють два способи  перенесення вірусів комахами: механічні та біологічні. У першому методі в рот автомобіля комах під час пастися разом з живильним віруси, які він несе на здорові рослини отримують з клітин листя. Біологічний метод є трохи більш складним. Після цього, як вірус через рот автомобіль потрапив в організм комахи, він проходить латентний період там, поширюється себе і тільки після цього комахи протягом тривалого часу може заразити здорові рослини.

Для багатьох вірусів рослин характеристичний метод розподілу  землі, вони поширюються на хробаків, яких пошкоджують кореневі системи хворих і здорових рослин, а також гриби. Наприклад, капуста можуть дифундувати гриб olpidi вірусу некрозу тютюну зооспор. Зовсім небагато вірусів передаються насіння, бульб, коренів, від ламп тощо. Виявлено також, що близько 50 вірусів може здійснюватися по повітрю, коли цей бур'ян-паразит перевертається від хворих рослин на здорові.Слід додати, що людина грає важливу роль у розподілі багатьох вірусів.  Через різні агротехнічні заходи: щеплення і обрізки дерев, дайвінг розсади, обрізка рослин, і тому подібне, коли вирізали з хворих рослин поранений випадково потрапляє на руки, одягнені або інструменти робітників і здійснюється у такий спосіб на поранені здорових рослин. Нарешті, віруси звичайного мозаїки квасолі і мозаїка в'яза може розповсюджуватися разом з пилком.

Віруси тварин і людини часто поширюються як знижується інфекції. Наприклад, вірус грипу  найчастіше передається від хворих до здорових людей під час розмови, кашлю та чихання. Рабдовірусом передається зі слиною хворих тварин на укуси. Rabdoviruses, що причиною жовтої лихоманки, і вірус кліщового енцефаліту, поширюється через укуси кровосисних комах (комарів, кліщів, тощо).

Віруси бактерій (бактеріофагів) поширені у природі з вогнищ лізису різних типів бактерій. Помірні бактеріофаги поширюються прямим переходом від інфікованих материнської клітини до дочірньої клітини. Отже, в будь-якому місці існують різні види бактерій, актиноміцетів, бактеріофаги можуть поширюватися, aktino і cianofages, що конкретно їм удару.

Віруси заражають як вищі і нижчі рослини. Інформація про  віруси нижчих рослин дуже мало ще. Дослідженя у цьому напрямку зростають. Дослідження вірусів водоростей і грибів буде відігравати важливу роль у розвитку біологічних методів боротьби з заростання (цвітіння) декоративних вод, боротьба з грибами хвороб рослин тощо.

Поки гойдається більшість  вірусів буде тестуватися на вищі рослини, в основному на бобових і технічних зернових культур. Це пояснюється великими втратами, які викликають віруси цих економічних важливих культур. Вони не менші, ніж від захворювань, що передаються грибами. Відомо, наприклад, що втрати картоплі від інфекції готичної архітектури, приходимо до 50-80 смугасті й зморшкуватою мозаїці.

Близько 700 штамів вірусу, описані в літературі. Серед збудників цих хвороб добре вивчені більше 150. Більше 115 вірусів рослин включені в Україну. Віруси довгий час вважається високим конкретних агентів. В даний час вже відомо, що специфіка їх досить умовна. Ці факти свідчать про відсутність різкої межі між вірусами рослин і тварин після специфіку.

Великої шкоди завдають віруси зернових культур. В Україні вони відомі більше 10, і все ж в літературі описано близько 60 вірусів зернових. Більшість шкоди від смугастої мозаїки пшениці, мозаїки озимої пшениці, інсульту мозаїки ячменю, кукурудзи, мозаїка з кукурудзи і тому подібне. Щорічно вони призводять до значних втрат врожаю,під час епіфітотій тисячі тонн зерна, будуть втрачені.

Серед вірусів, які завдають великої втрати с/г, слід назвати точкою мозаїки (це ще ім'ям звичайної мозаїки) і готичної архітектури картоплі.

Останнім часом поширення  і завдає значної шкоди картоплі Україні готичної архітектури картоплі. Характерною ознакою цього захворювання є розміщення листи під більш гострим кутом до стебла, який дає рослин готичний вигляд. Вірус готичної архітектури передається при різанні бульб ножем, під час щеплення, через бульби, комахами тощо. Картопля самий вдарив готичної архітектури в місті Суми, Чернівці, Полтава та Південної областях України. Зниження продуктивності від цієї хвороби досягає тут і там понад 60%.

Вибору і застосування різних заходів боротьби з вірусами залежить насамперед від типу захворювання і виду рослин, на які він поширюється. Генеральні для боротьби з вірусами рослин такі заходи: 1) застосування у промисловості докази проти вірусів сортів рослин; 2) знищення комах та інших переносників вірусів; 3) ліквідація джерел поширення вірусів у природі (це  своєчасний обстріл стерні і zyableva оранка, знищення бур'янів, на полях, обмеження, сторони доріг, які є джерелом інфекції, дотримання оптимальних строків сівби і ведуть через антивірусних прополка насіннєвих посівів), 4) використання для посіву здорових без вірусу насіннєвий матеріал.

У минулому році серед профілактичних заходів, які запобігають зараженню рослин вірусів, поширення набуває вакцинації рослин (в основному закритому грунті) по гіпостенічний культур вірусів. Роботи інтенсивно проводяться також від оздоровлення рослин методів термотерапії (з використанням спеціальних камерах тепла), щоб отримати клонів без вірусів, хіміотерапія, культури вершині меристеми тощо.

Я скажу про вірус плямистого зів'янення томатів, була вперше описана в 1915 році. Вірус має широкий спектр господарів: заражає більш, ніж 900 видів рослин. Вірус механічно передаватися і не передається насінням. У природі, ВПУТ передається кілька видів трипсів. Культур, які постраждали від ВПУТ: квасоля, салат, арахіс, перець, картопля, тютюн, і помідор.

Ізоляти, які відрізняються в трипса передачу, симптоматичне і тяжкість симптомів були описані.

ВПВТ є причиною системної інфекції у більшості культур, кого вражає. Інфекція на ранніх стадіях росту рослин завдає найбільшої шкоди- гостра затримка в зростанні всього рослина, яка часто призводить до смерті. Впуть епідемій у арахіс, перець, тютюн, і помідор в південно-східній частині Сполучених Штатів викликало серйозні економічні втрати і змушені зрушення в виробничої практики. Втрати у зв'язку з ВПУТ спалаху в арахіса були оцінені в більш ніж 100 млн. дол США в Грузії тільки в СШ

2. Вірус плямистого зів'янення томатів

Вірус плямистого зів'янення томатів (ВПУТ, рис. 1), чума з величезними економічним наслідкам.Майже на всіх континентах і викликає важкі втрати в ряді економічно важливих харчових і декоративних культур, таких як салат, помідори, солодкий перець і хризантеми. Впуть має дуже широке коло господарів охоплюють як одно-і дводольних і передається різними видами трипсів (Thripidae, головний вектор Frankliniella occidentals). У зв'язку з відсутністю надійних методів для боротьби з інфекцією. Впуть залишається економічним фактором важливості.

Малюнок 1: вірус плямистого зів'янення томатів.

Група, Схематичне зображення вірусної частки. Мембрани конверт містить вірусну

глікопротеїнів (G1 і G2). Усередині конверта рибонуклеопротеидов (RNPs), що складається з вірусної РНК

incapsidated по нуклеопротеїдів (N) і  полімерази (L). Група B, Електронна  мікрофотографія очищеного вірусу

частинок. Група C, Електронна мікрофотографія  очищеного RNPs.

2,1 сегментовані негативні  ланцюг РНК вірусів

У рамках великого сімейства  членистоногих походження буньявірусов, ВПУТ є типовий вид рослинного зараження роду Tospovirus (Schmaljohn, 1996; табл. 1). Інших чотирьох родів у родині, Orthobunyavirus, хантавірусів, Nairovirus і Phlebovirus, складають патогенні мікроорганізми

тварин і людини. Члени буньявірусов сегментовані негативні нитки РНК-вмісних вірусів, так само як і осіб, що належать до родин Orthomyxoviridae (наприклад, вірусу грипу А) і Arenaviridae (наприклад, вірусом лімфоцитарного хоріоменінгіту), і плаваючі Tenuivirus (наприклад, рис смугою вірусу), Ophiovirus (наприклад, Вірус цитрусових) і Deltavirus (наприклад, вірусом гепатиту дельта) (табл. 1). Ці реплікації вірусів у цитоплазмі інфікованих клітин, і їх мРНК не поли, за винятком Orthomyxoviridae які реплікується в ядрі та полі мРНК.

Останнім часом членом іншого плаваючою роду вірусів рослин (Varicosavirus), салат-латук великих вен вірусу (LBVV), було показано, що Географічна (дводольні) негативному сенсі РНК геному (Sasaya та ін., 2001 і 2002). Цікаво, що цей вірус має багато спільних характеристик його реплікації і транскрипції стратегії з несегментованим Rhabdoviruses (Mononegavirales) (Sasaya та ін., 2004). LBVV віріонів не охопила, і його мРНК поліаденільованим. Цей рід, тому, здавалося б, представляють виключення з правила про сегментованих негативні нитки РНК-вірусів.

Особливості негативних вірусів  пасмо обговорюється нижче як видається, не застосовуються до Varicosa вірусів.

Таблиця 1: Класифікація негативних нитки РНК-вірусів.

Сегментовані негативні  ланцюг РНК вірусів геном двох (Arenaviridae) до восьми (Orthomyxoviridae) сегментів. Ці сегменти перевернутої додаткових Терміні, які можуть утворювати так звані жебракувати структуру таким чином кругової лінійних сегментів РНК. Вірусної РНК упакована в рибонуклеопротеидов комплексів (RNPs), які містять вірусної полімерази і сегментів РНК щільно incapsidated по нуклеопротеїдів. RNPs укладені в конверт ліпідної мембрани, яка містить вірусні глікопротеїни кодуванні (як показано на впуть на рис. 1). Помітним виключенням з цього правила є Tenuiviruses, які, інтригуюче, відсутність конверт але містять відкриті рамки зчитування (ORF) потенційно кодування для одного або кількох глікопротеїнів (де Міранди та ін, 1996; .. Естебрук та ін, 1996; Такахаші та ін., 1993).

Термін "негативний пасмо  вірусів" відноситься до кодування  стратегії їх геному сегментів. У  позитивній вірусів нитки вірусної РНК кодування або мРНК-сенсі  полярності, це означає, що зараження геномної РНК може бути легко переведена якщо це передбачено з 5 'структури кришки або внутрішні рибосомних сайті вступу (IRES). Негативні ланцюг РНК молекули повинні бути спочатку транскрибуватися з отриманням позитивних, кодування пасма. Для негативною ланцюг РНК вірусів транскрипції, таким чином, перший крок циклу вірусу посилення всередині інфікованої клітини, що пояснює наявність вірусної полімерази вірусу всередині частинок (Ван Poelwijk та ін., 1993).

У групі Географічна негативному  сенсі РНК-вмісних вірусів різних підгруп формується так званий вірусів Ambisense. Ці володіти хоча б одним геном сегмент, який має подвійний полярності, тобто містять один рамки зчитування у вірусної РНК сенсі і один в вірусної РНК додаткових. Arenaviridae, Tenuiviruses, і Tospo і Phlebovirus пологів буньявірусов є ambisense вірусів.

2,2 Структурні особливості  ВПУТ

Геному ВПУТ складається з великої (L), середній (M) і малі (S) РНК сегментів (рис. 2). 5 'і 3' терміналу 8 нуклеотидів (NT) кожного сегмента геному РНК є взаємодоповнюючими і зберігається: 5'-AGAGCAAU і 3'-UCUCGUUA. Термінал додаткових для кожного окремого сегменту поширюється на ~ 65 NT, дозволяючи освіта характерної структури жебракувати (De Haan та ін, 1989, 1990;. Kormelink та ін.).

L РНК 8997 нуклеотидів (NT) цілком негативною полярності і коди для вірусної РНК залежною РНК-полімерази (RdRp) або L білка (De Haan та ін., 1991). Це 331-кДа білок мається на увазі в кілька ферментативних активностей, таких як транскриптази, реплікази і ендонуклеази (Едкінс та ін, 1995;. Чепмена и др., 2003; Ван Poelwijk, 1996). 4821 NT М РНК сегмент має Ambisense полярності. Вірусний ланцюг (vRNA) з M кодів РНК для клітини до клітини руху білка NSm, і вірусні комплементарного ланцюжка (vcRNA) коди для глікопротеїну попередник GP, яка posttranslationally розщеплюється на шип або глікопротеїни G1 і G2 (аль Kormelink та ін., 1992a). Ambisense РНК сегмент 2916 NT коди для неструктурних білків (NSs) у вірусну нитку, і нуклеопротеїдів (N) в VC-сенсі (De Haan та ін., 1990). Останнім часом АПЛ було показано, що участь у придушенні гена глушника (Bucher и др., 2003;. Такеда і ін, 2002.), Постулюється захисний механізм організму проти вірусів.

Малюнок 2: геномної організації  та вираження стратегії впуть.

vRNA є вірусною РНК сенсі, vcRNA є вірусним додаткових РНК.  Відкриті рамки зчитування (ОРС)  є

свідчать білі коробки, не шаблонний лідер послідовностей чорні смуги.

Протилежно розташованих ОRF на Ambisense S і M РНК сегменти розділені міжгенних регіонів (IRS) у кілька сотень нуклеотидів. Обидва реєстратури містити довге протягом основному залишки слід довге протягом основному залишки U, і, за прогнозами, у великі стійкі структури шпильки (~ 120 б.п. для РНК, ~ 75 б.п. для M РНК; De Haan та ін ., 1990; Kormelink та ін, 1992a) .. Крім того, послідовність (CCAAUUUGG для S і GCAAACUUUGG для М), який зберігається між різними Tospoviruses розташований у верхній частині цих міжгенних шпильок (De Haan та ін, 1992;. Kormelink та ін, 1992a;. Maiss та ін,. 1991).

Хоча не всі етапи циклу впуть інфекції (Адкінс, 2000; Schmaljohn, 1996 і посилання в них) були вивчені, цикл вважається ході аналогічно тому, інших негативних нитки РНК-вірусів. Після введення впуть в рослинну клітину за своєю біологічною вектор (трипса), вірусна мембрана видалені і nucleocapsids звільняються в цитоплазму. RNPs є реплікативної і transcriptive одиниць впуть, що містять як шаблон і ферментів для цих процесів. RNPs всередині віріонів містять в основному вірусної (V) сенсі РНК, хоча незначні кількості вірусних додаткових (ВК) сенсі РНК були також виявлені у вірусних частинок (Kormelink та ін., 1992b). Первинна транскрипції цих RNPs таким чином результати в основному в вірусної мРНК білка L, глікопротеїн попередника, і білка N (Kormelink та ін., 1992b).

Малюнок 3: Прогноз структури  шпильки в міжгенних області (ІК) відрізка впуть РНК.

Високо / U-багаті міжгенних  області (NT 1484-1986), за прогнозами, утворюють  стійку структуру шпильки НТ

1583-1835. Нуклеотиди 1705-1713 формі  зберігається мотив послідовності.

2,3 TSWV інфекції циклу

Після достатнього виробництво цих білків, починається реплікація вірусного генома, виробляються повні копії довжина сегментів РНК геному. Як і вірус грипу А (Portela і Digard, 2002 р.), пул вільних розчинного білка впуть N можуть знадобитися для боротьби з припиненням щоб реплікації копій повнометражних геному, і може викликати перехід від транскрипції реплікації. VC-сегментів сенсі прямої транскрипції мРНК для NSs і NSm білків, в результаті якого повний набір вірусних білків в даний час синтезовані. Роль білка NSs вже давно загадковий, але останнім часом АПЛ було показано, що супресор гена глушника, необхідні для захисту вірусу проти анти-вірусного відповіді рослини від пост-транскрипції мовчання генів (PTGS) (Bucher та ін., 2003 року; Такеда і ін, 2002). Інші Bunyavirul NSs білків також відомості про участь в ухиленні від анти-вірусних Інтерферон відповідь господаря, але, крім того були маються на увазі в перекладі (Di Боніто та ін, 1999;. Саймонс та ін, 1992;. Watkins & Jones, 1993 ) і, зовсім недавно, в пух-регулюючої приймаючої мРНК переклад (Bridgen и др., 2001;. Колон-Рамос і ін, 2003) і клітини-господаря синтез РНК (Le травня і ін, 2004) ...

Знову реплікованих геному сегменти incapsidated N білка і невелику кількість білка L, формування нових RNPs. Ці RNPs перевозяться в сусідні клітини за допомогою  Nsm, вірусного білка руху, який індукує трубчастих структур на plasmodesma для полегшення переміщення вірусних RNPs через клітинну стінку (Kormelink та ін, 1994;. Бур та ін, 1995.). Таким чином, вірусна інфекція пошириться на сусідні тканини, в кінцевому підсумку призводить до системної інфекції.

Глікопротеїну попередника  протеолітичних відколу, отримуючи  дві зрілі білки, G1 і G2, які посттрансляційної глікозильованого і орієнтовані на апарат Гольджі (Kikkert та ін., 2001). Гольджі мембраною, що містить G1 і G2 обертають навколо новостворених RNPs для формування нових вірусних частинок, які оповиті подвійною мембраною і, отже, називається двічі оповитий вірусних частинок (розробників). Злиття зовнішньої мембрани цих розробників з мембрани ЕР, нарешті, призводить до накопичення одноразово оповитий вірусних частинок (SEVs) всередині великих бульбашок (аль Kikkert та ін., 1999). Ці віріони всередину шляхом подачі трипс, який став наполегливо інфіковані в результаті вірусної реплікації всередині вектора. Передача вірусу через зараження нових рослин шляхом подачі трипса почнеться новий цикл інфекції.

Малюнок 4: впуть множення циклу всередині рослинної клітини.

2,4 Replicational діяльності впуть  вириона отриманих та цитоплазматичних RNPs: перемикання між транскрипції та реплікації

У відсутність RLL, впуть віріонів тільки показують низькі рівні replicational діяльності, в той час як цитоплазматичні RNPs по всій видимості, збільшилися replicational діяльності, як це було відзначено синтез не тільки геномної РНК, але і M і L молекули РНК. У присутності РРЛ ситуація зворотна, тобто високої транскрипционной активності спостерігається з очищеною віріонів у той час навряд чи синтез РНК можна спостерігати на цитоплазматичній RNPs. Здавалося б, таким чином, що RNPs може існувати у двох різних конформацій: транскрипційні RNPs як справжній момент усередині віріонів і replicational RNPs в цитоплазмі. Наявність двох функціонально різних комплексів РНП було запропоновано раніше для вірусу грипу, на основі аналогічних спостережень різних рівнях синтезу РНК вириона між отриманих RNPs і стільникових RNPs (Skorko і ін., 1991).

Після введення даних в клітинку, RNPs необхідно брати участь у транскрипції для синтезу вірусних білків, а потім перейти до реплікації вірусного генома. При негативному сенсі РНК-вмісних вірусів, загалом, цей параметр був запропонований як створеного вірусних нуклеокапсида білка, який необхідний як antiterminator під час реплікації.

Проте останнім часом дослідження з лімфоцитарного хоріоменінгіту ареновірус (LCMV) показали, що хоча NP дійсно виконує важливу роль стимулюючого в обох процесах, підвищені концентрації НП не призвело до підвищення рівня реплікації в порівнянні з транскрипцією (аль Pinschewer та ін, 2003). . Таким чином, для LCMV перемикатися між цими процесами не становили стільникового концентрації НП. Цікаво, що два різних види RNPs недавно був виділений з клітин, інфікованих VSV, не сегментований негативні ланцюг РНК вірусу (Qanungo та ін., 2004). Один з них був транскриптази комплекс, що складається з вірусної РНК, полімеразна і нуклеокапсида білків, пов'язаних з декількома факторами господаря, і інших було реплікази комплекс, що складається з тільки (вірусний) РНК-полімерази і нуклеокапсида білка. Це схоже, вказує на перемикач опосередковано беруть факторів, які можуть бути схожі на сегментованих вірусів.

За аналогією з нуклеопротеїдів  інших негативних вірусів пасмо, впуть N білка може також функціонувати  як antiterminator під час реплікації. Низький replicational діяльності очищеного віріонів Таким чином, можна пояснити відсутність пул вільних розчинного білка N. Висока replicational діяльності очищеного цитоплазматичних RNPs З цієї точки зору видається, має на увазі наявність вільних розчинного білка N. Метод очищення RNP може дозволити використовувати для спільного очищення білків N, особливо якщо N форми RNP-структури, позбавлені РНК, як показано для вірусу грипу NP (Руігрок і Боден, 1995).

2,5 TSWV транскрипції

Для того, щоб бути переведені, вірусні мРНК вимагають або 5 'структури кришки або внутрішні рибосомних сайті вступу (IRES) (Галлі, 1998). Для цього, впуть перетворилася capstealing механізму, відомого як кришка вихопивши, за допомогою якого можна почати вірусної транскрипції. Cap вихопивши є загальним і ексклюзивним для сегментованих негативні нитки РНК-вмісних вірусів (огляд для Ambisense вірусів у Нгуен & Haenni, 2003). Цей механізм був досліджений для впуть великі дослідження в Планта (Duijsings та ін., 1999, 2001), в результаті чого модель для ініціації транскрипції, що зображена схематично (рис. 5). Обмежено 5'-кінця мРНК з приймаючою небудь або залишок G на 12-18 NT від обмежений 5'-кінці пов'язаний, ймовірно вірусної полімерази. Це або G є доповненням до кінцевої U або передостанній залишок С в вірусної шаблон, пропонуючи вимоги для одного спарювання підстав взаємодії. Чи пов'язані мРНК хост то endonucleolytically відколу вниз за течією від цього чи G залишку. У результаті обмежено лідера, імовірно в правильному положенні по спарювання підстав взаємодії з шаблону, потім подовжений для синтезу вірусної мРНК. Не всі деталі цієї моделі були підтверджені на впуть, але за аналогією з грипом вірусу Кап-обов'язковий і ендонуклеази діяльності, як вважають, перебувають у вірусній полімерази.

Малюнок 5: модель для кришки вихопивши  з впуть, запропонований Duijsings и др., 2001 ..

На відміну від вірусу грипу А мРНК, Bunyavirul мРНК синтезуються в цитоплазмі і, як правило, не поліаденільованим, із зазначенням різних механізму термінації транскрипції. Для повністю негативному сенсі orthobunya-, nairo і сигнали хантавірусів припинення видно, є G-або C-багатих ділянок, з або без консенсусу мотив (Eshita та ін, 1985;. Хатчінсон та ін, 1996;. Паттерсон і Kolakofsky, 1984). Проте, в більшості випадків ці сигнали були вивчені тільки для сегмента S з цих вірусів, і тому він залишився невідомим, чи є вони зберігаються для всіх трьох сегментів. Тільки Sin Nombre хантавірусів припинення було досліджено для всіх трьох сегментів і, що дивно, цей вірус, як видається, використовувати різні стратегії для кожного сегмента (Хатчінсон та ін., 1996). Припинення мРНК S-сегменті відбувається тільки вниз за течією від CCCACCC послідовність мотив, який зберігається між Ханта і Orthobunyaviruses. Ця послідовність мотив не можуть бути визначені в M і L геному сегментів. Відображення 3'-кінці мРНК L вказала, що вона була не менше, ніж геномної шаблону РНК, постановку мРНК не вимагає припинення сигналу.

M-сегмент мРНК поліаденільованим  на віруси Поліаденілювання-термінації  транскрипції і нагадує, що кілька інших негативних вірусів стружкою (Хатчінсон та ін., 1996). , Чи відображає це припинення механізм, аналогічний тому, який використовував вірусу грипу А, де заїкання від вірусної полімерази в комплексі U-тракту (5 до 7 залишків) призводить до синтезу полі (А) хвіст (Luo та ін., 1991 ;. Чжен і ін, 1999), як і раніше належить вивчити.

Транскрипція припинення Ambisense РНК сегменті phleboviruses як видається, не повинні бути однаковими. Реєстратур з phleboviruses Сандфлай лихоманка сицилійської (SFSV), лихоманка Ріфт-Валлі (RVFV), і Тоскана (TOSV) є G-багатих і не можуть утворювати стабільні вторинні структури. Термінації транскрипції цих вірусів відбувається поблизу мотив CCGUCG послідовність у шаблон, якому передує G-або С-шляхів (Георгій і ін., 1991). ІК Торо Пунта (PTV) phlebovirus РНК сегменті, за прогнозами, утворюють стійку структуру шпильки, і термінації транскрипції здається відбуваються поблизу верхньої частини 100-BP розміру шпилька (Emery & єпископ, 1987). Uukuniemi вірусу (UUKV) транскрипції закінчується на 3'-кінці ІК, що призводять до двох мРНК, які мають невелику 3'-стовбурових структуру циклу і доповнюють один одного на всю 3'-неперекладне області (УТР) (Simons & Петтерссон, 1991). Цікаво, що гексануклеотіда послідовності (CCGUCG), який зберігається для TOSV, RVFV і SFSV також знаходиться у верхній частині міжгенних шпильки ОТВ, а також у шаблон для транскрипції НЗ мРНК UUKV.

Для впуть, мРНК розміром оцінки на Північному помарки (~ 3,5 Кб для ДП, ~ 1,1 Кб для Нм, ~ 1,7 Кб для НЗ і ~ 1,2 Кб для N) передбачає, що розірвання договору відбувається десь в міжгенних області (De Haan та ін., 1990; Kormelink та ін, 1992b) .. Таким чином, два відомих особливостей ІК, шпильки і консенсусної послідовності, було запропоновано взяти участь у термінації транскрипції.

2,6 впуть транскрипції  в пробірці

Хоча значний прогрес  був досягнутий в останнє десятиліття  для характеристики впуть геному транскрипції та реплікації (Duijsings, 2001; Kormelink, 1994; Ван Poelwijk, 1996), багато деталей  цих процесів до цих пір залишається недосяжною метою. Для отримання більш глибокого розуміння цих процесів, дослідження, описаного в даній роботі вперше була спрямована на розробку функціонального аналізу в пробірці транскрипції. очищених віріонів, а також очищені цитоплазматичних RNPs впуть спостерігаються виконати обидва геному реплікацію і транскрипцію в пробірці. Який з цих видів діяльності відбувається, схоже, залежить від аналізу умов, тобто на наявність або відсутність ретикулоцитів кроля лізат (РРЛ).

Хоча впуть транскрипції ініціюється кришка вихопивши, відсутність  транскрипції в відсутність РРЛ, мабуть, була не з-за відсутності обмежений молекул РНК з додаванням обмежений молекул РНК тільки не зміг змусити транскрипції.

З цього випливає, що стимуляція транскрипції того РРЛ не пов'язане виключно з наявністю (фрагментовані) мРНК в цьому лізата. Використовувати як кришки донорів глобіну мРНК присутній у лізат а також екзогенно додав обмежений РНК показав, що спостерігається транскрипції дійсно справжні кришка вирвати ініціативи вірусної транскрипції. Крім того, це демонструє, що в пробірці аналізу транскрипції можуть бути використані для дослідження механізму ініціації транскрипції використанням змінюваних синтетичних обмежений РНК-транскрипти.

Залежність транскрипції в пробірці на наявність РРЛ раніше спостерігалося для Ла-Крос і Germiston Orthobunyaviruses, і було запропоновано на основі вимоги для стабілізації зароджується стенограма шляхом сканування рибосоми (Беллока & Kolakofsky, 1987; Vialat і Bouloy, 1992). Для впуть, проте, ніякого скорочення транскрипції спостерігалося при стенограма сканування рибосоми інгібується додаванням переклад інгібіторів. Крім того, не синтез білка можна було спостерігати в у пробірці реакція транскрипції, так як реакція умови не дозволяють переклад мати місце. Ці результати показали, що, на відміну від Ла-Крос і Germiston вірусів, впуть транскрипції в пробірці не пов'язані з перекладом. У цьому відношенні впуть може більше нагадують Сноушу зайця Orthobunyavirus, для яких транскрипції в природних умовах було встановлено, будуть порушені того перекладу інгібіторів (Eshita та ін., 1985). Фактором, який стимулює РРЛ впуть транскрипції не були визначені. Проте, одним із чинників господаря виявили, пов'язані з Вірус везикулярного стоматиту (VSV) транскрипційних RNPs (див. нижче) був переклад фактора елонгації-1alpha, заявив, що вона може бути тією або аналогічних факторів у РРЛ, який відповідає за стимулюючі впуть транскрипції в пробірці .

2,7 ініціації транскрипції: кришка вихопивши

Всі Географічна негативному сенсі РНК-вмісних вірусів вивчені до цих пір, за винятком Varicosaviruses, ініціювати транскрипції механізм кришки вихопивши. Поточної моделі для впуть кришка вихопивши (Duijsings и др., 2001;. Включає в себе єдину базу спарювання взаємодії між країнами-донорами кришки і вірусних шаблон Ця модель базується на спостереженнях в природних використанням змішаної інфекції рослин тютюну з обох впуть і вірусу мозаїки люцерни (. AMV), останній надання кришка донорів для ініціації транскрипції впуть Хоча трансгенні "P12" завод-системи (трансгенних рослин висловивши функціональних реплікази AMV; .. Taschner та ін, 1991), який був використаний дозволило деякі маніпуляції послідовностей кришка донорів, це був обмежений у природних-життєздатних мутантів про що свідчить поява ревертанти декількох мутантних послідовностей або дикого типу або інших мутантних послідовностей (Duijsings та ін., 2001).