Использование бесхвостых амфибий в биоиндикации природной среды

АНО НОУ «Волжский  университет им. В.Н. Татащева» (институт)

Экологический факультет

Кафедра биологии естественных наук

 

 

 

 

 

 

 

 

 

КУРСОВАЯ  РАБОТА

ПО ДИСЦИПЛИНЕ «БИОИНДИКАЦИЯ»

 

 

Тема: Использование  бесхвостых амфибий в биоиндикации

природной среды

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Исполнитель…………………………………………………………Г.В. Басова                                           Группа: ЭКОВ-601    

 

 

Руководитель

(доцент)………………………(                   )………Н.А. Зеленевская

 

 

 

 

 

 

ТОЛЬЯТТИ

2011.г

 

 

Аннотация

 

    Предложенная курсовая  работа содержит описание использования  бесхвостых амфибий в качестве  биоиндикатора. Обзор литературы  по изучаемой проблеме, которая  содержит информацию о многогранности  подходов к биоиндикации качества окружающей среды в системах экологического мониторинга и перспективах использования амфибий для этих целей.

    Всего в работе содержится 33 страниц текста, включая 5 таблиц, 10 рисунков и 15 литературных источников.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Содержание

 

 

Введение…………………………………………………………………………...4

Глава 1. Материалы и методы исследования

1.1 Критерии отбора амфибий для  биоиндикации...............................................5

1.2 Выбор показателей, пригодных для индикации…………………………….6

1.3 Методики отбора проб………………………………………………………..9

1.4  Цели и задачи исследования………………………………………………..11

1.5  Практическая значимость  результатов…………………………………….11

1.6 Основные положения………………………………………………………..12

Глава 2. Материал и методы исследования

2.1 Характеристика районов исследования……………………………………12

2.2 Особенности химического состава  воды в исследуемых водотоках…….14

2.3 Структура популяций амфибий………………………………………….....15

2.3.1. Численность амфибий………………………………………………….....15

2.3.2. Половая структура популяций…………………………………………...16

2.3.3. Фенетическая структура популяций……………………………………..17

2.4 Морфологические и морфофизиологические  изменения амфибий……...18

2.4.1. Морфологические показатели  амфибий на фоне антропопрессии…….18

2.5. Стабильность развития……………………………………………………..26

Выводы…………………………………………………………………………...30

Практические предложения………………………………………………….….31

Список литературы……………………………………………………………....32

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Введение.

 

   Земноводные – самый  малочисленный класс позвоночных  ( в мире фауне 3373 вида). На территории  России обитает всего 33 вида, большинство  из которых является узкоареальными, имеет небольшую численность  и подлежит охране. По- видимому  это явилось одной из причин  немногочисленных исследований  по применению этой группы  животных в качестве индикаторов  окружающей среды. Однако в  последние годы появился ряд  работ, авторы которых, используя  различные подходы и методы, обосновывают  положение о возможности использования  земноводных для целей мониторинга; (Вершинин, 1983; Кубаниев, Жукова, 1982; Бугаева, 1983; Шарыгин, 1979 и др.). Анализируя  имеющиеся литературные и собственные  материалы, рассмотрим критерии, по которым определяется пригодность  амфибий как биоиндикаторов.

   Одним из современных  и наиболее перспективных методов  экологической оценки качества  окружающей среды является биоиндикация. Биоиндикация позволяет выявить   степень и интенсивность воздействия  загрязнителей, а также проследить динамику деградации экосистем во времени и пространстве и выразить это в интегральной форме. Естественные реакции организма животных на качество окружающей среды часто могут быть экстраполированы на человека ( Sigel, 1980; Тарасенко и др., 1985; Пескова, 2002; Замалетдинов, 2003).

   Преимущества использования  биоиндикаторов для интегральной  оценки биосистем разного уровня  сложности в том, что они  реагируют не только на отдельные  загрязнители, но и на весь  комплекс воздействующих веществ  определенными реакциями организма  в целом ( Лыдня, Пилипенко, 1993; Пескова, 2002; Файззулин, 2004).

   Всем требованиям, предъявляемым  к видам, использующимся для  биоиндикации, отвечает озерная  лягушка (Rana ridibunda Pall.) – широко распространенный вид амфибий в Европейской части России (Чубинишвили, Захаров, 2000). Вид обладает четкими и удобными для исследования  признаками,  его икра и личинки чувствительны к загрязнителям ( Ilosvay, 1977; Freda, Dunson, 1985; Pierce, 1985; Gunter, Plotner, 1986; Вершинин, 1995).    Морфофизиологических параметры организма амфибий отражают состояние локального места обитания. У амфибий отсутствует выраженная тенденция к миграции, для них характерен высокий уровень полиморфизма, - все эти факторы позволяют успешно использовать R. Ridibunda Pall. в качестве вида – биоиндикатора.

 

 

 

 

 

 

 

Глава 1. Материалы и методы исследования

 

1.1 Критерии отбора амфибий для биоиндикации.

 

1. Широкое распространение. Ареал должен охватывать различные ланшафтно – климатические зоны, включая лесотундровую и лесостепную. Узкоареальные, исчезающие, подлежащие охране  виды не могут быть использованы.
2. Обитающие на нашей территории виды имеют в основном небольшие размеры (15-20 г), поэтому их численность должна быть достаточной для сбора необходимых материалов. Здесь также надо учитывать разрешающую возможность метода. Для микроэлементного анализа минимальная величина навески должна составлять около 5 г сухого веса (2-3 г золы) какой- либо ткани организма.
3. В силу биологических особенностей ( несовершенное строение наземных органов дыхания, постоянное испарение влаги с поверхности кожи и др.) ограничивающим фактором для земноводных является влажность, а отсюда их приуроченность к влажным биотопам, отсутствие больших миграций. Это позволяет использовать амфибий в качестве объекта степени загрязненности организмов в соответствии с развитием определенного вида промышленности.
4. Принадлежность к нескольким звеньям трофодинамической цепи. В этом плане амфибии занимают особое место. Взрослые животные являются хищниками. Они поедают те объекты, которых в данной местности много. В их рацион входят насекомые ( комары, москиты, оводы, слепни и их личинки), моллюски, черви и даже позвоночные. Сами земноводные являются пищей для некоторых, видов пресмыкающихся и млекопитающих (Шварц, 1948). Личинки амфибий питаются, в основном, растительной пищей (диатомовые и зеленые водоросли и другие водные растения). Животный корм в их рационе составляет небольшой процент. Являясь консументами I, II, III порядков, земноводные выполняют связующую роль между трофическими звеньями водных и наземных экосистем (Гаранин, 1977). Как правило отходы промышленности распространяются на значительные территории и весной с помощь талых во и осадков смываются в понижение, где концентрируется в почве, или в водной и прибрежной растительности, и развивающиеся там личинки земноводных могут явиться первым звеном в транспорте токсикантов вышестоящие звенья трофической цепи.
5. Непременное условие используемых для целей мониторинга видов – это их принадлежность к естественным сообществам. Поэтому не следует отлавливать животных в садах, огородах, вблизи поселков, на урбанизированных территориях и т.д. В результате длительного контакта с человеком у животного могут вырабатываться определенные приспособления  к действию различных токсикантов, а также выведения их из организма.
6. Для сбора материала по амфибиям не  требуется сложных и дорогостоящих материалов и инструментов. При достаточной численности взрослых животных можно отлавливать без каких- либо приспособлений или с помощью канавок и цилиндров; головастиков с помощью сачка.   

                                  

1.2 Выбор показателей, пригодных для индикации.

 

              При выборе органов и тканей, пригодных для взятия  проб  на загрязненность, следует учитывать  размещение животных на территории, особенности развития, функциональное  значение органов и тканей, их  способность аккумулировать различные  токсиканты. Следует также иметь  в виду, что в воде токсические  вещества способны находиться  в растворенном виде и проникать  в организм через кожные покровы.

   В качестве критерия оценки  загрязненности организма можно  использовать содержание, распределение  и динамику микроэлементов, в  отдельных органах и тканях  и в целом организме. У взрослых  амфибий для определения содержания  микроэлементов используют кости,  мышцы, печень, гонады. С помощью  методики полуколичественного эмиссионного  спектрального анализа можно  определить до 40 химических элементов  (Шарыгин, 1979). Однако при определении  микроэлементов для одной пробы  требуется не менее 10 особей  из одного пункта. По понятным  причинам в антропогенном ландшафте  сделать это не только трудно, но и нежелательно. Следует учитывать  и реакцию животных на возмущающие  факторы: взрослые особи менее  чувствительны, чем организмы  в период закладки формирования  органов и систем (Айверсон, 1979). Поэтому  полагаем, что наряду со взрослыми  животными (где это возможно) следует  использовать в качестве биоиндикаторов  личинок амфибий. 

   Используя яйца и личинок  амфибий в качестве тест –  объекта также имеется в виду  возможность параллельной постановки  модельных опытов и наблюдений  в природе. Кроме того характерные  изменения, происходящие у амфибий  в течение постэмбрионального  развития, осуществляется путем  метаморфоза, легко поддаются  качественному и количественному  определению. Поэтому для оценки влияния загрязнения на отдельные организмы и состояние популяции в целом в качестве параметров можно использовать: выживаемость яиц и личинок, морфологические (размеры печени), цитологические (размеры гепатоцитов, их ядер, цитоплазмы, наличие или отсутствие липосом) показатели и уровень обмена сеголеток.

 

1. Для учета эмбриональной смертности амфибий лучше всего использовать икру лягушек, которые откладывают ее в виде комка. Как правило, развитие яиц в кладке проходит дружно и к концу эмбриогенеза легко подсчитывать количество нормально развившихся, недоразвившихся и погибших яиц. В подверженных загрязнению водоемах смертность бывает значительно выше (иногда в 2-4 раза), чем в норме. Однако при этом необходимо учитывать температуру воды. Длительное воздействие низких температур (0⁰) оказывает губительное действие на развивающиеся яйца даже северных популяций лягушек (Herreid. Kinney, 1996).

   Используя  в качестве показателя личиночную  смертность следует учитывать  такие факторы, как наличие  хищников, плотность личиночных  популяций, стадии развития. Личиночную  смертность в естественных условиях  учесть трудно. Она мало заметна  и проявляется лишь в случае  массовой гибели. Однако, присутствие  в воде повреждающих факторов  сказывается на внешнем облике  головастиков. К концу личиночного  периода развития они имеют  не характерную для них грушевидную  форму тела, отечные и гиперемированные  задние конечности, сильно выступающий  осевой скелет. Встречаются животные  с искривленными хвостами, с белыми  пятнами на коже, со сползающим  с хвостового плавника эпидермисом.  Наиболее распространенные изменения,  головастиков из загрязненных  водоемов – отечность брюшной  полости и вздутый, заполненный  слизью кишечник. Такие животные  к концу личиночного периода  развития, при смене среды обитания  элиминируют из популяции.

2. Наряду с антропогенными факторами на темпы роста и развития личинок амфибий оказывают влияние температура, химизм воды, сроки икрометания, плотность популяции, продукты метаболизма животных, кормовые ресурсы, в результате действия которых увеличивается вариабельность исследуемых показателей. Высокий коэффициент вариации или его резкое снижение в середине личиночного периода развития может служить лишь сигналом неблагополучного состояния популяции. Поэтому использование скорости роста и развития в качестве самостоятельных параметров для оценки степени загрязнения среды не представляется возможным. Однако, экспериментальные и полевые исследования, проведенные нами, позволяют считать, что изучение в комплексе скорости роста, относительно прироста и вариабельности размеров тела на протяжении всего периода личиночного развития с учетом внешних факторов может служить оценкой состояния популяции.
3. Печень – мультифункциональный орган, выполняющий экскреторную, трофическую, защитную, кроветворную и др. функции. Токсические вещества, попадающие в организм, в первую очередь накапливаются в печени и богатых липидами тканях. (Барбье, 1978). Одним из наиболее чувствительных показателей, реагирующим на повышенное содержание в среде микроэлементов, С.С. Шварц (1954) считает относительные размеры печени. При этом отмечает неоднозначность действия различных микроэлементов на весовые показатели в период раннего онтогенеза. Так, повышенное содержание в воде меди вызывает резкое увеличение, а никеля – торможение роста печени у головастиков остромордой лягушки. Наблюдения, проведенные в природе, в условиях техногенного ландшафта показали, что относительные размеры печени могут увеличиваться до 60-70%, что превышает контрольные показатели на 10-30% (Пястолова и др., 1981). Учитывая, что большинство личинок амфибий развиваются в небольших водоемах и лужах, питаются в основном за счет талых вод и атмосферных осадков, и способность их печени концентрировать токсиканты, считаем возможным использовать относительный вес печени в качестве критерия оценки загрязнения организма.
4. Из ранних работ (Самохвалова, 1929) известно, что внешние и внутренние факторы, нарушающие физиологическое состояние организма, оказывают влияние на размер клеток. Однако сведений о влиянии химических веществ на размеры гепатоцитов, ядер и их соотношение крайне мало (Вермель, 1940). Под влиянием промышленных загрязнений клетки печени могут изменяться, при этом увеличивается размер ядра, а цитоядерное соотношение уменьшается. В  Благоприятных условиях клетки имеют тенденцию сохранять постоянное отношение между цитоплазмой и ядром. Экспериментально установлено, что в слабых растворах некоторых химических соединений (сульфат меди, сульфат натрия, хлористый натрий) в среднем клетки печени сеголеток больше варьировали, чем у контрольных животных, и количество клеток более крупных размерных классов было выше. В растворах этих же солей, но сильных концентраций, средние размеры гепатоцитов меньше. По-видимому, это связано с более жестким отбором, высоким уровнем обмена и интенсивным расходованием питательных веществ. Цитологический анализ животных из загрязненных водоемов подтвердил результаты экспериментов.

   Таким  образом, цитологические исследования  печени выходящих на сушу сеголеток  являются хорошим показателем  состояния популяции, подверженной, влиянию антропогенных загрязнений.  Увеличение ядер в первую очередь  свидетельствует о загрязнении  водоемов, и для скорости проверки  состояния популяции можно использовать  только этот показатель.

5. К началу метаморфического климакса в гепатоцитах увеличивается содержание  гликогена, полисахаридов, липидов (Quetant 1973 и др.). Также была высказана мысль о том, что пока личинка не сделают минимального запаса энергии, их метаморфоз невозможен (Crump? 1981). Исследуя клетки печени, нетрудно проследить за содержанием в них липидов и использовать этот показатель в качестве индикатора загрязнения среды. Исследованиями В.А Бугаевой (1983) обнаружено начало жировых включений в гепатоцитах головастиков остромордой лягушки в «чистых» водоемах на 25-26 стадиях развития, в водоемах, подверженных антропогенному загрязнению, позднее- на26-27 стадиях. В период метаморфического климакса, когда животные не питаются, а затраты энергии в связи с перестройкой личиночных органов и тканей увеличиваются, идет интенсивное расходование жировых запасов. В клетках животных из «чистых» водоемов липиды сохраняются после окончания метаморфоза. Таким образом, развитие животных под воздействием неблагоприятных факторов сопровождается замедление процесса накопления и интенсивным расходом липидов в период метаморфического климакса. Это снижает жизнеспособность молодых особей, рекрутируемых в популяцию.
6. Наряду с перечисленными параметрами при выборе критериев оценки загрязненности среды и влияния на биоту может быть использован уровень обмена веществ. Показано, что интенсивность обмена животных, развитие которых проходило в антропогеном ландшафте, выше, чем сеголеток из «чистых» районов. Это в свою очередь ведет к увеличению энергозатрат и отражается на выживаемости животных.  

             

1.3 Методики отбора проб.

 

   Для оценки состояния популяции амфибий в районе действия промышленных предприятий, прежде всего, необходимо подобрать водоемы, которые являются местами икрометания. Они должны находиться на различном расстоянии от источника эмиссий. Это позволит проводить анализ в сравнительном плане. Необходимо давать полное описание водоемов (форма, площадь водного зеркала, глубина, освещенность, температура воды, характер грунта, происхождение, месторасположение относительно источника загрязнения, видовой состав растений и животных, гидрохимический анализ воды и грунта).

   Лягушки обычно откладывают  икру в неглубокие, хорошо прогреваемые  солнцем водоемы или заводи, где  нет сильного течения. Кладка  икры около суток может лежать  на дне; затем всплывает. За  развитием икры легко проследить  и в природе, в условиях лаборатории.  В зависимости от возраста  и вида самка откладывает, от 500 до 2750 яиц. В оптимальных условиях  выклев личинок происходит на 4-5 сутки. В этот момент кладку  следует взять из водоема, поместить  в кристаллизатор и подсчитать  соотношение вылупившихся личинок,  недоразвившихся и погибших яиц.  Обычно из одного водоема исследуется  не менее 5 кладок. Затем исследуемые  кладки возвращаются в водоем.

   Начальная плотность (число  личинок на 1 л воды) определяется с помощью следующих параметров: примерного объема воды в водоеме, количество кладок и среднего числа яиц в кладке с учетом их выживаемости. В конце периода, перед метаморфозом плотность личинок определяется с помощью биоценометра. Подсчитывается количество личинок, попавших в объем воды биоценометра в момент измерения. Плотность можно определить и с помощью мечения головастиков нейтральным красным (Северцов, Сурова, 1979).

   Количественный учет завершивших  метаморфоз и выходящих на  сушу животных сопряжен с большими  трудностями. Для их учета   используются все подручные средства, укладывая по периметру водоема  доски, палки, ветки, под которыми  обычно прячутся первые 10-12 часов  после выхода на сушу животные. Под этими укрытиями их достаточно  легко учесть. Подсчет следует  проводить не менее трех раз  в сутки и таким образом  можно установить процент вышедших  на сушу животных по отношению  к отложенной икре, процентное соотношение морфотипов, морфологические аномалии, динамику сроков развития всей популяции личинок.

   Для получения данных  по динамике роста и развития  личинок еженедельно из разных  участков водоема сачком берется  проба не менее 30 особей, длина  тела каждого животного измеряется  штангенциркулем с точностью  до 1 мм, взвешивание производится на торсионных весах с точностью до 1 мг. Предварительно каждое животное обсушивается фильтровальной бумагой. Величину относительного прироста массы тела личинок за каждые 7 дней определяли по формуле:

       

Где v₁ и v₂ – средний вес выборки животных в начале и в конце периода соответственно (Шмальгаузен, 1935). Стадия развития определяется по классификации П. В.Терентьева (1950). После взятия промеров животные возвращаются в водоем. После резорбции хвоста и выхода, животных на сушу из каждого водоема берется, проба 30 особей для морфофизиологических исследований. Сеголетки взвешиваются, измеряются, умерщвляются декапитацией, вскрываются, определяется вес печени, готовятся ее препараты. Работа выполняется в соответствии с «Правилами проведения научных исследований с использованием экспериментальных животных», утвержденными распоряжением Президиума АН СССР от 2 апреля 1980 г. № 12200-496.

   Печень сеголеток – самый  крупный, хорошо препарируемый  орган, в норме темно- красного  цвета. Взвешивание производится  на торсионных весах, индекс  печени определяется как отношение  веса печени к весу тела, выражается  в промилях.

   Исследование цитологических  показателей производится по  следующей методике. На чистое  обезжиренное предметное стекло  наносятся отпечатки печени (мазки  или растирание между стекол  приводят к сильному повреждению  и деформации клеток) и 5 минут  фиксируют метанолом. Препараты  окрашиваются по методу Романовского (Ромейс, 1953). По этой методике  препараты изготавливаются быстро  и сохраняют свои исходные  качества несколько лет.

   С помощью рисовального  аппарата РА-4 при увеличении светового  микроскопа 10х20 с каждого препарата  зарисовывается 100 клеток. Измерение  цитоплазмы и ядра производится  по двум перпендикулярным диаметрам,  вычисляется площадь проекции  клеток по формуле S круга. Определение сроков исчезновения липосом производится следующим образом. Из каждого водоема отлавливали 50 особей 30 стадий развития, через сутки животных, достигших 31 стадии развития, помещали в отдельный кристаллизатор. Животных не кормили, содержали при температуре 20⁰ С, ежедневно вскрывали, готовили препараты печени и определяли наличие липосом.

   Газообмен у сеголеток  определяли по качеству выделенного  CO₂  с помощью оптико-акустического газоанализатора 0А- 550I (Добринскяй, Малафеев, 1974).Учитывая существенные различия размеров сеголеток, при вычислении дыхательного обмена исходили из известного правила Рубнера (количество выделенного CO₂ относили к величине, определяемой как час, где P – вес животного). После намерения уровня метаболизма животных выпускают в район их изъятия.

   Итак, для контроля за  изменениями, происходящими в  природной среде в результате  хозяйственной деятельности человека  в комплексе видов – индикаторов,  наряду с другими группами  животных целесообразно использовать  амфибий. При этом следует учитывать  влияние среды, как на ранние  этапы онтогенеза, так на взрослых  животных. Получение объективной  оценки в каждой конкретной  ситуации возможно только при  использовании совокупности показателей.

 

1.4  Цели и задачи исследования.

Цель исследования – выявить наиболее информативные морфо-  физиологические, цитогенетические, популяционные параметры вида

Rana ridibunda Pall. и обосновать эффективность  их использования для биоиндикации  экологического состояния водотоков.

    Для достижения поставленной  цели решались следующие задачи:

1. Исследование водотоков на  содержание тяжелых металлов  в воде.

2. Характеристика структуры популяций  R. ridibunda Pall.

3. Отбор информативных для биоиндикации  морфофизиологических параметров

R. ridibunda Pall.

4. Выявление основных фенодевиантов

5. Оценка стабильности развития  популяций R. ridibunda Pall.

 

1.5  Практическая значимость результатов

 

    Выявлены морфофизиологические  и генетические особенностей амфибий, которые позволяют оперативно провести биоиндикацию экологического состояния водотоков. Выявленный комплекс характеристических параметров может быть использован при проведении экологического мониторинга и в системах экологического прогнозирования. Полученные результаты могут рассматриваться как базовые при экологической оценке водотоков Ульяновской области.

 

1.6 Основные положения.

 

1. R. ridibunda Pall. является высокоинформативным биоиндикатором экологического состояния водотоков.

2. В неблагоприятных экологических  условиях, регистрируется широкий  спектраномалий развития R. ridibunda Pall., снижается численность популяций, смещается половое соотношение, нарастает доля морфы striata.

3. Организм R. ridibunda Pall. реагирует на  загрязнение водотоков комплексом  морфофизиологических реакций, проявляющихся  в уменьшении размеров тела, увеличении  индексов сердца и почек, снижении  индексов печени, селезенки, и общей упитанности, обусловленных нарушением морфофизиологического и цитогенетического гомеостаза.

 

Глава 2. Материал и методы исследования.

 

2.1 Характеристика районов исследования

     Исследования проводились  в Ульяновской области в 2004-2007 гг. Объектом изучения являлась озерная лягушка (R. ridibunda Pall.).

    В качестве загрязненного  водотока была выбрана р. Свияга, а экологически

чистого водотока – р. Уса.

    В Кузоватовском районе  Ульяновской области берет начало р. Свияга. На территории Ульяновской области имеет протяженность 216,4 км, является правым притоком Волги. Русло реки извилистое, ширина 20-30 м, средняя глубина на перекатах 0,6 м, на плесах 1,3 м. Река сильно загрязнена. В Тереньгульском районе Ульяновской области берет начало р. Уса. В своем течении она сходна с р. Свияга, является экологически чистым водотоком. Долина реки пойменная, шириной до 3-4 км.

    Для выявления адаптаций,  возникающих под действием загрязнения водотоков у представителей вида R. ridibunda Pall., нами было проведены исследования на трех уровнях: на уровне популяции (оценивалась численность, половой и фенетический состав), на уровне особи (оценивалась морфология, физиология и стабильность развития) и на уровне клетки (оценивалась стабильность ядерных структур) (рис. 1).

    Степень загрязнения  воды тяжелыми металлами определяли  в отделе химико-аналитического  контроля растениеводческой, пищевой  продукции и кормов ФГУ «Станция Агрохимической Службы г. Ульяновска». В 2004-2006 гг. были проведены анализы воды из мест обитания озерной лягушки на содержание тяжелых металлов. В исследуемых образцах определяли общее содержание таких элементов, как медь, свинец, кадмий, цинк, хром, никель. Анализы проводились атомно-абсорбционным методом.

 

 

Рис. 2. Направления  исследований

 

    Определение видового  и количественного состава амфибий проводилось прижизненно по стандартной методике (Кузьмин, 1999; Земноводные…, 2001) на каждых 100 м береговой линии. Половую и фенетическую структуру популяций озерной лягушки анализировали весной без умерщвления животных и изъятия их из мест обитания (Kabisch, 1990). Полиморфизм полученных выборок изучался по соотношению в популяциях морф striata – полосатая особь, со светлой дорсомедиальной полосой на спине и maculata - пятнистая особь (Жукова, Кубанцев, 1976; Щупак, 1977).

    Измерения стандартных  морфологических параметров проводилось с помощью штангенциркуля с точностью до 0,1 мм (Определитель земноводных.., 1977).

    Измерялись 9 показателей по Н.В. Ковылиной (1999). Оценивались средние значения морфологических параметров, коэффициенты вариации. При сравнении средних величин параметров использовался критерий Стьюдента (Sokal, Rohlf, 1981).

    Для выявления физиологического  состояния амфибий рассчитывали  индексыорганов (Шварц и др., 1968). С помощью электронных весов  определялась масса тела, затем производилось вскрытие и изъятие внутренних органов (сердца, печени, почек, селезёнки), взвешивание 1_их на электронных весах (с точностью до 0,001 г). Индекс упитанности, рассчитывали по Г.В. Никольскому (1974). Все расчеты проводили отдельно для самцов и самок.

    Типовая принадлежность  аномалий определялась по общепринятым классификациям (Borkin et al., 1986; Вершинин, 1989; Lada, 1999). Показатель разнообразия типов аномалий (μ) и долю редких типов аномалий (h) рассчитывали по Л.А. Животовскому (1982).

    Оценку стабильности  развития проводили по показателю  флуктуирующей

асимметрии (Чубинишвили, 1998; 2001). Всего  было использовано 13 стандартных признаков. В качестве показателя асимметрии для межпопуляционного сравнения использовалась средняя частота асимметричного проявления на признак (ЧАПП) (Leary et al., 1983; 1984; Чубинишвили, 1998; 2001). Статистическая значимость различий между выборками оценивали по t-критерию Стьюдента (Sokal, Rohlf, 1981). Степень загрязнения водной среды от нормы определяли по нарушению стабильности развития, основанной на флуктуирующей асимметрии, и оценивали по пятибалльной шкале (Чубинишвили, 1998).